試驗五-血液葡萄糖的測定

試驗五血液葡萄糖的測定福林——吳憲氏法葡萄糖是一種多羥基醛類化合物，具有還原性，在與堿性銅試劑混合加熱時，將二價銅還原為磚紅色的氧化亞銅沉淀。＋Cu2+COOHCu2O↓＋OHOHOHOHOHO氧化亞銅可使磷鉬酸還原生成鉬藍，使溶液呈藍色。生成藍色的深度與血濾液中的葡萄糖濃度成正比，從而間接測定葡萄糖濃度。H3PO4·12MoO3＋Cu2O↓鉬藍鉬藍是鉬以混合價態(tài)所形成的一系列氧化物和氫氧化物混合型化合物之總稱。因呈深藍色。鉬的平均化合價在5～6之間。用不同的還原方式可以得到不同狀態(tài)的鉬藍。由溫和的還原劑（如二價錫、二氧化硫、聯(lián)氨或硫化氫等）還原微酸性的鉬酸鹽稀溶液時，得懸膠狀的鉬藍；后者用于鉬的比色測定。由氫化鋁鋰還原氧化鉬，則得晶體鉬藍，例如：Mo4O10(OH)2及Mo8O15(OH)6等。

濃度測定——分光光度計分光光度法：是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的分析檢測技術(shù).工作原理不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).

當一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時，當某一定頻率（或波長）的可見光所具有的能量（hf）恰好與待測物質(zhì)分子中的價電子的能級差相適應(yīng)（即ΔE=E2-E1=hf）時，待測物將對該頻率（波長）的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見分光光度計可以測量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定條件下，吸光度A與待測物質(zhì)的濃度C及吸收池長度L的乘積成正比，即A＝KCL

在測得吸光度A后，可采用標準曲線法、比較法以及標準加入法等方法進行定量分析。分光光度計用法調(diào)波長到420nm處開蓋調(diào)零，關(guān)蓋調(diào)100%（透射比處）讀數(shù)（吸光度處）用完后將蓋打開，否則光電管會一直工作，損害較大實驗試劑1/6mol/L硫酸溶液葡萄糖貯存標準液葡萄糖應(yīng)用標準液1：4磷鉬酸稀釋液堿性銅試劑10%鎢酸鈉溶液抗凝血磷鉬酸試劑0.25%苯甲酸溶液實驗試劑實驗步驟一、無蛋白血濾液的制備4.9ml蒸餾水

0.7ml全血

0.7ml2/3NH2SO4混勻即得血濾液放置5min,2500rpm離心10分鐘,取上清備用.0.7ml10%鎢酸鈉

實驗步驟二、光密度值的測定血糖管試劑空白管標準管測定管無蛋白濾液（ml）蒸餾水（ml）標準葡萄糖應(yīng)（ml）堿性銅試劑（ml）0.04.00.02.00.0（0.0）0.0（1.0）4.0（3.0）2.04.0002.0取四支血糖管按下表操作：混勻，置沸水浴中煮8分鐘，取出，用流動自來水冷卻3分鐘（切勿搖動血糖管）磷鉬酸試劑（ml）2.02.02.01：4磷鉬酸溶液加至252525混勻后放置2分鐘（使二氧化碳氣體逸出）1：4磷鉬酸溶液加至25刻度處后，用塑料塞住管口顛倒混勻，用空白管調(diào)“0”點，在420nm波長處進行比色，讀取各管的光密度值。實驗步驟三、計算葡萄糖含量測定管光密度值標準管光密度值測定管濃度標準管濃度

=按以下公式計算葡萄糖含量：注意事項1、無蛋白濾液制備：加入硫酸、鎢酸鈉試劑時要一滴一滴地加，邊加邊搖，使血液中蛋白質(zhì)充分變質(zhì)。所用方法是將原來樣品稀釋10倍，因此1ml無蛋白濾液相當于0.1ml的全血。1、加磷酸鉬試劑之前，溶液要充分混勻，待水沸騰后，精確煮沸8分鐘，沸水浴中加熱過程中不要搖動，冷卻時也切勿搖動血糖管。---避免生成的亞銅被氧氣再氧化。3、先加入磷鉬酸2.0ml，再加入1：4的磷鉬酸溶液至25ml，加樣時