膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)-3課件

1、斜面4支，空氣、手指皮膚、細(xì)菌分離培養(yǎng)物（上次實(shí)驗(yàn)平板）器材準(zhǔn)備醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三空氣細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號(hào)采樣時(shí)間(min)采樣地點(diǎn)菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù) A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時(shí)間(15分鐘) CFU：colony forming unit WHO推薦的醫(yī)院各部門空氣細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別cfu/m3適用范圍級(jí)區(qū)10器官移植、心血管、矯形等外科手術(shù)室，保護(hù)性隔離室，灌注或配制注射液實(shí)驗(yàn)室級(jí)區(qū)20

2、0無(wú)菌室、手術(shù)室、供應(yīng)室、嬰兒室、中心滅菌單位、術(shù)后恢復(fù)室、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥監(jiān)護(hù)病房級(jí)區(qū)200500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術(shù)室浴室我國(guó)公共場(chǎng)所空氣衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個(gè)/皿適用范圍10001035星級(jí)賓館、飯店1500202星級(jí)以下賓館和非星級(jí)帶空調(diào)賓館、飯店250030普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書(shū)館、博物館、美術(shù)館、飛機(jī)客艙400040音樂(lè)廳、影劇院、錄像廳（室）、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機(jī)室、旅客列車車廂、輪船

3、客艙、飯館（餐廳）700075展覽館、商場(chǎng)（店）、書(shū)店、候車室、候船室手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+ 第2格為洗手后 常規(guī)(甲、丙)洗手方法：? 標(biāo)準(zhǔn)(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？第4格空白對(duì)照：-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)（三）菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（講解）膿汁和糞便標(biāo)本檢驗(yàn)（錄像）細(xì)菌的純培養(yǎng) Pure Cultures膿汁標(biāo)本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細(xì)菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、不透明。37培養(yǎng)24小時(shí) 糞便標(biāo)本在伊紅美藍(lán)平板上，有紫

4、黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細(xì)菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是因?yàn)榇竽c埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍(lán)結(jié)合，形成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑12mm。37培養(yǎng)24小時(shí) 斜面接種分工甲普通平板黃色菌落1支斜面 乙普通平板白色菌落1支斜面 丙伊紅美藍(lán)平板紫黑菌落1支斜面 丁伊紅美藍(lán)平板粉紅菌落1支斜面 斜面正面上2/3作標(biāo)記：組號(hào)、黃色、白色、紫黑、粉紅。選擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落。在平皿底部玻璃上，畫(huà)個(gè)大圈選取菌落，得到同組同學(xué)認(rèn)可，才能挑取。畫(huà)圈選菌落畫(huà)圈選

5、菌落甲黃色丙紫黑乙白色丁粉紅接種環(huán)套住菌落輕刮取菌斜面接種法 Streak Slant Method甲黃色, 乙白色。丙紫黑, 丁粉紅。標(biāo)記：組號(hào)，顏色細(xì)菌接種在斜面培養(yǎng)基的表面。生物安全警告接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開(kāi),5um通過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說(shuō)話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡開(kāi)關(guān)與調(diào)整光強(qiáng)開(kāi)或關(guān)之前，必須將亮度調(diào)整

6、旋鈕按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)到最小位置，以免損壞燈泡。電源開(kāi)關(guān)撥到側(cè)為開(kāi)，撥到側(cè)為關(guān)閉。按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)亮度調(diào)整旋鈕變亮，相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)則變暗。聚焦從顯微鏡的側(cè)面觀察，按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕，使物鏡盡可能接近標(biāo)本。一邊看目鏡，一邊慢慢逆箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕， 使載物臺(tái)下降。看到標(biāo)本以后，用微調(diào)旋鈕來(lái)正確對(duì)焦。10倍物鏡的工作距離（WD，從物鏡到標(biāo)本的 距離）為10.5mm。 油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌用聚光鏡上下移動(dòng)旋鈕，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。在孔徑光闌環(huán)上刻有物鏡倍率（10倍，100倍等），觀察時(shí)將與使用物鏡相對(duì)應(yīng)的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，將希望使用的物鏡（10倍、1

7、00倍）轉(zhuǎn)到標(biāo)本的上方。100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對(duì)好焦距。如果浸油內(nèi)有氣泡，會(huì)影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，使油鏡來(lái)回通過(guò)12次浸油，排除油內(nèi)氣泡。香柏油折射率n=1.515空氣的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸鏡的原理光線 滴加香柏油可使光線更多進(jìn)入物鏡,避免光線通過(guò)折射率低的空氣而散失,以提高物鏡的分辨率,使物象明亮清晰。 放大倍數(shù)：目鏡10倍物鏡90或100倍。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡（實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，每人一臺(tái)）注意：只能橫放，不得豎放。顯微鏡油鏡的使用P1310物鏡標(biāo)本位置

8、滴加香柏油100油鏡浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸（工作距離0.13mm）細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像記錄結(jié)果關(guān)閉電源。油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油 擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩 橫放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)。(順德校區(qū)）實(shí)驗(yàn)臺(tái)兩側(cè)的電源插座，只能插入一個(gè)插頭，請(qǐng)選擇離你最近的電源插座。（校本部）實(shí)驗(yàn)臺(tái)中間，三個(gè)位的插座，中間那位插孔沒(méi)有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三、一空氣、手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（講解）膿汁標(biāo)本檢驗(yàn) （錄像）腸道致病菌的分離鑒定（錄像）思考題在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,怎樣才能避免雜菌的污染?空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如何?你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了什么問(wèn)題?怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃