藥物分析第(8)章

1、1第八章第八章 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析類局麻藥物的分析2第一節(jié)第一節(jié) 對(duì)氨基苯甲酸酯類和酰苯胺類對(duì)氨基苯甲酸酯類和酰苯胺類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)3NH2COOC2H5NH2COOCH2CH2N(C2H5)2HClNHC4H9COOCH2CH2N(CH3)2HClH2NCONHCH2CH2N(C2H5)2.HClR1N HCOO R2苯佐卡因苯佐卡因 鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因一、對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物一、對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物4酰胺類：酰胺類：CH3CH3NHC

2、OCH2N(C2H5)2HCl.R1R3R4N HC O R2鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因二、酰苯胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物二、酰苯胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物5SOOCH3COHNNHCOCH3N HC OC H3C H3NC4H9.HCl醋氨苯砜醋氨苯砜 鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因二、酰苯胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物二、酰苯胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與典型藥物6三、主要理化性質(zhì)三、主要理化性質(zhì)1. 1. 芳伯氨基芳伯氨基特性特性: : 顯重氮化顯重氮化- -偶合反應(yīng)偶合反應(yīng); ; 與芳醛縮合與芳醛縮合成成SchiffSchiff堿的反應(yīng)；易氧化變色堿的反應(yīng)；易氧化變色 。( (鹽酸丁卡因，鹽酸丁卡因，

3、無無) ) 2. 2. 水解性水解性：因分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵。：因分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵。3. 3. 弱堿性弱堿性：能與生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)；在：能與生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)；在非水溶劑中能滴定。非水溶劑中能滴定。74. 4. 溶解性溶解性：游離堿難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑；鹽：游離堿難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑；鹽酸鹽易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。酸鹽易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。 5. 5. 與重金屬離子（銅離子或鈷離子）發(fā)生沉淀反應(yīng)：與重金屬離子（銅離子或鈷離子）發(fā)生沉淀反應(yīng)：生成有色的配位化合物沉淀。生成有色的配位化合物沉淀。6. 6. 吸收光譜特性：苯環(huán)及相應(yīng)的取代基與脂烴胺側(cè)吸收光譜特

4、性：苯環(huán)及相應(yīng)的取代基與脂烴胺側(cè)鏈，具紫外與紅外光譜行為。鏈，具紫外與紅外光譜行為。三、主要理化性質(zhì)三、主要理化性質(zhì)8第二節(jié)第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)9一、重氮化一、重氮化- -偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)芳伯氨基或潛在的芳伯氨基芳伯氨基或潛在的芳伯氨基生成重氮鹽可與堿性生成重氮鹽可與堿性- -萘酚偶合生成有萘酚偶合生成有色的偶氮染料。色的偶氮染料。v鹽酸丁卡因無此反應(yīng)，可鑒別。鹽酸丁卡因無此反應(yīng)，可鑒別。10NH2COOCH2CH2N(C2H5)2+ NaNO2 + HClN2ClCOOCH2CH2N(C2H5)2+ NaCl + H2ONaOHOHN=NCOOCH2CH2N(C2H5)2HO+ NaCl

5、 + H2O鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因11苯佐卡因苯佐卡因+ NaCl + 2H2OCOOC2H5NH2+ NaNO2 + 2HClN2+Cl-COOC2H5COOC2H5N2+Cl-+ OH+ NaOHNCOOC2H5NOH+ NaCl + H2O12芳仲胺基：可以發(fā)生亞硝酸鈉反應(yīng)芳仲胺基：可以發(fā)生亞硝酸鈉反應(yīng) + NaCl + H2O+ NaNO2NC4H9COOCH2CH2N(CH3)2ONHClNHC4H9COOCH2CH2N(CH3)2乳白色乳白色鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因13苯佐卡因苯佐卡因(3)本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)(附錄附錄)。鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因

6、(4)本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)(附錄附錄)。14二、與重金屬離子反應(yīng)二、與重金屬離子反應(yīng)1. 1. 與銅及鈷離子反應(yīng)與銅及鈷離子反應(yīng) 芳酰胺芳酰胺v鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因在碳酸鈉試液中，與硫酸銅反應(yīng)生成在碳酸鈉試液中，與硫酸銅反應(yīng)生成藍(lán)紫色藍(lán)紫色配位化合物，轉(zhuǎn)溶于氯仿中呈黃色。配位化合物，轉(zhuǎn)溶于氯仿中呈黃色。v與鹽酸普魯卡因、鹽酸丁卡因和苯佐卡因相區(qū)別與鹽酸普魯卡因、鹽酸丁卡因和苯佐卡因相區(qū)別CH3CH3NHCOCH2N(C2H5)2+ Cu2+CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2H3CH3C(C2H5)2NCH2CONCu15鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因 v

7、【鑒別】【鑒別】(1)取本品取本品0.2g，加水，加水20ml溶解后，取溶液溶解后，取溶液2ml，加硫酸銅試液，加硫酸銅試液0.2ml與碳與碳酸鈉試液酸鈉試液1ml，即顯藍(lán)紫色；加三氯甲烷，即顯藍(lán)紫色；加三氯甲烷2ml，振搖后放置，三氯甲烷層顯黃色。振搖后放置，三氯甲烷層顯黃色。16 v鹽酸利多卡因在酸性溶液中與氯化鈷試液作用，鹽酸利多卡因在酸性溶液中與氯化鈷試液作用，生成生成亮綠色亮綠色鈷鹽沉淀。鈷鹽沉淀。CH3CH3NHCOCH2N(C2H5)2+ CoCl2CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2H3CH3C(C2H5)2NCH2CONCo172. 2. 與汞離子反應(yīng)與汞離子反應(yīng)v鹽酸利

8、多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸鹽酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞試液煮沸，顯黃色。汞試液煮沸，顯黃色。v對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物顯紅色或橙黃色。對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物顯紅色或橙黃色。v用于區(qū)別用于區(qū)別183. 3. 羥肟酸鐵鹽反應(yīng)羥肟酸鐵鹽反應(yīng) 基于普魯卡因胺分子中的基于普魯卡因胺分子中的 芳酰胺結(jié)構(gòu)芳酰胺結(jié)構(gòu)。NH2CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)23FeH2O2FeCl3紫紅，暗棕色，棕黑色19鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺 v【鑒別】【鑒別】(1)取本品取本品0.1g加水加水5ml，加三

9、，加三氯化鐵試液與濃過氧化氫溶液各氯化鐵試液與濃過氧化氫溶液各1滴。緩緩加熱至滴。緩緩加熱至沸，溶液顯紫紅色，隨即變?yōu)榘底厣磷睾谏?。沸，溶液顯紫紅色，隨即變?yōu)榘底厣磷睾谏?0三、水解產(chǎn)物反應(yīng)三、水解產(chǎn)物反應(yīng)酯鍵酯鍵1. 1. 鹽酸普魯卡因的鑒別方法鹽酸普魯卡因的鑒別方法 取本品約取本品約0.1g，加水，加水2ml溶解后，加溶解后，加10氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液1ml，即生成白色沉淀；加熱，即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗?；繼續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣能使?jié)駶?rùn)的變?yōu)橛蜖钗?；繼續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放紅色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸

10、化，即析出白色沉淀。冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。21三、水解產(chǎn)物反應(yīng)三、水解產(chǎn)物反應(yīng)酯鍵酯鍵1. 1. 鹽酸普魯卡因的鑒別方法鹽酸普魯卡因的鑒別方法NaOHH2NCOONa + HOCH2CH2N(C2H5)2COONaH2NHClCOOHH2NHClH2NCOOHHCl222. 2. 苯佐卡因的鑒別方法苯佐卡因的鑒別方法 取本品約取本品約0.1g0.1g，加氫氧化鈉試液，加氫氧化鈉試液5ml5ml，煮，煮沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。COO(C2H5)2H2N+ NaOHH2NCOO

11、Na + CH3CH2OHCH3CH2OH+ 4I2 + 6NaOHCHI3 + 5NaI + HCOONa + 5H2O23四、四、 制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)1.1. 三硝基苯酚衍生物的制備：三硝基苯酚衍生物的制備： 利多卡因和布比卡因利多卡因和布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3H3CNO2NO2O2NOH.熔點(diǎn)為22823224 2. 2. 硫氰酸鹽衍生物的制備硫氰酸鹽衍生物的制備 鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因 COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNHC4H9COOCH2CH2N(C2H5)2 HSCN.NH4SCNNHC4H9熔點(diǎn)為13125鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因 v【鑒別

12、】【鑒別】(1)取本品約取本品約0.1g，加，加5醋酸醋酸鈉溶液鈉溶液10ml溶解后，加溶解后，加25硫氰酸銨溶液硫氰酸銨溶液1ml，即析出白色結(jié)晶；濾過，結(jié)晶用水洗滌，在即析出白色結(jié)晶；濾過，結(jié)晶用水洗滌，在80干燥，依法測(cè)定干燥，依法測(cè)定(附錄附錄C)，熔點(diǎn)約為，熔點(diǎn)約為131。26五、吸收光譜特征五、吸收光譜特征 （一）（一）UV UV 鹽酸布比卡因在鹽酸布比卡因在0.01mol/L HCl0.01mol/L HCl% %中中 0.40mg/ml0.40mg/ml maxmax=263nm=263nm、 maxmax=271nm=271nm； A A263263=0.53-=0.53-0

13、.58 A0.58 A271271=0.43-0.48=0.43-0.48 ( (二二)IR)IR27鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因 v【鑒別】【鑒別】(1)取本品，精密稱定，按干燥取本品，精密稱定，按干燥品計(jì)算，加品計(jì)算，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每釋制成每1ml中約含中約含0.40mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可見分光光度法可見分光光度法(附錄附錄A)測(cè)定，在測(cè)定，在263nm與與271nm的波長(zhǎng)處有最大吸收；其吸光度分別的波長(zhǎng)處有最大吸收；其吸光度分別為為0.530.58與與0.430.48。v(2)本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜本品的紅外光吸

14、收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜(光譜集光譜集324圖圖)一致。一致。28鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 v【鑒別】【鑒別】 (1)取本品，加磷酸鹽緩沖液取本品，加磷酸鹽緩沖液(取磷酸取磷酸二氫鉀二氫鉀13.61克，加水克，加水750ml使溶解，用氫氧使溶解，用氫氧化鉀溶液化鉀溶液(1180)調(diào)至調(diào)至pH4.50.1，加水稀，加水稀釋至釋至1000ml，即得，即得)制成每制成每1ml中約含中約含10g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年版二部年版二部附錄附錄A)測(cè)定，在測(cè)定，在229nm與與290nm的波長(zhǎng)處的波長(zhǎng)處有最大吸收。有最大吸收。v(4)本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)

15、照品的圖譜一本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致。致。29注射用鹽酸丁卡因注射用鹽酸丁卡因 v(2)取含量測(cè)定項(xiàng)下的溶液，照紫外取含量測(cè)定項(xiàng)下的溶液，照紫外-可見分光可見分光光度法光度法(附錄附錄A)測(cè)定，在測(cè)定，在227nm與與310nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。的波長(zhǎng)處有最大吸收。30鹽酸普魯卡因胺注射液鹽酸普魯卡因胺注射液 v【鑒別】【鑒別】(1)取本品適量，加水制成每取本品適量，加水制成每1ml中含鹽酸普魯卡因胺中含鹽酸普魯卡因胺5g的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可見可見分光光度法分光光度法(附錄附錄A)測(cè)定，在測(cè)定，在280nm的波的波長(zhǎng)處有最大吸收。長(zhǎng)處有最大吸收。31鹽酸羅哌卡因注

16、射液鹽酸羅哌卡因注射液 v【鑒別】【鑒別】(1)取本品適量，用取本品適量，用0.01molL鹽酸鹽酸溶液稀釋制成每溶液稀釋制成每1ml中約含鹽酸羅哌卡因中約含鹽酸羅哌卡因0.3mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可見分光光度法可見分光光度法(附錄附錄A)測(cè)定，在測(cè)定，在262nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，在的波長(zhǎng)處有最大吸收，在270nm的波長(zhǎng)處有一肩峰。的波長(zhǎng)處有一肩峰。32六、色譜六、色譜 ( (一一) TLC ) TLC ( (二二) HPLC) HPLC33鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 v【鑒別】【鑒別】(2)取本品與鹽酸氯普魯卡因?qū)φ掌愤m量，取本品與鹽酸氯普魯卡因?qū)φ掌愤m量，分別用水制成每分

17、別用水制成每1ml中含中含8mg的溶液；照薄層色譜的溶液；照薄層色譜法法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年版二部附錄年版二部附錄 B)試驗(yàn)，吸取試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各上述兩種溶液各3l，分別點(diǎn)于同一硅膠，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄薄層板上，氨熏層板上，氨熏15分鐘，以氯仿分鐘，以氯仿-甲醇甲醇(70:4)為展開為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。下檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。液的主斑點(diǎn)相同。34鹽酸利多卡因注射液鹽酸利多卡因注射液 v【鑒別】【鑒別】 (2)在含量測(cè)定

18、項(xiàng)下記錄的色在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。溶液主峰的保留時(shí)間一致。35鹽酸布比卡因注射液鹽酸布比卡因注射液v【鑒別】【鑒別】(1)在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。液主峰的保留時(shí)間一致。36第三節(jié)第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查特殊雜質(zhì)與檢查37v 來源：水解反應(yīng)（制備時(shí)）來源：水解反應(yīng)（制備時(shí)）v 可進(jìn)一步脫羧為苯胺，又可被氧化為有色物，使注射液可進(jìn)一步脫羧為苯胺，又可被氧化為有色物，

19、使注射液變黃、療效下降、毒性增加。變黃、療效下降、毒性增加。v 限度：限度：0.5%0.5%（原料藥）（原料藥）1.2%1.2%（注射液）（注射液）v 檢查方法：檢查方法：HPLCHPLCH2NCOOHH2NOCO2OO一、鹽酸普魯卡因中一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸對(duì)氨基苯甲酸的檢查的檢查38鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 v 對(duì)氨基苯甲酸取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋對(duì)氨基苯甲酸取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每制成每1ml中含中含0.2mg的溶液，作為供試品溶液；另取的溶液，作為供試品溶液；另取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，加水溶解并定量制成每對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，加水溶

20、解并定量制成每1ml中含中含1g的溶液，作為對(duì)照品溶液；取供試品溶液的溶液，作為對(duì)照品溶液；取供試品溶液1ml與對(duì)照品溶液與對(duì)照品溶液9ml混合均勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)混合均勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。照高效液相色譜法溶液。照高效液相色譜法(附錄附錄D)試驗(yàn)，用十八烷基試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以含硅烷鍵合硅膠為填充劑；以含0.1庚烷磺酸鈉的庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)用磷酸調(diào)節(jié)pH值至值至3.0)-甲醇甲醇(68:32)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為279nm。取系統(tǒng)。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液適用性試驗(yàn)溶液10l，注入液相色譜儀，理

21、論板數(shù)按對(duì)，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按對(duì)氨基苯甲酸峰計(jì)算不低于氨基苯甲酸峰計(jì)算不低于2000，鹽酸普魯卡因峰和對(duì)氨，鹽酸普魯卡因峰和對(duì)氨基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于2.0。供試品溶液色譜圖中如。供試品溶液色譜圖中如有與對(duì)氨基苯甲酸峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以有與對(duì)氨基苯甲酸峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過峰面積計(jì)算，不得過0.5。39鹽酸普魯卡因注射液鹽酸普魯卡因注射液 v【檢查】對(duì)氨基苯甲酸精密量取本品適量，【檢查】對(duì)氨基苯甲酸精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每用水定量稀釋制成每1ml中含鹽酸普魯卡因中含鹽酸普魯卡因0.2mg的溶液，作為供試品

22、溶液；取對(duì)氨基苯甲的溶液，作為供試品溶液；取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，加水溶解并定量制成每酸對(duì)照品，精密稱定，加水溶解并定量制成每1ml中含中含2.4g的溶液，作為對(duì)照品溶液。照鹽的溶液，作為對(duì)照品溶液。照鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸項(xiàng)下的方法測(cè)定，供酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸項(xiàng)下的方法測(cè)定，供試品溶液色譜圖中如有與對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間試品溶液色譜圖中如有與對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過標(biāo)示量的標(biāo)示量的1.2。40二、鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物的檢查二、鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物的檢查注射液在

23、一定滅菌溫度、時(shí)間和溶液注射液在一定滅菌溫度、時(shí)間和溶液pHpH下，發(fā)生水解反應(yīng)，生成下，發(fā)生水解反應(yīng)，生成4-4-氨基氨基-2-2-氯苯甲氯苯甲酸降解產(chǎn)物。酸降解產(chǎn)物。41鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 v 4-氨基氨基-2-氯苯甲酸氯苯甲酸 取本品適量，精密稱定，取本品適量，精密稱定，加水制成每加水制成每1ml中含中含1mg的溶液作為供試品溶的溶液作為供試品溶液另精密稱取液另精密稱取4-氨基氨基-2-氯苯甲酸對(duì)照品適量，氯苯甲酸對(duì)照品適量，加水使成每加水使成每1ml中含中含10g的溶液作為對(duì)照品溶的溶液作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法液。照高效液相色譜法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年版二部年版

24、二部附錄附錄 D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，充劑，0.05mol/L檸檬酸檸檬酸-乙腈乙腈-水水(68:12:20)為流動(dòng)相，波長(zhǎng)為為流動(dòng)相，波長(zhǎng)為254nm。4-氨基氨基-2-氯苯甲氯苯甲酸峰與主成分峰的分離度應(yīng)大于酸峰與主成分峰的分離度應(yīng)大于5.0，理論板數(shù)，理論板數(shù)按鹽酸氯普魯卡因計(jì)算應(yīng)不低于按鹽酸氯普魯卡因計(jì)算應(yīng)不低于2000。按外標(biāo)。按外標(biāo)法計(jì)算，含法計(jì)算，含4-氨基氨基-2-氯苯甲酸不得大于氯苯甲酸不得大于1.0%。42鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 v二甲苯二甲苯 取二甲苯取二甲苯1滴滴(約約20mg)，精密稱定，精密稱定，置置100ml

25、量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取量取5ml置置10ml量瓶中，用水稀釋至刻度作為量瓶中，用水稀釋至刻度作為對(duì)照品溶液；另取本品對(duì)照品溶液；另取本品0.25g，精密稱定，置，精密稱定，置10ml帶塞試管中，精密加入水帶塞試管中，精密加入水5ml使溶解，作使溶解，作為供試品溶液。照氣相色譜法為供試品溶液。照氣相色譜法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年年版二部附錄版二部附錄 E)檢查，以檢查，以10%聚乙二醇聚乙二醇(PEG)20M和和3.5%二甘油二甘油(DG)混合為固定相，混合為固定相，氫火焰離子化檢測(cè)器氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)。柱溫。柱溫955。分。分別精

26、密吸收上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各別精密吸收上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各23l注入色譜儀，用外標(biāo)法計(jì)算，供試品中二甲注入色譜儀，用外標(biāo)法計(jì)算，供試品中二甲苯的殘留量不得超過苯的殘留量不得超過0.1%。43三、鹽酸利多卡因注射液中三、鹽酸利多卡因注射液中2,6-2,6-二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查檢查v生產(chǎn)和貯藏過程水解產(chǎn)生生產(chǎn)和貯藏過程水解產(chǎn)生2,6-2,6-二二甲基苯胺甲基苯胺v檢查方法：檢查方法：HPLCHPLC44鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因 v 2，6-二甲苯胺二甲苯胺 取本品適量，加流動(dòng)相溶解并制成每取本品適量，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml中含中含5mg的溶液，作為供試

27、品溶液的溶液，作為供試品溶液(臨用新制臨用新制)；另；另取取2,6-二甲苯胺鹽酸鹽適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解二甲苯胺鹽酸鹽適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每并定量稀釋制成每1ml中含中含2，6-二甲苯胺二甲苯胺0.5g的溶的溶液，作為對(duì)照溶液；取液，作為對(duì)照溶液；取2，6二甲苯胺鹽酸鹽和鹽酸利多二甲苯胺鹽酸鹽和鹽酸利多卡因各適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每卡因各適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中均約含中均約含50g的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件試驗(yàn)，唯檢測(cè)波長(zhǎng)改為下的色譜條件試驗(yàn)，唯檢測(cè)波長(zhǎng)改為230nm，取系

28、統(tǒng)適，取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液用性試驗(yàn)溶液20l注入液相色譜儀，證錄色譜圖，注入液相色譜儀，證錄色譜圖，2，6-二甲苯胺峰與利多卡因峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。供試二甲苯胺峰與利多卡因峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。供試品溶液色譜圖中如顯品溶液色譜圖中如顯2，6-二甲苯胺峰，其峰面積不得大二甲苯胺峰，其峰面積不得大于對(duì)照溶液中于對(duì)照溶液中2，6-二甲苯胺峰的面積二甲苯胺峰的面積(0.01)。 45鹽酸利多卡因注射液鹽酸利多卡因注射液 v 有關(guān)物質(zhì)精密量取本品適量，用流動(dòng)相定量稀釋制成每有關(guān)物質(zhì)精密量取本品適量，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中約含鹽酸利多卡因中約含鹽酸利多卡因2mg的溶液，作為供試品溶液；的溶液，作

29、為供試品溶液；精密量取精密量取1ml，置，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照溶液；另取作為對(duì)照溶液；另取2，6-二甲基苯胺對(duì)照品，精密稱定，二甲基苯胺對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含中約含0.8g的溶液，作的溶液，作為對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液為對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液20l，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的峰的峰高約為滿量程的20；再精密量取上述三種溶液各；再精密量取上述三種溶液各2

30、0l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的時(shí)間的3.5倍，供試品溶液的色譜圖中如有與倍，供試品溶液的色譜圖中如有與2，6-二甲基二甲基苯胺保留時(shí)間一致的色譜峰，其峰面積不得大于對(duì)照品溶液苯胺保留時(shí)間一致的色譜峰，其峰面積不得大于對(duì)照品溶液主峰面積主峰面積(0.04)，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的液主峰面積的0.5倍倍(0.5)，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積大于對(duì)照溶液主峰面積(1.0)。 46四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)

31、純度檢查v鹽酸羅哌卡因分子有一個(gè)手性碳原子，二個(gè)對(duì)映鹽酸羅哌卡因分子有一個(gè)手性碳原子，二個(gè)對(duì)映體，體，R-R-羅哌卡因心臟毒性較大，臨床上應(yīng)用羅哌卡因心臟毒性較大，臨床上應(yīng)用S-S-羅羅哌卡因?qū)τ丑w。哌卡因?qū)τ丑w。v采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行對(duì)映體純度檢查采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行對(duì)映體純度檢查47v電泳條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)電泳條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)v石英毛細(xì)管柱石英毛細(xì)管柱v溫度溫度3030v電壓電壓 500V/s500V/s速度施加，最后穩(wěn)定速度施加，最后穩(wěn)定375V/cm375V/cmv電流電流 40404545 A Av波長(zhǎng)波長(zhǎng)206nm206nmv信噪比信噪比 10 10vR R與與S S遷移時(shí)間

32、分別為遷移時(shí)間分別為0.960.96和和1.01.0vR3.7R3.7四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查48鹽酸羅哌卡因注射液鹽酸羅哌卡因注射液 v有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì) 精密量取本品適量，用流動(dòng)相稀釋制精密量取本品適量，用流動(dòng)相稀釋制成每成每1ml中含鹽酸羅哌卡因中含鹽酸羅哌卡因2.5mg的溶液，作的溶液，作為供試品溶液；精密量取為供試品溶液；精密量取1ml，置，置100ml量瓶量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取取2，6-二甲基苯胺對(duì)照品適量，精密稱定，加二甲基苯胺對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成

33、每流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中含中含0.1g的的溶液，作為對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜溶液，作為對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的條件，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。倍。供試品溶液色譜圖中，如有與供試品溶液色譜圖中，如有與2，6-二甲基苯胺二甲基苯胺保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過標(biāo)示量的不得過標(biāo)示量的0.01，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍倍(0.5)；雜；雜質(zhì)總量不得過質(zhì)總量不得過1.0。 49鹽酸羅哌卡因注射液

34、鹽酸羅哌卡因注射液 v右旋異構(gòu)體右旋異構(gòu)體 照高效液相色譜法照高效液相色譜法(附錄附錄V D)試驗(yàn)，試驗(yàn)，用用-酸糖蛋白柱酸糖蛋白柱(AGP，100mm4.0mm，5m適用適用)；以異丙醇；以異丙醇-磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液(取磷酸二取磷酸二氫鉀氫鉀2.72g，加水，加水800ml溶解，用溶解，用0.1molL氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至值至7.1，加水稀釋至，加水稀釋至1000ml)(10：90)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。右旋鹽酸羅哌卡因峰與鹽酸羅哌卡因。右旋鹽酸羅哌卡因峰與鹽酸羅哌卡因峰的分離度應(yīng)符合要求。供試品溶液色譜圖中如峰的分離度應(yīng)符合要求。供試

35、品溶液色譜圖中如有與右旋鹽酸羅哌卡因保留時(shí)間一致的色譜峰，有與右旋鹽酸羅哌卡因保留時(shí)間一致的色譜峰，其峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的其峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍倍(0.5)。 50五、苯佐卡因五、苯佐卡因 v有關(guān)物質(zhì)取本品，加無水乙醇溶解并稀釋制成有關(guān)物質(zhì)取本品，加無水乙醇溶解并稀釋制成每每1ml中含中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用無水乙醇定量稀釋制成每密量取適量，用無水乙醇定量稀釋制成每1ml中中含含0.01mg、0.025mg、0.05mg和和0.1mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法(附錄附

36、錄B)試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各20l，分別點(diǎn)于，分別點(diǎn)于同一硅膠同一硅膠GF薄層板上，以無水乙醇薄層板上，以無水乙醇-三氯甲烷三氯甲烷(0.75:99.25)為展開劑，展開后，晾為展開劑，展開后，晾干，在紫外光燈干，在紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)(如原點(diǎn)觀察到雜質(zhì)斑點(diǎn)，應(yīng)以雜質(zhì)如原點(diǎn)觀察到雜質(zhì)斑點(diǎn)，應(yīng)以雜質(zhì)斑點(diǎn)計(jì)斑點(diǎn)計(jì))，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，雜質(zhì)總量不，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，雜質(zhì)總量不得過得過1.0。51六、鹽酸丁卡因六、鹽酸丁卡因 v有關(guān)物質(zhì)取本品，精密稱定，加水溶解并定量有關(guān)物質(zhì)取本品，精密稱定，加水溶解并

37、定量稀釋制成每稀釋制成每1ml中含中含50mg的溶液，作為供試品的溶液，作為供試品溶液；另取對(duì)丁氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，溶液；另取對(duì)丁氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含中含0.10mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄附錄B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同，分別點(diǎn)于同一硅膠一硅膠GF薄層板上，以三氯甲烷薄層板上，以三氯甲烷-甲甲醇醇-異丙胺異丙胺(98:7:2)為展開劑，展開，晾干，置為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如

38、顯雜下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。得更深。52七、鹽酸布比卡因七、鹽酸布比卡因 v 有關(guān)物質(zhì)取本品，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每有關(guān)物質(zhì)取本品，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約中約含含2mg的溶液作為供試品溶液；精密量取的溶液作為供試品溶液；精密量取1ml，置，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。照高效液相色譜法溶液。照高效液相色譜法(附錄附錄D)試驗(yàn)，用十八烷基試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.05mol/L磷

39、酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀取磷酸二氫鉀6.8g與氫氧化鈉與氫氧化鈉1.87g，加水，加水1000ml使溶解，調(diào)節(jié)使溶解，調(diào)節(jié)pH值為值為8.0)-乙腈乙腈(35:65)為流動(dòng)相；檢為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為測(cè)波長(zhǎng)為240nm。取對(duì)照溶液。取對(duì)照溶液20l注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10；再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各；再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20l，分別，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。倍。供試品溶液的色譜圖中如

40、有雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰面積的和不供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積得大于對(duì)照溶液主峰面積(1.0)。 53第四節(jié)第四節(jié) 含量測(cè)定含量測(cè)定容量分析容量分析 亞硝酸鈉滴定法亞硝酸鈉滴定法 非水溶液滴定法非水溶液滴定法光譜分析光譜分析 紫外分光光度法紫外分光光度法色譜分析色譜分析 高效液相色譜法高效液相色譜法54一、一、亞硝酸鈉滴定法亞硝酸鈉滴定法1.1.原理：芳伯氨基或水解后具有原理：芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基芳伯氨基 在在酸性液酸性液中與中與亞硝酸鈉亞硝酸鈉定量反應(yīng)，生成重氮鹽，永停滴定定量反應(yīng)，生成重氮鹽，永停滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)。法指示反應(yīng)終點(diǎn)。N H2A

41、r + R O O HArNH2+ NaNO2 + HClAr NHCOR + H2OH+N2+Cl-Ar+ NaCl + H2O551 1）加入適量）加入適量溴化鉀溴化鉀加速反應(yīng)加速反應(yīng) 重氮化反應(yīng)的歷程為：重氮化反應(yīng)的歷程為：2. 2. 測(cè)定條件測(cè)定條件NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OAr-NH2NO+Cl-慢Ar-NH-NO快Ar-N=N-OH快Ar-N2+Cl-56第一步反應(yīng)快慢與第一步反應(yīng)快慢與芳伯氨基游離程度芳伯氨基游離程度直接相關(guān)。直接相關(guān)。若芳伯氨基的堿性較弱（在苯胺芳環(huán)上，尤其在若芳伯氨基的堿性較弱（在苯胺芳環(huán)上，尤其在對(duì)位，有磺酸基、硝基

42、、羧基和鹵素等），則在對(duì)位，有磺酸基、硝基、羧基和鹵素等），則在一定強(qiáng)度酸性溶液中成鹽的比例較小，即游離芳一定強(qiáng)度酸性溶液中成鹽的比例較小，即游離芳伯氨基較多，重氮化反應(yīng)速度就快。伯氨基較多，重氮化反應(yīng)速度就快。芳伯氨基堿性較強(qiáng)（在苯胺芳環(huán)對(duì)位上有烷氧基、芳伯氨基堿性較強(qiáng)（在苯胺芳環(huán)對(duì)位上有烷氧基、羥基、羥基、甲甲基等），則在一定酸性液中成鹽比例較基等），則在一定酸性液中成鹽比例較大，游離芳伯氨基較少，則重氮化反應(yīng)速度就慢。大，游離芳伯氨基較少，則重氮化反應(yīng)速度就慢。57在測(cè)定具有能增強(qiáng)芳伯氨基游離的取代基的藥物，在測(cè)定具有能增強(qiáng)芳伯氨基游離的取代基的藥物，于供試液中需加入適量的于供試液中需加

43、入適量的溴化鉀溴化鉀（2g)使加速重氮化使加速重氮化反應(yīng)。反應(yīng)。由于（由于（1）式的平衡常數(shù)比（）式的平衡常數(shù)比（2）式的約大）式的約大300倍，即倍，即生成生成NOBr 量大很多，也就是在供試液中量大很多，也就是在供試液中NO+的濃的濃度大很多，所以能加速重氮化反應(yīng)的進(jìn)行。度大很多，所以能加速重氮化反應(yīng)的進(jìn)行。HNO2+HBrNOBr+H2O（1）HNO2+HClNOCl+H2O（2）582 2）加過量）加過量鹽酸鹽酸加速反應(yīng)加速反應(yīng)v酸的種類：胺類的鹽酸鹽較其硫酸鹽溶解度大，酸的種類：胺類的鹽酸鹽較其硫酸鹽溶解度大，反應(yīng)速度快，所以多采用鹽酸。反應(yīng)速度快，所以多采用鹽酸。v酸量：實(shí)際芳胺類

44、藥物與酸的酸量：實(shí)際芳胺類藥物與酸的 molmol比為比為1 1：2.52.56 6。加過量的鹽酸可。加過量的鹽酸可加快重氮化反應(yīng)的速加快重氮化反應(yīng)的速度，使重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定，并防止生成度，使重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定，并防止生成偶氮氨基化合物。偶氮氨基化合物。ArN2+Cl- + H2NArNNArNH Ar + HCl593 3）滴定溫度）滴定溫度v 溫度高，反應(yīng)速度快。溫度高，反應(yīng)速度快。v溫度高時(shí)，可使亞硝酸逸失，并可使重氮鹽分解。溫度高時(shí)，可使亞硝酸逸失，并可使重氮鹽分解。v在室溫在室溫10-3010-30時(shí)滴定。時(shí)滴定。4 4）滴定速度）滴定速度 先將滴定管尖端插入液面下約先將滴

45、定管尖端插入液面下約2/32/3處，較快放出滴定液，處，較快放出滴定液，而在滴定管尖提出液面后，滴定宜慢，尤其在近終點(diǎn)時(shí)。而在滴定管尖提出液面后，滴定宜慢，尤其在近終點(diǎn)時(shí)。603. 3. 指示終點(diǎn)的方法指示終點(diǎn)的方法（1 1）永停滴定法）永停滴定法 ChPChP電極反應(yīng)：電極反應(yīng)： 陰極：陰極： HNOHNO2 2H He NOe NOH H2 2O O 陽極：陽極： NONOH H2 2OHNOOHNO2 2H He e缺點(diǎn)：電極易鈍化缺點(diǎn)：電極易鈍化HNOHNO3 3+FeCl+FeCl3 3試液或鉻酸液試液或鉻酸液溫?zé)峄罨瘻責(zé)峄罨? 510min10min61（2）外指示劑法）外指示劑法

46、 試劑：碘化鉀試劑：碘化鉀-淀粉糊劑或試紙淀粉糊劑或試紙 原理：稍過量的亞硝酸鈉在酸性液中氧化碘化鉀，原理：稍過量的亞硝酸鈉在酸性液中氧化碘化鉀，析出的碘遇淀粉即顯藍(lán)色。析出的碘遇淀粉即顯藍(lán)色。 適用范圍：多種藥物及制劑的亞硝酸鈉滴定法。適用范圍：多種藥物及制劑的亞硝酸鈉滴定法。 使用方法使用方法62 外指示劑法缺點(diǎn)外指示劑法缺點(diǎn)a.滴定溶液的酸性強(qiáng)，未達(dá)終點(diǎn)時(shí)，碘化鉀在酸性滴定溶液的酸性強(qiáng)，未達(dá)終點(diǎn)時(shí)，碘化鉀在酸性液中遇光被空氣緩緩氧化，也能游離出碘，與淀液中遇光被空氣緩緩氧化，也能游離出碘，與淀粉顯藍(lán)色而混淆終點(diǎn)。粉顯藍(lán)色而混淆終點(diǎn)。b.亞硝酸鈉液（亞硝酸鈉液（0.1mol/L)在過量在過

47、量12滴時(shí)，方滴時(shí)，方可靈敏的指示終點(diǎn)。可靈敏的指示終點(diǎn)。c.多次外試也可損失供試品而增加滴定誤差。多次外試也可損失供試品而增加滴定誤差。63（3）內(nèi)指示劑法）內(nèi)指示劑法如如0.1%橙黃橙黃-0.15%亞甲藍(lán)混合指示劑，此法亞甲藍(lán)混合指示劑，此法較簡(jiǎn)便，但重氮鹽有色時(shí)，特別是顏色較深者，則較簡(jiǎn)便，但重氮鹽有色時(shí)，特別是顏色較深者，則較難觀察終點(diǎn)的變化。較難觀察終點(diǎn)的變化。64苯佐卡因苯佐卡因 v【含量測(cè)定】取本品約【含量測(cè)定】取本品約0.35g，精密稱定，照永，精密稱定，照永停滴定法停滴定法(附錄附錄A)，用亞硝酸鈉滴定液，用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定

48、液亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于16.52mg的的C9H11NO2。65鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 v【含量測(cè)定】取本品約【含量測(cè)定】取本品約0.6g，精密稱定，照，精密稱定，照永停滴定法永停滴定法(附錄附錄A)，在，在1525，用亞，用亞硝酸鈉滴定液硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml亞硝酸亞硝酸鈉滴定液鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于27.28mg的的C13H20N2O2HCl。66鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 v 【含量測(cè)定】【含量測(cè)定】 取本品約取本品約0.6g，精密稱定，照永，精密稱定，照永停定法停定法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年版二部附錄年版

49、二部附錄A)，在，在1525，用亞硝酸鈉滴定液，用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴定。每定。每1ml亞硝酸鈉滴定液亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L相當(dāng)于相當(dāng)于30.72mg的的C13H19ClN2O2HCl。 67鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺 v【含量測(cè)定】取本品約【含量測(cè)定】取本品約0.55g，精密稱定，精密稱定，照永停滴定法照永停滴定法(附錄附錄A)，用亞硝酸鈉滴定液，用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于27.18mg的的C13H21N3OHCl。 68二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法1. 原理原理

50、v利用利用叔胺叔胺結(jié)構(gòu)的弱堿性結(jié)構(gòu)的弱堿性v溶劑：溶劑：冰醋酸冰醋酸和和醋酐醋酐溶液溶液v滴定液：滴定液：高氯酸滴定液高氯酸滴定液v指示劑：指示劑：結(jié)晶紫結(jié)晶紫（顯藍(lán)綠色為終點(diǎn)）（顯藍(lán)綠色為終點(diǎn)）v加加醋酸汞醋酸汞：消除生成的氯化氫干擾：消除生成的氯化氫干擾692. 2. 討論討論滴定鹽酸丁卡因時(shí)，加入適量醋酐的目的：滴定鹽酸丁卡因時(shí)，加入適量醋酐的目的：因鹽酸丁卡因在冰醋酸中顯較弱的堿性因鹽酸丁卡因在冰醋酸中顯較弱的堿性 ，加入的醋，加入的醋酐解離生成的醋酐合乙酰陽離子比醋酸合質(zhì)子的酸性酐解離生成的醋酐合乙酰陽離子比醋酸合質(zhì)子的酸性還強(qiáng)，還強(qiáng)，有利于丁卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突躍敏銳。有利于丁

51、卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突躍敏銳。2(CH3CO)2O(CH3CO)3O+ + CH3COO-70加入醋酸汞溶液的目的加入醋酸汞溶液的目的： 由于藥物均為鹽酸鹽，用高氯酸滴定時(shí)有強(qiáng)酸由于藥物均為鹽酸鹽，用高氯酸滴定時(shí)有強(qiáng)酸HX生成，生成，則反應(yīng)不能進(jìn)行到底，并影響滴定終點(diǎn)，加入醋酸汞溶液則反應(yīng)不能進(jìn)行到底，并影響滴定終點(diǎn)，加入醋酸汞溶液使生成醋酸和氯化汞，以使生成醋酸和氯化汞，以除去除去HX的干擾。的干擾。 BH+X-+HClO4BH+ClO4-+HX BH+X-+Hg(Ac)2BH+Ac-+HgCl2 BH+Ac-+HClO4BH+ClO4-+HAc71鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因 v【含量測(cè)定】

52、取本品約【含量測(cè)定】取本品約0.2g，精密稱定，加，精密稱定，加冰醋酸冰醋酸20ml與醋酐與醋酐20ml溶解后，照電位滴定溶解后，照電位滴定法法(附錄附錄A)，用高氯酸滴定液，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于32.49mg的的C18H28N2OHCl。 72v注射用鹽酸丁卡因的含量注射用鹽酸丁卡因的含量v于于310nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度波長(zhǎng)處測(cè)吸收度v采用對(duì)照品比較法采用對(duì)照品比較法 三、紫外分光光度法三、紫外分光光度法73注射用鹽酸丁卡因注射用鹽酸丁卡因 v

53、 【含量測(cè)定】取本品【含量測(cè)定】取本品10瓶，分別加水溶解，并分別定瓶，分別加水溶解，并分別定量轉(zhuǎn)移至量轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，精密稱定，加水溶供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每解并定量稀釋制成每1ml中約含中約含0.2mg的溶液，作為對(duì)的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各照品溶液。精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各3ml，分，分別置別置100ml量瓶中，加鹽酸溶液量瓶中，加鹽酸溶液(1200)5ml與磷酸與磷酸鹽緩沖液鹽緩沖液(pH6.0)(取磷酸

54、氫二鉀取磷酸氫二鉀20g與磷酸二氫鉀與磷酸二氫鉀80g，加水溶解并稀釋至加水溶解并稀釋至1000ml，用，用6mol/L磷酸溶液或磷酸溶液或10mol/L的氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)的氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至值至6.0)10ml，用，用水稀釋至刻度，搖勻，照紫外水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法可見分光光度法(附錄附錄A)，在，在310nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每瓶的的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每瓶的含量，求出平均含量，即得。含量，求出平均含量，即得。 74 鹽酸利多卡因注射液鹽酸利多卡因注射液 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱：十八

55、烷基硅烷鍵合硅膠 流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液乙腈流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液乙腈(50:50); (50:50); 檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm.254nm. 理論板數(shù)按利多卡因峰計(jì)算不低于理論板數(shù)按利多卡因峰計(jì)算不低于2000 2000 四、四、HPLCHPLC法法75鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因 v 【含量測(cè)定】照高效液相色譜法【含量測(cè)定】照高效液相色譜法(附錄附錄D)測(cè)定。測(cè)定。v 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液(取取1mol/L磷酸二氫鈉溶磷酸二氫鈉溶液液1.3ml與與0.5mol/L磷酸氫二

56、鈉溶液磷酸氫二鈉溶液32.5ml，加水，加水稀釋至稀釋至1000ml，搖勻，搖勻)-乙腈乙腈(50:50)(用磷酸調(diào)節(jié)用磷酸調(diào)節(jié)pH值至值至8.0)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按。理論板數(shù)按利多卡因峰計(jì)算不低于利多卡因峰計(jì)算不低于2000。v 測(cè)定法取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定測(cè)定法取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每量稀釋制成每1ml中約含中約含2mg的溶液，精密量取的溶液，精密量取20l注注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取利多卡因?qū)φ掌?，同法入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取利多卡因?qū)φ掌?，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并將結(jié)果乘以測(cè)定。

57、按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并將結(jié)果乘以1.156，即得。即得。76鹽酸普魯卡因注射液鹽酸普魯卡因注射液 v 【含量測(cè)定】照高效液相色譜法【含量測(cè)定】照高效液相色譜法(附錄附錄D)測(cè)定。測(cè)定。v 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以含膠為填充劑；以含0.1庚烷磺酸鈉的庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸磷酸二氫鉀溶液二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)用磷酸調(diào)節(jié)pH值至值至3.0)-甲醇甲醇(68:32)為為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm，理論板數(shù)按鹽酸普魯卡因，理論板數(shù)按鹽酸普魯卡因峰計(jì)算不低于峰計(jì)算不低于2000。鹽酸普魯卡因峰與

58、相鄰雜質(zhì)峰的分。鹽酸普魯卡因峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。離度應(yīng)符合要求。v 測(cè)定法精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每測(cè)定法精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每1ml中含鹽酸普魯卡因中含鹽酸普魯卡因0.02mg的溶液，作為供試品溶的溶液，作為供試品溶液，精密量取液，精密量取10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?，精密稱定，加水溶解并定量稀釋取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每制成每1ml中含鹽酸普魯卡因中含鹽酸普魯卡因0.02mg的溶液，同法測(cè)的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即

59、得。77鹽酸氯普魯卡因注射液鹽酸氯普魯卡因注射液 v【含量測(cè)定】【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法照高效液相色譜法(中國(guó)藥典中國(guó)藥典2000年版二部附錄年版二部附錄 D)測(cè)定。測(cè)定。 v以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.05mol/L檸檬酸檸檬酸-乙腈乙腈-水水(68:12:20)用三用三乙胺調(diào)乙胺調(diào)pH值至值至4.0為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按鹽酸氯普魯卡因峰計(jì)算應(yīng)。理論板數(shù)按鹽酸氯普魯卡因峰計(jì)算應(yīng)不低于不低于2000。鹽酸氯普魯卡因峰與。鹽酸氯普魯卡因峰與4-氨基氨基-2-氯苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于氯苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于5.0。重復(fù)進(jìn)樣，其。重復(fù)進(jìn)樣，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)小于應(yīng)小于2.0%。v按外標(biāo)