人民教育出版生物選修一專題目5《DN和蛋白質(zhì)技術(shù)》學(xué)案

1、專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)學(xué)習(xí)導(dǎo)航DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)，包括DNA的提取、蛋白質(zhì)的提取、DNA片段的擴增等，是開展分子生物學(xué)研究的基本技術(shù)。本專題將從基礎(chǔ)入手，學(xué)習(xí)DNA的粗提取、PCR技術(shù)和血紅蛋白的提純。學(xué)習(xí)這些技術(shù)，不僅能夠幫助學(xué)生初步了解分子生物學(xué)的基本實驗方法，而且能夠鞏固必修課中學(xué)習(xí)的有關(guān)DNA和蛋白質(zhì)的理論知識。本專題的3個課題相對獨立，沒有嚴(yán)格的先后順序。課題1的操作難度不高，學(xué)生比較容易獲得結(jié)果。課題2的操作難度也不高，但PCR技術(shù)的原理是難點，學(xué)生要充分利用教材的圖文資料，并且在教師的引導(dǎo)下進行實驗操作。課題3的操作難度比較大，所以學(xué)生一定要在教師的精心指導(dǎo)下完成操作。課題1

2、 DNA的粗提取與鑒定導(dǎo)學(xué)誘思1提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是 。對于DNA的粗提取而言，就是要利用 、 等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。1）DNA的溶解性 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的 中溶解度不同，利用這一特點，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使 充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達到分離目的。 書本圖51是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線，請根據(jù)曲線圖，思考：在什么濃度下，DNA的溶解度最??？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？此外，DNA不溶于 溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精

3、。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進一步的分離。2）DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性 蛋白酶能水解 ，但是對 沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080oC的高溫，而DNA在 以上才會變性。洗滌劑能夠瓦解 ，但對DNA沒有影響。3）DNA的鑒定 在 條件下，DNA遇 會被染成 色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。2實驗設(shè)計1）實驗材料的選取 凡是含有 的生物材料都可以考慮，但是使用 的生物組織，成功的可能性更大。在下面的生物材料中選取適合的實驗材料：魚卵、豬肝、菜花（花椰菜）、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基的大腸桿菌思考：哺乳動物的紅細(xì)胞的特點？2）破碎

4、細(xì)胞，獲取含DNA的濾液 動物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的 ，同時用 攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實驗材料是植物細(xì)胞，需要先用 溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的 和 ，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。思考：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響?此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？3）去除濾液中的雜質(zhì) 閱讀課本的三個方案，思考：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？方案二與方案三的原理有什么不同？4）DNA的析出與鑒定 將處理后的溶液過濾，

5、加入與濾液體積 、冷卻的 ，靜置 ，溶液中會出現(xiàn) ，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒 攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為 的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的 ?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜?中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變 。3操作提示以血液為實驗材料時，每100ml血液中需要加入3g ，防止 。加入洗滌劑后，動作要 、 ，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要 ，以免 ，導(dǎo)致DNA分

6、子不能形成絮狀沉淀。二苯胺試劑要 ，否則會影響鑒定的效果。4結(jié)果分析與評價疑難點撥1 DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系：當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，隨濃度的升高，DNA的溶解度降低；當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時，隨濃度升高，DNA的溶解度升高。2 制備雞血細(xì)胞液時，要在新鮮的雞血中加入檸檬酸鈉的原因制備雞血細(xì)胞液時，要在新鮮的雞血中加入抗凝劑檸檬酸鈉，防止血液凝固。其原理是檸檬酸鈉能與血漿中Ca2+發(fā)生反應(yīng)，生成檸檬酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的Ca2+大大減少，血液便不會凝固，因為雞血紅細(xì)胞，白細(xì)胞都有細(xì)胞核，DNA主要存在于細(xì)胞核中，所以在離心或靜置沉淀后，要

7、棄出上層清液血漿。3提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實驗成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；第三步是DNA的純化，即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開；最后一步是對DNA進行鑒定，這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。4盛放雞血細(xì)胞液的容器，最好是塑料容器。雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會更少。因此，實驗過程中最好

8、使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程的DNA的損失。典例解析本實驗中有三次過濾：過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液過濾含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 過濾溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次過濾分別為了獲得（ ）A含核物質(zhì)的濾液、紗布上的粘稠物、含DNA的濾液B含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、含DNA的濾液C含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、紗布上的DNAD含較純的DNA濾液、紗布上的粘稠物、含DNA的濾液 課堂演練一、選擇題（10個）1.在研究DNA的基因樣本前，采集來的血樣需要蛋白水解酶處理，然后用有機溶劑除去蛋白質(zhì)。用蛋白水解酶處理血樣的目的是（ ）A.除去血

9、漿中的蛋白質(zhì) B.除去染色體上的蛋白質(zhì) C.除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)D.除去血細(xì)胞中的所有的蛋白質(zhì)，使DNA釋放，便于進一步提純2與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（ ）A.操作時緩緩滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度 B.在操作A時，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證DNA分子完整 C.加蒸餾水可同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出D.當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，此時NaCl的濃度相當(dāng)于0.14mol/L3洗滌劑能夠瓦解（ ），但對DNA沒有影響。A.細(xì)胞壁 B.細(xì)胞膜 C.細(xì)胞核 D.細(xì)胞質(zhì)4在沸水浴的條件下，DNA遇（ ）會被染成藍(lán)色。A.斐林試劑 B.蘇丹染液 C.雙縮脲試劑 D.二苯胺5在

10、DNA提取過程中，最好使用塑料試管和燒杯，目的是（ ）A.不易破碎 B.減少提取過程中DNA的損失 C.增加DNA的含量 D.容易洗刷6下列操作中，對DNA的提取量影響最小的是（ ）A.使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質(zhì)B.攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌C.在“析出DNA粘稠物”時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻E在DNA的溶解和再溶解時，要充分?jǐn)嚢?DNA的粗提取中，將與濾液體積相等的、冷卻的（ ），靜置23min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物。A.09%的NaCl B.0.14mol/L的NaCl

11、溶液 C.質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的HCl D.體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液8.以血液為實驗材料時，需要向血液中加入（ ），防止血液凝固。A.醋酸鈉 B.龍膽紫 C.檸檬酸鈉 D.醋酸洋紅9.在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（ ）A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解雜質(zhì)的速度 C.減少DNA的溶解度，加快DNA析出 D.減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出10.去除濾液中的雜質(zhì)時，直接在濾液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的（ ）分解蛋白質(zhì)。A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.木瓜蛋白酶 D.腸肽酶二、非選擇題（3個）1提取雞血中DNA時，要除去血液中的上清液，這是因為什么？2填寫本實驗完成下列

12、實驗操作時所用試劑。提取雞血細(xì)胞中核物質(zhì) 溶解核內(nèi)DNA： 析出2mol/LNaCl溶液中的DNA DNA粘稠物的再溶解 提取雜質(zhì)較少的DNA白色乳狀絲狀物 DNA的鑒定 3.關(guān)于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經(jīng)過了多次實驗效果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因是什么？請回答下列問題：雞血細(xì)胞中紅細(xì)胞 ，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中 細(xì)胞數(shù)目較多，可以提供豐富的 。實驗前由老師制備血細(xì)胞液供同學(xué)們做實驗材料，而不用雞全血，主要原因是 。生活在牧區(qū)的人們，采集牛、羊和馬血比較方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟后，結(jié)果是 ，這是因為這些動物和人一樣，成熟的紅細(xì)胞中 ，但若改用動物肝臟

13、做實驗材料，實驗?zāi)茼樌M行。這是因為 。若選用動物肝臟做實驗材料，在提取之前，最好增加 程序，使組織細(xì)胞更易分離。課題2 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增DNA片段導(dǎo)學(xué)誘思1PCR原理填寫下列表格參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶DNA母鏈合成子鏈的原料DNA聚合酶引物DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?，通常將DNA的羥基末端稱為 ，而磷酸基團的末端稱為 。DNA聚合酶不能 開始合成DNA，而只能 ，因此，DNA復(fù)制需要引物。DNA的合成方向總是 。在DNA的復(fù)制過程中，復(fù)制的前提是 。在體外可通過控制 來實現(xiàn)。在 的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個過程稱為 。PCR利用了DNA的 原理，通過

14、控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合。由于PCR過程的溫度高，導(dǎo)致DNA聚合酶失活，后來 的DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，大大增加了PCR的效率。PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中提供： ， ， ， ，同時通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進行。2PCR的反應(yīng)過程PCR一般要經(jīng)歷 循環(huán)，每次循環(huán)可以分為 、 和 三步。從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)，并且由 延伸而成的DNA單鏈會與 結(jié)合，進行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能 ，使這段固定長度的序列成指數(shù)擴增。3實驗操作在實驗室中，做PCR通常使用 ，它是一種薄壁塑料管。具體操作時，用微量移液器，按PCR反應(yīng)體系的配方在 中依次加

15、入各組分，再參照下表的設(shè)置設(shè)計好PCR儀的循環(huán)程序即可。4操作提示為避免外源DNA等因素的污染，PCR實驗中使用的 、 、 以及蒸餾水等在使用前必須進行 。PCR所用的緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在 儲存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。在微量離心管中添加反應(yīng)成分時，移液管上的槍頭要 。疑難點撥1.PCR技術(shù)簡介PCR是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù)，它能以極少量的DNA為模板，在幾小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝。這項技術(shù)有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進行分析研究的問題，被廣泛的應(yīng)用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學(xué)、基因克隆和DNA序列測定等各方面。2

16、細(xì)胞內(nèi)參與DNA復(fù)制的各種組成成分及其作用解旋酶：打開DNA雙鏈 DNA母鏈：提供DNA復(fù)制的模板 4種脫氧核苷酸：合成子鏈的原料 DNA聚合酶：催化合成DNA子鏈 引物：使DNA聚合酶能夠從引物的3，端開始連接脫氧核苷酸（引物是一小段DNA或RNA，它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對。用于PCR的引物長度通常為2030個核苷酸）3DNA的合成方向DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?，通常將DNA的羥基末端稱為3，端，而磷酸基團的末端稱為5，端。DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，而只能從3，端延伸DNA鏈，因此，DNA復(fù)制需要引物。當(dāng)引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結(jié)合后，DNA聚合酶就能從引物的

17、3，端開始延伸DNA鏈，DNA的合成方向總是從子鏈的5，端向3，端延伸。4PCR技術(shù)與DNA的復(fù)制PCR反應(yīng)是通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進行。PCR反應(yīng)的實質(zhì)就是DNA復(fù)制，所以有關(guān)PCR反應(yīng)的題目與DNA復(fù)制的原理相同，計算方法也大體相同。例如：PCR反應(yīng)中的目的片段一般以2n的方式積累，其中n為反應(yīng)循環(huán)次數(shù)。一個DNA片段在30次循環(huán)后反應(yīng)物中大約有10億個這樣的片段。（230）典例解析一個由15N標(biāo)記的DNA分子，放在沒有標(biāo)記的環(huán)境中培養(yǎng)，利用PCR循環(huán)5次后標(biāo)記的DNA分子總數(shù)的（ ）A 1/10 B 1/5 C 1/16 D1/25課堂演練一選擇題（10個）1DNA分子復(fù)制時

18、，解旋的兩條鏈中（ C ）A僅一條作為復(fù)制模板 B兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個不同的DNA分子C兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個相同的DNA分子D兩條鏈作為模板，各自合成一條子鏈，然后兩條母鏈重新結(jié)合為原來的雙螺旋分子，兩條新鏈結(jié)合成一個全新的DNA分子2.下列關(guān)于DNA復(fù)制過程的正確順序是（ D ）互補堿基對之間氫鍵斷裂 互補堿基對之間形成氫鍵DNA分子在解旋酶的作用下解旋 以解旋后的母鏈為模板進行堿基互補配對子鏈與母鏈盤旋成雙螺旋狀結(jié)構(gòu)A B C D3.下列各項過程中，遵循“堿基互補配對原則”的有（ A ）DNA復(fù)制 RNA復(fù)制 轉(zhuǎn)錄 翻譯 逆轉(zhuǎn)錄A B C D4.實驗室內(nèi)模擬生物體DNA的復(fù)制必

19、需的一組條件是（ D ）酶 游離的脫氧核苷酸 ATP DNA分子mRNA tRNA 適宜的溫度 適宜的酸堿度A B C D5.利用PCR技術(shù)，把一個雙鏈DNA分子當(dāng)作第一代，經(jīng)過3次循環(huán)，在第四代DNA分子中，有幾條第一代脫氧核苷酸的長鏈？（ A ）A 2 B 4 C 8 D 16，6.關(guān)于DNA分子的敘述中，正確的是（ C ）A .DNA的兩條鏈?zhǔn)菢O性相同，同向平行 B.DNA的兩條鏈?zhǔn)菢O性相同，反向平行C.DNA的兩條鏈中極性不同，反向平行的 D.DNA的兩條鏈?zhǔn)菢O性不同，同向平行7.假設(shè)PCR反應(yīng)中，只有一個DNA的片段作為模板，請計算在30次循環(huán)后，反應(yīng)物中大約有多少這樣的DNA片段（

20、 B ）A 215 B 230 C 260 D 2318.DNA的合成方向總是（ C ）延伸。A從DNA分子的左端向右端 B從DNA分子的右端向左端C從子鏈的5，端向3，端 D從子鏈的3，端向5，端9.要使PCR反應(yīng)在體外的條件下順利地進行，需要嚴(yán)格的控制（ C ）A 氧氣的濃度 B酸堿度 C溫度 D 大氣的濕度10.DNA分子經(jīng)PCR反應(yīng)循環(huán)一次后，新合成的那條子鏈的脫氧核苷酸的序列應(yīng)與（ ）A模板母鏈相同 B非模板母鏈相同 C兩條模板母鏈相同 D兩條模板母鏈都不相同二非選擇題（2個）1PCR技術(shù)是把某一DNA片段在實驗條件下，合成許許多多相同片段的一種方法，利用這種技術(shù)能快速而特異的擴增任

21、何要求的目的基因或者DNA分子片段，“人類基因組計劃”的研究中常用到這種技術(shù)。請結(jié)合有關(guān)知識，回答有關(guān)此技術(shù)的一些問題：PCR技術(shù)能把某一DNA片段進行擴增，依據(jù)的原理是： 在實驗條件下，DNA分子進行擴增，除了所要擴增的DNA片段處，還需要 、和 、 等條件。某DNA片段有160個堿基，其中有腺嘌呤35個，若讓該DNA分子擴增三次（即復(fù)制三次）至少需要腺嘌呤脫氧核苷酸和鳥嘌呤脫氧核苷酸的數(shù)目分別是 和 個。2將大腸桿菌置于含15N的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。這樣，后代大腸桿菌細(xì)胞中的DNA雙鏈均被15N標(biāo)記。然后將被15N標(biāo)記的大腸桿菌作為親代轉(zhuǎn)到普通培養(yǎng)基中，繁殖兩代。親代、第一代、第二代大腸桿菌DN

22、A的狀況如圖所示。第一代大腸桿菌DNA貯存的遺傳信息與親代大腸桿菌DNA貯存的遺傳信息完全相同的原因是 。如果將第二代大腸桿菌的DNA分子總量作為整體1，其中，帶有15N的第二代大腸桿菌DNA分子約占總量的 %。如果將第二代大腸桿菌的DNA含量作為整體1，其中含15N標(biāo)記的第二代大腸桿菌的DNA含量（脫氧核苷酸單鏈）約占總量的 %課題3 血紅蛋白的提取和分離導(dǎo)學(xué)誘思1凝膠色譜法凝膠色譜法也稱做 ，是根據(jù) 分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實際上是一些由 構(gòu)成的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子通過凝膠時速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì) 進入凝膠內(nèi)部的通道，路程 ，移

23、動速度 ；而相對分子質(zhì)量 的蛋白質(zhì)無法進入凝膠內(nèi)部的通道，只能在 移動，路程 ，移動速度 。相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。2緩沖溶液緩沖溶液的作用是 。緩沖溶液通常由 溶解于水中配制而成的。生物體內(nèi)進行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進行的，例如：血漿的pH是 ，要在實驗條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的過程，必須保持體外的pH與體內(nèi)的基本一致。3電泳電泳是指 。許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團，在一定的pH下，這些基團會帶上 。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷 的電極移動。電泳利用了待分離樣品中各分子 以及分子本身的 、 的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的

24、 ，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。兩種常用的電泳方法是 和 ，在測定蛋白質(zhì)分子量時通常使用 。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于 以及 等因素。4蛋白質(zhì)的提取和分離蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步： 、 、 和 。5樣品處理血液由 和 組成，其中紅細(xì)胞最多。紅細(xì)胞具有 的特點。紅細(xì)胞中有一種非常重要的蛋白質(zhì) ，其作用是 ，血紅蛋白有 個肽鏈組成，包括 ，其中每條肽鏈環(huán)繞一個 ，磁基團可攜帶 。血紅蛋白因含有 呈現(xiàn)紅色。紅細(xì)胞的洗滌 洗滌紅細(xì)胞的目的是 ，采集的血樣要及時采用 分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的 ，將下層暗紅色的 倒入燒杯，再加入 ，緩慢攪拌 ，低速短時間離心，如此重復(fù)洗

25、滌三次，直至 ，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。血紅蛋白的釋放 在 和 作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的 ，第2層為白色薄層固體，是 ，第3層是紅色透明液體，這是 ，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。透析 取1mL的血紅蛋白溶液裝入 中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的 中，透析12h。透析可以去除樣品中 的雜質(zhì)，或用于更換樣品的 。6凝膠色譜操作第一步要制作 ，第二步要 ，因為 ，所以裝柱前需要根據(jù)

26、色譜柱的內(nèi)體積計算所需要的凝膠量。在裝填凝膠柱時，不得有 存在。因為氣泡會 ，降低分離效果。第三步是 。疑難點撥1與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點及這一特點對進行蛋白質(zhì)的分離的意義哺乳動物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀，沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器。其含有的血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。 典例解析用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)（ ）A路程較長，移動速度較慢 B路程較長，移動速度較快C路程較短，移動速度較慢 D路程較短，移動速度較快課堂演練一 選擇題1凝膠色譜法是根據(jù)（ ）分離蛋白質(zhì)的有

27、效方法。A分子的大小 B相對分子質(zhì)量的大小 C帶電荷的多少 D溶解度2緩沖液的作用是：在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來維持（ ）基本不變。A溫度 B pH C滲透壓 D氧氣濃度3電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷（ ）的電極移動。A相同 B相反 C相對 D相向4.哺乳動物和人的成熟的紅細(xì)胞中的（ ）與氧氣的運輸有關(guān)。A血紅蛋白 B肌紅蛋白 C肌動蛋白 D肌球蛋白5血液由血漿和各種血細(xì)胞組成，其中（ ）的含量最多。A白細(xì)胞 B血小板 C紅細(xì)胞 D淋巴細(xì)胞6為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血劑（ ）。A. NaCl B.甲苯 C.蒸餾水 D.檸檬酸鈉7將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心

28、管中，離心后，可以明顯看到試管中的溶液分為4層，其中第3層是（ ）A無色透明的甲苯層 B脂溶性物質(zhì)的沉淀層 C血紅蛋白的水溶液 D其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物二 非選擇題1電泳利用了待分離樣品中各種分子 以及 、 的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。2你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？專題知識歸納基礎(chǔ)知識：提取DNA的方法 實驗材料的選取 實驗設(shè)計 破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液 去除濾液中的雜質(zhì)DNA的粗提取 DNA的析出與鑒定與鑒定 以血液為材料要防止血液凝固DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 操作提示 加入洗滌劑后，動作要輕緩；加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩 二苯胺試劑要現(xiàn)

29、配現(xiàn)用結(jié)果分析與評價課題延伸PCR原理 基礎(chǔ)知識 PCR的反應(yīng)過程 多聚酶鏈?zhǔn)椒?實驗操作應(yīng)擴增DNA 操作提示片段 結(jié)果分析與評價 課題延伸 凝膠色譜法血紅蛋白的提 基礎(chǔ)知識 緩沖溶液取和分離 電泳 樣品處理實驗操作 凝膠色譜操作 SDS聚丙烯酰凝膠電泳 紅細(xì)胞的洗滌實驗操作 色譜主填料的處理 凝膠色譜柱的裝填 蛋白質(zhì)的分離結(jié)果分析與評價課題延伸專題知識檢測一、選擇題1DNA的溶解度最低時，NaCl的物質(zhì)的量濃度為（ ）2DNA不溶解于（ ）A.NaCl溶液 B.KCl溶液 C.酒精溶液 D.MgCl2溶液3鑒定DNA的試劑是（ ）A.斐林試劑 B蘇丹染液 C.雙縮脲試劑 D.二苯胺試劑4在

30、向溶解DNA得NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（ ）A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解雜質(zhì)的速度 C.減小DNA的溶解度，加快DNA析出 D.減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出5在DNA的粗提取過程中，初步析出DNA和提取較純凈的DNA所用的藥品的濃度及其名稱分別是（ ）0.1g/ml檸檬酸鈉溶液 2mol/LNaCl溶液 0.14mol/LNaCl溶液體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液 0.015mol/LNaCl溶液 0.04mol/LNaCl溶液A. B. C. D.6關(guān)于DNA的粗提取與鑒定實驗的表達哪項是錯誤的（ ）A.離心沉淀的血細(xì)胞中加水是為了提取DNAB.NaCl溶液的物質(zhì)的量

31、濃度為2mol/L時，DNA溶解C.向溶解的DNA燒杯中加蒸餾水是漂洗DNAD.離心后除去血液中的上清液是為了除去雜質(zhì)7 下列關(guān)于實驗現(xiàn)象的正確描述是（ ）A.向盛有果糖溶液的試管中加入斐林試劑，產(chǎn)生轉(zhuǎn)紅色沉淀B.紙層析法分離葉綠體中的色素時，濾紙條上最寬的色素帶呈黃綠色C.DNA的粗提取中，第二次加入蒸餾水并攪拌，能析出含DNA的黏稠物D.同一葉片受SO2危害的順序是先葉柄后葉片8 關(guān)于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面的敘述哪一個是正確的（ ）A.隨著NaCl溶液濃度增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B.隨著NaCl溶液濃度的減小，DNA在NaCl溶液中的溶解度也減小C.DNA在NaCl溶液中的溶解度與NaCl溶液的濃度無關(guān)D.當(dāng)NaCl溶液的濃度為0.14M時，DNA的溶解度最低9某DNA分子共有a個堿基，其中含胞嘧啶m個，則該DNA分子利用PCR技術(shù)循環(huán)了3次，需要游離的胸腺嘧啶脫氧核苷酸數(shù)為（ ）A.7（a-m） B.8(a-m) C.7（1/2a-m） D.8（2a-m）10卵原細(xì)胞在進行DNA復(fù)制時，細(xì)胞中不可能出現(xiàn)的是（ ）A.解旋 B.蛋白質(zhì)合成 C.基因突變 D.基因重組 11在一個密閉的容器中，利用PCR技術(shù)用含有同位素13C的脫氧核苷酸合成一