潔凈區(qū)微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)PPT演示課件(PPT 42頁)

1、潔凈區(qū)微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)2011年 趙靈芝1第1頁，共42頁。 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄中明確規(guī)定：潔凈區(qū)內(nèi)的人員數(shù)量應(yīng)嚴(yán)格控制，其工作人員（包括維修、輔助人員）應(yīng)定期進(jìn)行衛(wèi)生和微生物學(xué)基礎(chǔ)知識、潔凈作業(yè)等方面的培訓(xùn)及考核；對進(jìn)入潔凈室的臨時人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。2第2頁，共42頁。醫(yī)藥工業(yè)潔凈室必須以塵粒和微生物為環(huán)境控制對象二者相比，微生物更難以控制。1、存在范圍廣2、生長速度快3、生存能力強(qiáng)3第3頁，共42頁。什么是微生物？ 微生物（Microorganism）通常是描述一切不借助顯微鏡用肉眼看不見的微小生物，包括病毒、細(xì)菌、真菌、原生動物、和某些藻類。4第4頁，共42頁。微生物的種類具有

2、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微生物沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微生物：病毒原核生物：（由原核細(xì)胞構(gòu)成的）真核微生物（由真核細(xì)胞構(gòu)成的）真菌顯微藻類原生動物細(xì)菌草履蟲水綿放線菌5第5頁，共42頁。微生物的共同特點（小、多、快、強(qiáng)、廣）（1）體積小，面積大 （細(xì)胞以微米、納 米來計算） （2）吸收多，轉(zhuǎn)化快（3）生長旺，繁殖快 如大腸桿菌（4）適應(yīng)強(qiáng)，易變異 如感冒病毒（5）分布廣，種類多6第6頁，共42頁。分解者微生物消費(fèi)者動物環(huán)境土壤、空氣、水生產(chǎn)者植物（包括部分微生物）微生物在生態(tài)系統(tǒng)中的地位：消費(fèi)者，部分生產(chǎn)者7第7頁，共42頁。微生物對環(huán)境的有害影響植物病原菌：稻瘟病 煙草花葉病 煙草野火病動物病原菌：雞霍亂 豬瘟(口

3、涕疫)人類的疾病：非典型肺炎(SARS） 愛滋病 流感 傷寒8第8頁，共42頁。常見污染藥品制劑的微生物1、葡萄球菌 可引起局部感染2、大腸桿菌 膽道和尿道感染3、綠膿桿菌 化膿性感染、中耳炎、肺炎4、枯草桿菌 結(jié)膜炎5、酵母菌 使糖分解，藥液產(chǎn)生有機(jī)酸6、霉菌 使制劑霉壞，酸敗變質(zhì)9第9頁，共42頁。潔凈室內(nèi)微生物在哪里空氣水人員器具10第10頁，共42頁。空氣中的微生物灰塵微生物的飛行器微生物不是憑空存在，99%的微生物都附在顆粒上?？刂瓶諝庵械奈⒘?shù)，就是控制了微生物數(shù)量?；覊m、微粒具有沉降和粘附在趨勢，所以同一區(qū)域內(nèi)，地面是微粒相對集中在地方，也是微生物相對較多的地方，墻壁也容易粘附灰

4、塵。11第11頁，共42頁。98版GMP潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)/立方米微生物最大允許數(shù)0.5m5m浮游菌/立方米沉降菌/皿100級3,50005110,000級350,0002,0001003100,000級3,500,00020,00050010300,000級10,500,00060,0001,0001512第12頁，共42頁。Air lock兩扇門不能同時打開Air Lock倉庫or外包間潔凈區(qū)走廊Or DISP高效過濾器高效過濾器氣流13第13頁，共42頁。Air lock（緩沖間）的作用 控制空氣對流，減少外界臟空氣中的微粒、灰塵進(jìn)入車間。 必須保持緩沖間門的關(guān)閉，不得同時開啟。1

5、4第14頁，共42頁。空氣自凈和微粒的沉降與粘附空氣自凈有死角頂送頂回（潔凈走廊），地面頂送側(cè)回（清洗間，操作間），對面的墻角，頂棚。微粒沉降和粘附不能用腳踏在墊倉板和料桶上。不得跑跳、大聲喧嘩。不靠在墻上或其他物體上。15第15頁，共42頁。水微生物的樂園水體是微生物廣泛分布的第二個天然環(huán)境。 水中的細(xì)菌來自土壤、塵埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。16第16頁，共42頁。藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范第四章設(shè)備第三十四條中明確規(guī)定：純化水、注射用水的制備、儲存和分配應(yīng)能防止微生物的滋生和污染。儲罐和輸送管道所用材料應(yīng)無毒、耐腐蝕。管道的設(shè)計和安裝應(yīng)避免死角、盲管。儲罐和管道要規(guī)定清洗、滅菌周期17第17

6、頁，共42頁。制藥工業(yè)對水質(zhì)的要求藥廠的水源：城市自來水、井水等達(dá)到飲用水標(biāo)準(zhǔn)的水源?？诜苿浩瑒?、顆粒劑、糖漿容器清洗：飲用水容器最終淋洗：純化水小容量注射劑：15ml配制容器清洗：純化水容器最終淋洗：注射用水 18第18頁，共42頁。人潔凈室中最大的微生物污染源1、人在代謝過程中會釋放和分泌污染物。 2、人體表面、衣服能沾染、攜帶污染物。3、人在潔凈室內(nèi)的各種動作也會產(chǎn)生微粒和微生物。19第19頁，共42頁。人體內(nèi)外微生物的分布1、皮膚：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八疊球菌屬細(xì)菌、類白喉棒桿菌、金黃色葡萄球菌等2、口腔：唾液鏈球菌、溶血鏈球菌、乳酸桿菌、流感桿菌、類白喉棒桿菌等3、上呼吸

7、道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等。4、下呼吸道：包括氣管、支氣管和肺 。健康人的下呼吸道是無菌的。 5、胃腸道：大腸埃希氏菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌、糞鏈球菌、梭桿菌屬、螺旋體屬、乳桿菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬中的一些種6、泌尿生殖道：常見的有嗜酸乳桿菌、類白喉棒桿菌、葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌20第20頁，共42頁。如何阻斷人體污染源藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中明確規(guī)定：進(jìn)入潔凈室（區(qū)）的人員不得化妝和佩帶飾物，不得裸手直接接觸藥品。藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中明確規(guī)定：無菌工作服必須包蓋全部頭發(fā)、胡須及腳部，并能

8、阻留人體脫落物。 21第21頁，共42頁。國外實驗資料，可以認(rèn)為人員的發(fā)菌量有以下數(shù)據(jù)可供參考。潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無菌服時，靜止時的發(fā)菌量一般為10300 個(min人)，軀體一般活動時的發(fā)菌量為1501000 個(min人)，快步行走時的發(fā)菌量為9002500 個(min人)?？人砸淮蔚陌l(fā)菌量一般為70700 個(min人)，噴嚏一次的發(fā)菌量一般為400060000 個(min人)。穿平常衣服時發(fā)菌量為330062000 個(min人)。無口罩發(fā)菌量：有口罩發(fā)菌量為(1：7)(1：14)。發(fā)菌量：發(fā)塵量為(1 ： 500)(1：1000)?？芍獫崈羰覂?nèi)穿無菌衣人員的靜態(tài)發(fā)菌量一般不超過30

9、0 個(min人)，動態(tài)發(fā)菌量一般不超過1000 個(min人)。22第22頁，共42頁。我們的更衣流程一次更鞋：阻斷外界粘在鞋底的垃圾、顆粒及微生物。相對而言，腳底是最臟的部分。脫去外套：阻斷外界沉降在外套上的顆粒和微生物。一更洗手：規(guī)范的洗手能消除手部皮膚的污垢和大部分的微生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。二更帶口罩：阻斷鼻腔、呼吸道的微生物發(fā)散，潔凈區(qū)內(nèi)不能脫下口罩帶發(fā)套：阻斷頭發(fā)、頭皮表面的微生物發(fā)散。保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。穿連體服：阻斷體表皮膚的微生物發(fā)散。潔凈區(qū)內(nèi)不能解開連體服手消毒：再次消除手部的細(xì)菌和微生物。75%的酒精能殺滅99%的微生物。二次更鞋：阻斷一更、二更內(nèi)沉降

10、在地板上的顆粒和微生物。潔凈區(qū)工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。23第23頁，共42頁。平時的衛(wèi)生習(xí)慣勤洗澡、洗頭，勤換內(nèi)衣去除皮屑、頭屑等人體脫落物，保持體表潔凈。勤剪頭發(fā)工作時，頭皮不容易出汗，易被紙發(fā)套全部包裹。勤剪手指甲指甲內(nèi)能夠藏污納垢，有很多的致病微生物。勤換鞋準(zhǔn)備兩雙鞋每天交替穿著，保證鞋內(nèi)干燥無異味。24第24頁，共42頁。器具清洗：最后淋洗用水:純化水。清洗后按要求包裝并有清潔標(biāo)簽，注明清潔日期、有效期至和清洗人儲存有效期，混合器，7天；部件，包括不銹鋼桶、Bar、篩網(wǎng)等，30天25第25頁，共42頁。消毒（disinfection）：殺死物體上病原微生物的方法，并不一定殺死含芽胞

11、的細(xì)菌或非病原微生物。滅菌（sterilization）：殺死物體上所有微生物的方法。包括殺滅細(xì)菌芽胞在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌（bacteriostasis）：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。防腐（antisepsis）：防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法。無菌（asepsis）：不存在活的細(xì)菌。26第26頁，共42頁。消毒注意事項消毒劑濃度合適，針對特定范圍內(nèi)的細(xì)菌選擇相應(yīng)的消毒劑消毒劑在一定周期內(nèi)輪換使用，以防細(xì)菌耐藥。我公司常用消毒劑為：0.2%新潔爾滅、75%酒精溶液紫外燈消毒時記錄使用時間，紫外燈的輸出功率隨使用時間增加而降低。國產(chǎn)紫外燈的平均壽命（點到70%額定功率的時

12、間）一般為2000h，超過平均壽命時，就達(dá)不到預(yù)期效果，必須更換。我公司規(guī)定紫外燈使用時間為1000h。27第27頁，共42頁。熱原與內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原。熱原是微量即可引起恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某些藥物（類固醇）等。1、細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主要是脂多糖。 2、細(xì)菌內(nèi)毒素生物學(xué)活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護(hù)性反應(yīng)。3、其他理化特性耐熱性：120加熱4h，可破壞98%。180加熱2h或250加熱30min，才可徹底破壞。濾過性：其體積小，約在15nm之間

13、，故能通過濾器進(jìn)入濾液中。具有水溶性及不揮發(fā)性。能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和氧化劑破壞28第28頁，共42頁。熱原與內(nèi)毒素4、熱源引入的途徑 從溶劑中帶進(jìn) 從原料中帶進(jìn) 從容器、用具、管道和裝置等帶進(jìn) 制備過程中的污染 從輸液器帶入29第29頁，共42頁。熱原與內(nèi)毒素5、消除細(xì)菌內(nèi)毒素的方法 高溫破壞法：可用180干烤34h或250干烤30min。 吸附法：一般選用活性炭。 蒸餾法：此法僅限于制備蒸餾水。 化學(xué)酸堿和氧化法。 離子交換法。 反滲透法。 凝膠過濾法。 超濾法 30第30頁，共42頁。藥品的微生物污染藥品微生物污染：微生物的產(chǎn)生、附著而給藥品及生產(chǎn)環(huán)境帶來不良影響。藥品的微生物污染也稱染菌。污

14、染藥品的細(xì)菌：常見污染藥物制劑的細(xì)菌是一些生命力較強(qiáng)的細(xì)菌，如：葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、枯草桿菌及一些霉菌，抵抗力弱的細(xì)菌一般不易造成污染。藥品的微生物污染源：空氣、水、廠房與設(shè)備、藥品生產(chǎn)用原輔料、包裝材料、昆蟲和其它嚙齒動物、生產(chǎn)操作人員31第31頁，共42頁。消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對微生物的殺滅程度 消毒：殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細(xì)菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁

15、殖。防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常為防腐劑。無菌：不存在活的細(xì)菌。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)，為無菌操作。32第32頁，共42頁。芽孢芽孢是細(xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)態(tài)細(xì)胞； 一般的芽孢在普通的條件下可保存幾年至幾十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5億年；其對熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒等理化因素有強(qiáng)大的抵抗力；殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。33第33頁，共42頁。消毒與滅菌一、物理滅菌方法熱力滅菌法輻射殺菌法濾過除菌法超聲波殺菌法干燥與低溫抑菌法34第34頁，共42頁。消毒與滅菌熱力

16、滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶解，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。1、干熱滅菌法采用灼燒或干熱空氣滅菌 ，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌 。2、濕熱滅菌法利用熱蒸汽殺死微生物。 高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法 ，蒸汽的穿透力較熱空氣強(qiáng)可以殺死一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個體 。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。35第35頁，共42頁。消毒與滅菌輻射滅菌法 1、紫外線：波長200-300nm的紫外線具有殺 菌作用。穿透物質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過1.0米為宜 2、電離輻射 高速電子、X射線、射線 3、微波

17、波長1mm1m36第36頁，共42頁。消毒與滅菌濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。濾菌器含有微細(xì)小孔0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過 。適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。37第37頁，共42頁。消毒與滅菌二、化學(xué)滅菌方法許多化學(xué)藥物能影響微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。潔凈室(區(qū))應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。38第38頁，共42頁。 消毒與滅菌常用消毒劑種類和用途類別作用機(jī)制常用種類用途酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷

18、石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性75酒精皮膚、體溫計消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀二氧化氯地面、器具表面、皮膚消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷0.1新潔而滅地面、器具表面、皮膚消毒39第39頁，共42頁。衛(wèi)生管理1.了解污染源 對藥品生產(chǎn)全過程可能造成污染的來源，進(jìn)行深入的了解研究，從而設(shè)計一個完好的生產(chǎn)工藝，制定規(guī)章制度和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，從各個環(huán)節(jié)采取消毒和衛(wèi)生措施來防止微生物污染，使產(chǎn)品達(dá)到所要求的衛(wèi)生學(xué)質(zhì)量，包括穩(wěn)定性及各種微生物參數(shù)。2.進(jìn)行微生物監(jiān)測 在藥品生產(chǎn)過程中，應(yīng)按GMP要求不斷進(jìn)行各項微生物衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測。例如：對潔凈室空氣中的浮游菌、沉降菌的監(jiān)測；對無菌設(shè)備清潔滅菌的驗證；對非無菌藥品進(jìn)行細(xì)菌和活菌數(shù)測定和病原菌的限制性檢查等。40第40頁，共42頁。衛(wèi)生管理3.定期進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生清潔 嚴(yán)格按照“管理規(guī)程（生）管-3生產(chǎn)科環(huán)境衛(wèi)生管理的有關(guān)規(guī)定”對生產(chǎn)科各個區(qū)域進(jìn)行清潔衛(wèi)生，確保生產(chǎn)區(qū)域符