5種植物源藥劑對蘋果樹腐爛病室內(nèi)防效評價

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材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試菌株

蘋果樹腐爛病菌Valsamail由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物養(yǎng)護(hù)學(xué)院植物病原學(xué)測驗(yàn)室分開保存。

1.1.2離體枝條

采集于甘肅省蘭州市西固區(qū)蘋果園‘新紅星’健康枝條，樹齡為20年。

1.1.3供試藥劑

20%乙蒜素乳油（EC），河南省南陽臥龍農(nóng)藥廠;0.3%丁子香酚可溶液劑（SL），南通神雨綠色藥業(yè)有限公司;5%香芹酚水劑（AS），蘭州世創(chuàng)生物科技有限公司;1.3%苦參堿水劑（AS），恒源偉業(yè)生物科技有限公司;0.5%小檗堿水劑（AS），濰坊奧豐作物病害防治有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1含藥培養(yǎng)基的制備

將供試藥劑經(jīng)無菌水按半倍稀釋法[9]配制成如表1所示濃度的藥液，將不同濃度藥劑參與滅菌后冷卻至50℃的PDA培養(yǎng)基，充分振蕩混合平勻后倒入培養(yǎng)皿，以加無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照，待培養(yǎng)基凝固后接種蘋果樹腐爛病病原菌，舉行預(yù)試驗(yàn)，篩選出較好的藥劑設(shè)定濃度舉行毒力測定（表2）。

1.2.2不同植物源藥劑對蘋果樹腐爛病菌菌落生長的抑制作用

用打孔器（d=5mm）從培養(yǎng)7d的蘋果樹腐爛病菌菌落邊緣打取菌餅，接種到含藥和空白對照平板中央。以加無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)5d后采用十字交錯法測量菌落直徑，計(jì)算生長抑制率。

生長抑制率=[（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-0.5）]×100%。

1.2.3不同植物源藥劑對蘋果樹腐爛病菌孢子活性的影響

在超凈工作臺上，將5種農(nóng)藥稀釋成不同濃度，制成含藥培養(yǎng)基。待培養(yǎng)基冷卻后，滴入50μL腐爛病菌孢子懸浮液，用無菌玻璃涂布器將孢子懸浮液涂抹平勻。每個處理設(shè)置3個重復(fù)，以參與等量無菌水的PDA為空白對照。將涂抹平勻的PDA培養(yǎng)基置于25℃黑暗條件下倒置培養(yǎng)24h后切取1cm2大小的正方形培養(yǎng)基放于載玻片上，在顯微鏡下查看孢子的萌發(fā)狀況。每個重復(fù)選擇100個孢子檢查萌發(fā)率。計(jì)算孢子萌發(fā)率和抑制率。

孢子萌發(fā)率=（萌發(fā)的孢子數(shù)/孢子總數(shù)）×100%;

萌發(fā)抑制率=[（對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率]×100%。

1.2.4不同植物源藥劑對接種病原菌的離體枝條養(yǎng)護(hù)作用

參照翟慧者[10]和臧睿等[11]離體枝條接種方法，截取10cm長的離體枝條，先用自來水沖洗明凈，再用無菌水沖洗，接著用脫脂棉蘸取酒精對枝條外觀舉行消毒，結(jié)果置于超凈工作臺晾干后燙傷，再次噴無菌水晾干，將已配制好的不同濃度藥劑涂抹于傷口，待晾干后接種培養(yǎng)5d的蘋果樹腐爛病菌菌餅，以先涂抹無菌水后接種病原菌為對照。試驗(yàn)每個處理和對照接種3個枝條，每個枝條2個接種點(diǎn)，每處理共計(jì)6個接種點(diǎn)（即為6次重復(fù)）。保濕培養(yǎng)7～10d后采用“十字交錯法”測量病疤長度和短徑，并計(jì)算病疤面積。

病疤面積（cm2）=1/4×π×長徑×短徑。

1.3數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel2022軟件計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤，并采用SPSS19.0軟件和Duncan氏新復(fù)極差法舉行方差分析（P<0.05）。

2結(jié)果與分析

2.1不同植物源藥劑對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制作用

通過含藥培養(yǎng)基法測定植物源農(nóng)藥對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的影響，試驗(yàn)結(jié)果說明，5種植物源農(nóng)藥對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長均具有確定的抑制作用。通過菌絲生長抑制率計(jì)算5種藥劑EC50，得出0.3%丁子香酚SLEC50最低，僅為0.43μg/mL;而0.5%小檗堿ASEC50最高，為13.68μg/mL。因此，0.3%丁子香酚SL對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長抑制作用最為顯著（表3）。

2.2不同植物源藥劑對蘋果樹腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用

不同植物源藥劑對蘋果樹腐爛病菌分生孢子萌發(fā)均有確定的抑制效果，通過不同藥劑EC50得出：丁子香酚對蘋果樹腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.70μg/mL;苦參堿和香芹酚次之，EC50分別為8.04μg/mL、8.56μg/mL;乙蒜素的抑制作用較差，EC50為20.39μg/mL;小檗堿對蘋果樹腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用最差，EC50為28.23μg/mL（表4）。

2.3不同植物源藥劑對接種病原菌的離體枝條養(yǎng)護(hù)作用

結(jié)果說明，供試的5種植物源藥劑對接種蘋果樹腐爛病菌的離體枝條均有不同的養(yǎng)護(hù)效果。20%乙蒜素EC對接種病原菌的離體枝條的養(yǎng)護(hù)作用顯著高于其他藥劑，病疤面積最小，為160.21mm2，與對照相比差異顯著;5%香芹酚AS、0.3%丁子香酚SL和1.3%苦參堿AS次之，病疤面積分別為236.03、266.42和484.95mm2;0.5%小檗堿AS在接菌后對離體枝條的養(yǎng)護(hù)作用最弱，病疤面積最大，為597.09mm2，而對照的病疤面積為1309.64mm2（圖1和表5）。

3結(jié)論與議論

3.1植物源農(nóng)藥對蘋果樹腐爛病菌菌落及孢子萌發(fā)的影響

本試驗(yàn)供試的5種植物源農(nóng)藥對蘋果樹腐爛病菌的菌落生長和孢子萌發(fā)均有確定的抑制作用。隨著不同藥劑濃度的增加，其抑制效果顯著鞏固，其中0.3%丁子香酚SL對蘋果樹腐爛病菌菌落生長和孢子萌發(fā)的抑制率最高，其EC50分別為0.43μg/mL和0.70μg/mL;其次為1.3%苦參堿AS，抑制菌落生長和孢子萌發(fā)的EC50分別為8.11μg/mL和8.04μg/mL。楊勇等[12]的研究察覺20%丁子香酚AS對葡萄灰霉病有較好的抑菌效果，濃度為50μg/mL時抑制率達(dá)成93.47%，且與另一植物源農(nóng)藥5%苦參堿混配后，對葡萄灰霉病菌的抑菌活性顯著鞏固。同時，安永學(xué)等[13]的研究說明5%的香芹酚AS500倍液對辣椒白粉病的防效可達(dá)89.93%，且可使辣椒增產(chǎn)18.08%;郭成瑾等[14]的研究說明在大田試驗(yàn)中使用0.3%丁子香酚SL防治馬鈴薯晚疫病，在發(fā)病初期噴施2～3次，防病效果可達(dá)72.17%。本試驗(yàn)說明，丁子香酚對蘋果樹腐爛病具有較好的防治效果。

3.2植物源農(nóng)藥對蘋果離體枝條的養(yǎng)護(hù)作用

離體枝條試驗(yàn)結(jié)果說明20%乙蒜素EC對蘋果離體枝條的養(yǎng)護(hù)作用最強(qiáng)，接種蘋果樹腐爛病菌7d后，病疤面積最小，為160.21mm2。據(jù)報道，葉面噴施乙蒜素不僅能夠促進(jìn)作物生長，還對作物的枯萎病和蔓枯病具有較好的防效[15]。楊淑貞等[16]的研究說明，80%乙蒜素EC可用于防治山核桃干腐病，乙蒜素可以抑制山核桃干腐病病原菌菌絲生長，同時對山核桃木質(zhì)部具有良好的養(yǎng)護(hù)作用，本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果根本一致。

利用植物源制劑防治植物病害是目前植物病害生物防治的一個新領(lǐng)域，是實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥無毒、無殘