細(xì)胞生物學(xué)研究方法市公開課金獎市賽課一等獎?wù)n件

1、1 第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法郭兆峰10生物工程學(xué)號:104177306第1頁2第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察方法 第二節(jié) 細(xì)胞及其組分分析方法 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程 第四節(jié)細(xì)胞及生物大分子動態(tài)改變 第五節(jié)模式生物與功效基因組研究 學(xué)習(xí)內(nèi)容第2頁3第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察方法一、光學(xué)顯微鏡(light microscopy) （一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡（二）相差顯微鏡和微分干涉顯微鏡（三）熒光顯微鏡（四）激光掃描共焦顯微鏡（五）其它二、電子顯微鏡(Electro microscopy)第3頁4（一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡1. 組成： 光學(xué)放大系統(tǒng)：目鏡與物鏡 照明系統(tǒng)：光源和聚光鏡 機(jī)械裝置：鏡架和樣

2、品調(diào)整系統(tǒng)2. 原理：物體經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡深入放大成像。第4頁50.61 分辨率 DN . sin/2=分辨率(resolusion)：區(qū)分兩個質(zhì)點(diǎn)間最小距離。其中: N=標(biāo)本和物鏡之間介質(zhì)折射率； =入射光線波波長； =鏡口角（樣品對物鏡鏡口張角） Nsin/2稱為物鏡數(shù)值孔徑第5頁6顯微鏡幾個光學(xué)特點(diǎn)：制作光學(xué)鏡頭所用玻璃折射率為1.651.78，所用介質(zhì)折射率越靠近玻璃越好。sin /2最大值必定小于1；介質(zhì)為空氣，鏡口率普通為0.050.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可靠近1.5。普通光線波長為400700nm，分辨力數(shù)值不會小于0.2m，人眼分辨力為0.2mm，所以顯微

3、鏡最大設(shè)計倍數(shù)為1000X。第6頁71.原理：利用光衍射和干涉特征使相位差變成振幅差，表現(xiàn)為明與暗對比。2.兩個特殊構(gòu)件：環(huán)狀光闌（annular diaphragm）：位于光源與聚光器之間。相位板（annular phaseplate）：涂有光吸收物質(zhì)和相位推遲物質(zhì)。3.用途：能觀察無色、透明、活細(xì)胞中結(jié)構(gòu)。（二）相差顯微鏡第7頁8決定光學(xué)顯微鏡分辨率要素：物鏡鏡口角（），入射光波長（ ），介質(zhì)折射率（N）A 兩束光相位相同是，干涉使光振幅加強(qiáng) ，B 相位相反是，干涉使光振幅減弱第8頁91.原理：利用兩組平面偏振光干涉，加強(qiáng)影像明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)三維立體投影。 微分干涉顯微鏡2.應(yīng)用：適于

4、研究活細(xì)胞中較大細(xì)胞器、顆粒及其運(yùn)動。計算機(jī)輔助DIC分辨率比普通光鏡提升了一個數(shù)量級。應(yīng)用這一原理制備錄像增差顯微鏡（video-enhance microscopy）能夠觀察微管上顆粒運(yùn)動。第9頁10（三）熒光顯微鏡 Fluorescence microscope1.原理：以紫外線為光源照射被檢物體，使之發(fā)生熒光，然后在顯微鏡下觀察物體形態(tài)及其所在位置。2.特點(diǎn)：光源不直接照明，而是激發(fā)能源；需特殊濾色鏡；分辨率高。3.用途：在光鏡水平用于特異蛋白質(zhì)等生物大分子定性、定位。既能夠觀察切片，也能夠進(jìn)行活體觀察。有免疫熒光技術(shù)和熒光素直接標(biāo)識技術(shù)。 第10頁11熒光基本原理及其應(yīng)用第11頁12

5、（四）激光掃描共聚焦顯微鏡 用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描,形成立體圖像，可重構(gòu)樣品三維結(jié)構(gòu)。能顯示細(xì)胞樣品立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能夠排除焦平面以外光干擾，增強(qiáng)圖像反差和提升分辨率。第12頁13 激光掃描共聚焦顯微鏡原理第13頁14倒置顯微鏡 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技 (Fluorescence resonance energy transfer, FRET) (五)其它光學(xué)顯微鏡熒光漂白恢復(fù)技術(shù)第14頁15二 電子顯微鏡第15頁16用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣品立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不

6、一樣層次，形成立體圖像。（一） 原理第16頁17第17頁18以電子束作光源，電磁場作透鏡。電子束波長短，而且波長與加速電壓(通常50120KV)平方根成反比。由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、統(tǒng)計系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分組成。分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)即小于0.2m、光學(xué)顯微鏡下無法看清結(jié)構(gòu)，又稱亞顯微結(jié)構(gòu)。電子顯微鏡優(yōu)點(diǎn)第18頁19顯微鏡分辨本事光源透鏡真空成像原理光鏡200nm可見光（400-700nm） 玻璃透鏡不要求真空利用樣品對光吸收形成明暗反差和顏色改變電鏡0.1nm電子束（0.01-0.9nm）電磁透鏡1.33x10-51.33x10-3Pa利

7、用樣品對電子散射和透射形成明暗反差電鏡與光鏡比較第19頁20（二） 主要電鏡制樣技術(shù)1. 超薄切片技術(shù)制作超薄切片流程： 固定 包埋 切片 染色通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐層脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色第20頁第21頁222. 負(fù)染色技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)對鋪展在載網(wǎng) 上樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。第22頁233. 冷凍蝕刻技術(shù)亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組

8、織溶掉，把碳和鉑膜剝下來，此膜即為復(fù)膜第23頁24第24頁254. 電鏡三維重構(gòu)與低溫電鏡技術(shù)電子顯微術(shù)、電子衍射與計算機(jī)圖象處理相結(jié)合而形成含有主要應(yīng)用前景一門新技術(shù)。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)要碩士物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系主要試驗(yàn)伎倆。 第25頁265. 掃描電鏡技術(shù)工作原理：是用一束極細(xì)電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子多少與樣品表面結(jié)構(gòu)相關(guān)，次級電子由探測器搜集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束強(qiáng)度，顯示出與電子束同時掃描圖像。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束

9、轟擊下發(fā)出次級電子信號。第26頁27掃描電鏡原理示意圖第27頁28三 掃面隧道顯微鏡原理：依據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計，當(dāng)原子尺度針尖在不到一個納米高度上掃描樣品時，此處電子云重合，外加一電壓（2mV2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流改變轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平凹凸形態(tài)。分辨率：橫向?yàn)?.10.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察。第28頁29掃面隧道顯微鏡主要特點(diǎn)：含有原子尺度高分辨本事，側(cè)分辨率為0.1到0.2nm，縱分辨率為0.001nm能夠在真空、大氣、液體等各種環(huán)境下工作非破壞性測量第29頁

10、30第二節(jié) 細(xì)胞及其組分分析方法一 超離心技術(shù)分離細(xì)胞組分二 細(xì)胞組分細(xì)胞化學(xué)顯示方法三 特異蛋白抗原定位與定性四 細(xì)胞內(nèi)特異核酸定位與定性五 定量細(xì)胞化學(xué)分析與細(xì)胞分選技術(shù)第30頁31一 超離心技術(shù)分離細(xì)胞組分是分離細(xì)胞器及各種大分子基本伎倆。轉(zhuǎn)速為1025kr/min離心機(jī)稱為高速離心機(jī)。轉(zhuǎn)速25kr/min，離心力89K者稱為超速離心機(jī)。超速離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超出500Kg。第31頁32差速離心：分離大小相差懸殊細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降次序：核線粒體溶酶體與過氧化物酶體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體核蛋白體。密度梯度離心：將分離細(xì)胞組分放在密度逐步增加、高溶解度性惰性物質(zhì)形成密度

11、梯度溶液表面經(jīng)過重力或離心作用使樣品中不一樣組分以不一樣速率沉降。速度沉降主要用于分離密度相近而大小不一細(xì)胞組分等密度沉降用于分離不一樣密度組分第32頁33二 細(xì)胞組分細(xì)胞化學(xué)顯示方法DNA：福爾根（Feulgen）反應(yīng)紫紅色多糖類：PAS反應(yīng)黃色脂肪：蘇丹III紅色蛋白質(zhì)：米倫（Millon）紅色細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂類等物質(zhì)，利用一些顯色劑與所檢測物質(zhì)中一些特殊基團(tuán)特異性結(jié)合，顯現(xiàn)出顏色來判斷含量和分布技術(shù)第33頁34金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應(yīng)：醛基可使Schiff試劑中無色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示

12、糖和脫氧核糖核酸。聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解H202，產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)。顯示方法第34頁35三 特異蛋白抗原定位與定性1、免疫熒光技術(shù)將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)識技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白在細(xì)胞內(nèi)分布。慣用熒光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。有直接免疫熒光和間接免疫熒光。第35頁36A 直接免疫熒光標(biāo)識技術(shù)：將熒光分子與抗體歐聯(lián)后直接用于免疫標(biāo)識技術(shù)B 間接免疫標(biāo)識技術(shù)：先將抗體（稱第一抗體）與抗原反應(yīng)，然后加入與熒光分子相偶聯(lián)抗第一抗體抗體（稱第二抗體）。第36頁372 免疫電鏡技術(shù)將樣品

13、進(jìn)行特殊標(biāo)識增強(qiáng)反差，從而進(jìn)行亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和分子定位。特點(diǎn): 分辨率高依據(jù)標(biāo)識方法不一樣分為：免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)。第37頁38四 細(xì)胞內(nèi)特異核酸定位與定性細(xì)胞內(nèi)特異核酸定位與定性通常采取原位雜交技術(shù)原位雜交技術(shù)：用標(biāo)識核酸探針經(jīng)過分子雜交確定特異性核苷酸序列在染色體上或細(xì)胞中位置方法。第38頁39A 免疫膠體金標(biāo)識技術(shù)原理示意圖，細(xì)菌蛋白A能夠與膠體金結(jié)合，也和與膠體Fc端特異性結(jié)合B免疫膠體金標(biāo)識顯示膀胱上皮細(xì)胞膜蛋白分布第39頁40免疫膠體金技術(shù)：膠體金是直徑1-100mm金顆粒分散在水中形成金溶膠。特點(diǎn)：特異性強(qiáng)輕易識別分辨率高第40頁41五 定量細(xì)胞化學(xué)分析與細(xì)

14、胞分選技術(shù)原理：包在鞘液中細(xì)胞經(jīng)過高頻振蕩控制噴嘴，形成包含單個細(xì)胞液滴，在激光束照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果，并可依據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞計第41頁42用途：對單個細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選一門技術(shù)。用于定量測定細(xì)胞中DNA、RNA或某一特異蛋白含量；測定細(xì)胞群體中不一樣時相細(xì)胞數(shù)量；從細(xì)胞群體中分離一些特異染色細(xì)胞；分離DNA含量不一樣中期染色體。第42頁43A 流式細(xì)胞儀分選原理示意圖B 顯示流式細(xì)胞儀分析處于不一樣相HaLa細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果第43頁44第三節(jié)

15、 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程細(xì)胞工程技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)交叉領(lǐng)域，主要是利用細(xì)胞生物學(xué)原理和方法，結(jié)合工程學(xué)技術(shù)伎倆，按照人們預(yù)先設(shè)計，有計劃地改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳性技術(shù)。主要內(nèi)容包含：細(xì)胞融合、細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及組織培養(yǎng)等。目標(biāo)是取得細(xì)胞產(chǎn)品或利用細(xì)胞本身。第44頁45（一） 動物細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞 ：110代以內(nèi)細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)：提取健康動物組織塊，剪碎用濃度與活性適中胰酶或膠原酶與螯合劑等將細(xì)胞分散給予良好營養(yǎng)液與無菌環(huán)境在培養(yǎng)中進(jìn)行慢速轉(zhuǎn)動或靜止培養(yǎng)不論何種培養(yǎng)液都要加入一定量小牛血清第45頁46貼壁培養(yǎng)：培養(yǎng)細(xì)胞貼壁生長，呈多態(tài)性，單層生長，保持接觸抑制（conta

16、ct inhibition），也叫單層細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞系：能夠傳代40-50次而且仍保持原來染色體二倍體數(shù)量及接觸抑制行為傳代細(xì)胞。特點(diǎn)：有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，有癌變傾向細(xì)胞株：經(jīng)過生物學(xué)判定含有特殊遺傳標(biāo)識或性質(zhì)細(xì)胞克隆第46頁47連續(xù)細(xì)胞系（永生細(xì)胞系）：50代以后 、遺傳物質(zhì)發(fā)生改變、能夠無限制傳代培養(yǎng)下去特點(diǎn)：染色體顯著改變，普通呈亞二倍體或非整倍體失去接觸抑制，輕易傳代培養(yǎng)A 正在分裂HeLa細(xì)胞B 長滿單層CHO原代細(xì)胞第47頁48試驗(yàn)室中慣用幾個連續(xù)細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型起源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞Henrietta Lacks BHK21成纖維細(xì)胞敘利亞

17、倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP20骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國地鼠第48頁49(二) 植物細(xì)胞培養(yǎng)單倍體細(xì)胞培養(yǎng)：花藥在培養(yǎng)基上人工培養(yǎng)小孢子直接發(fā)育成胚狀體，然后長成單倍體植株經(jīng)過愈傷組織誘導(dǎo)分化出芽和根，最終長成植株原生質(zhì)體培養(yǎng)：除去細(xì)胞壁細(xì)胞誘導(dǎo)分化長成植株用不一樣植物原生質(zhì)體進(jìn)行融合與體細(xì)胞雜交，長成體細(xì)胞雜交植株第49頁50細(xì)胞工程細(xì)胞工程基本技術(shù)主要包含：細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞融合細(xì)胞器移植及細(xì)胞工程，就是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法，對細(xì)胞進(jìn)行操作。 第50頁51細(xì)胞融合：兩個細(xì)胞融合成一個雙核或多核細(xì)胞核現(xiàn)象動物細(xì)胞融合：滅活

18、病毒 (仙臺病毒）或化學(xué)物質(zhì) (聚乙二醇 PEG)介導(dǎo)形成融合細(xì)胞。植物細(xì)胞融合：先用纖維素酶去壁電融合： 在高壓電脈沖 (1-1.8kv/cm)下促使融合。（一） 細(xì)胞融合與單克隆抗體技術(shù)第51頁52同核融合細(xì)胞：基因型相同細(xì)胞形成融 合細(xì)胞異核融合細(xì)胞：基因型不一樣細(xì)胞形成融合細(xì)胞融合核細(xì)胞：經(jīng)過細(xì)胞雜交形成單核子細(xì)胞第52頁53單克隆抗體：高度均質(zhì)性特異性抗體，由一個識別單一抗原表位B細(xì)胞克隆所分泌。普通來自雜交瘤細(xì)胞。 1975年英國人Kohler和Milstein創(chuàng)造，所以獲1984年諾貝爾獎。原理：淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，但在體外不能無限分裂，而瘤細(xì)胞即使能夠在體外長久培養(yǎng)，但不分泌

19、抗體。將這兩種細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞含有兩個親本特征，既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。第53頁54操作過程：將小鼠髓瘤細(xì)胞與經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫過小鼠脾細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）在聚乙醇或滅活 病毒介導(dǎo)下發(fā)生融合第54頁55融合后雜交瘤細(xì)胞含有兩種細(xì)胞特征一、能夠分泌抗綿羊紅細(xì)胞抗體二、像腫瘤細(xì)胞一樣，能夠在體外培養(yǎng)條件下或移植到體內(nèi)無限增殖單克隆抗體主要優(yōu)點(diǎn)：是能夠用混合性異質(zhì)抗原制備出針對某單一性抗原分子上特異決定簇同性質(zhì)單克隆抗體。第55頁56（二）顯微操作技術(shù)與動物克隆細(xì)胞拆合物理方法：機(jī)械/短波光去核移入去核細(xì)胞中雜交細(xì)胞顯微操作儀化學(xué)方法：松胞素處理細(xì)胞離心拆分細(xì)胞核體外包一層細(xì)胞膜和少許胞漿（小細(xì)

20、胞）PEG介導(dǎo)核體可同另一胞質(zhì)體融合重組細(xì)胞可合成RNA和進(jìn)行細(xì)胞分裂結(jié)合胚胎移植技術(shù)直接應(yīng)用于育種第56頁第四節(jié) 細(xì)胞及生物大分子動態(tài)改變（一） 熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（FPR）用親脂性或親水性熒光分子與蛋白或脂質(zhì)偶聯(lián)，用于檢測所標(biāo)識分子在活體細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)部運(yùn)動及其遷移速率原理：利用高能激光束照射細(xì)胞某一特定區(qū)域，使該區(qū)域內(nèi)標(biāo)識分子發(fā)生不可逆淬滅，稱為漂白區(qū)，伴隨脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)運(yùn)動，漂白區(qū)逐步恢復(fù)到原有水平第57頁熒光漂白技術(shù)原理示意圖第58頁（二）單分子技術(shù)與細(xì)胞生命活動研究單分子技術(shù)是在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)觀察單一分子運(yùn)動規(guī)律技術(shù)，能夠在納米空間尺度和毫秒時間尺度上準(zhǔn)確測量單個分子距離、位置、指向

21、、分布、結(jié)構(gòu)以及各種動態(tài)過程分類：能夠從工作原理或測量參數(shù)分類以工作原理分成單分子光譜及成像、單分子操作及力學(xué)性質(zhì)測量優(yōu)點(diǎn)：實(shí)時直接觀察單個分子反應(yīng)動力學(xué)路徑測量單一分子間相互作用力捕捉單一分子隨機(jī)過程和分子構(gòu)象改變中間態(tài)測量稀發(fā)但主要信號和分布測量非平衡態(tài)和不一樣時體系第59頁（三） 酵母雙雜交技術(shù)酵母雙雜交系統(tǒng)巧妙地利用了真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子組件式結(jié)構(gòu)特征，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)往往由兩個或兩個以上相互獨(dú)立結(jié)構(gòu)域組成，其中DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域是轉(zhuǎn)錄激活因子發(fā)揮功效所必須。單獨(dú)BD能與特定基因開啟區(qū)結(jié)合，但不能激活基因轉(zhuǎn)錄，而由不一樣轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子BD和AD所形成雜合蛋白卻能行使激活轉(zhuǎn)錄功效。第60頁用于與檢測蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)互做酵母雙雜交技術(shù)原理示意圖第61頁（四） 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)原理：在一定波長激發(fā)光照下，只有攜帶發(fā)光基團(tuán)A供體分子能夠被激發(fā)出波長是A熒光，而同一激發(fā)光不能激發(fā)攜帶發(fā)光基團(tuán)B受體分子發(fā)出波長是B熒光，當(dāng)吸收光譜A和 吸收光譜B重合，而且兩個發(fā)光基團(tuán)距離小到一定程度時會發(fā)生不一樣程度能量轉(zhuǎn)移，受體分子發(fā)出了波長是B熒光第62頁熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理圖第63頁（五） 放射自顯影技術(shù)原理：利用放射性同位素電離射線對乳膠感光作用，對細(xì)胞