公共衛(wèi)生微生物采樣、檢測(cè)方法總結(jié)

、空氣中微生物的檢測(cè)方法細(xì)菌總數(shù)（營(yíng)養(yǎng)瓊脂，121c高壓滅菌20min,培養(yǎng)時(shí)間37C,48h）1.兩種方法（1）撞擊法（二級(jí)或者六級(jí)彳生物采樣器）（2）自然沉降法（暴露5min）采樣：梅花布點(diǎn)，高度：1.2?1.5m；離墻：1m。二、茶具微生物檢驗(yàn)方法（一）細(xì)菌總數(shù)1、生理鹽水的制法：將氯化鈉（8.5g）溶解于蒸儲(chǔ)水（1000mL）中，分裝到試管內(nèi)，每管10mL,121c高壓滅菌20min。2、采樣：棉拭子濕潤(rùn)生理鹽水，在茶具內(nèi)、外緣涂抹50cm2,即口唇接觸處一圈（1?1.5cm）,用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸處，將棉拭子放入10mL生理鹽水中，4h內(nèi)送檢。3、檢驗(yàn)程序：檢樣-各1mL加入兩塊滅菌平皿（若污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋?zhuān)?37C,48h培養(yǎng)-菌落計(jì)數(shù)-報(bào)告4、單位：cfu/cm2o（二）大腸菌群1、培養(yǎng)基：乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液（雙料的，每管10mL,115c高壓滅菌15min）2、檢測(cè)方法：發(fā)酵法（具體內(nèi)容課本11頁(yè)）3、檢樣（測(cè)定細(xì)菌總數(shù)余下的樣品）4、革蘭氏染色過(guò)程：（陽(yáng)性菌顯紫色，陰性菌顯紅色）（1）初染：1min,水洗；（2）碘染：1min,水洗；（3）脫色：30s,水洗；（4）復(fù)染：1min,水洗，待干，鏡檢。5、結(jié)果報(bào)告：凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽抱桿菌，即可報(bào)告檢出大腸菌群。三、毛巾、床上臥具微生物檢測(cè)方法（一）細(xì)菌總數(shù)1.采樣（1）毛巾、枕巾：對(duì)折后兩面的中央各25cm2;（2）床單、被單：在上下兩部中央25cm2來(lái)回涂抹；2、檢測(cè)程序同茶具細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)一?、，，、_23.計(jì)算單包：cfu/25cm。（二）大腸菌群（檢測(cè)程序同茶具大腸菌群檢測(cè)）1.涂抹法：（用測(cè)定細(xì)菌總數(shù)時(shí)采集的樣品）四、理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法（一）大腸菌群1、采樣推子：在推子前部上下部分均勻各涂抹三次；理發(fā)刀、剪和修腳工具：在使用的刀、剪面的兩側(cè)各涂抹一次采樣；兩個(gè)刀或者兩個(gè)剪為一份樣品。2、檢樣5mL倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，37C,24h培養(yǎng)；3、分離培養(yǎng)：接種伊紅美藍(lán)平板，做革蘭氏染色鏡檢；4、證實(shí)試驗(yàn)：接種乳糖發(fā)酵管37C,24h培養(yǎng)，觀(guān)察產(chǎn)氣情況。5、結(jié)果報(bào)告：乳糖管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽抱桿菌，可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。（二）金黃色葡萄球菌1、培養(yǎng)基：7.5%的氯化鈉肉湯或胰酪陳大豆肉湯培養(yǎng)基2、步驟：（1）做大腸菌群剩余的5mL倒入培養(yǎng)基中，37C,24h培養(yǎng)；（2）接種血平板，37C,24h培養(yǎng)；觀(guān)察形狀：圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周?chē)腥苎?；?）挑菌落做鏡檢：革蘭氏陽(yáng)性（紅色），葡萄狀排列；（4）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，37C,24h培養(yǎng)，觀(guān)察是否產(chǎn)酸；（5）血漿凝固酶試驗(yàn)玻片法：在干凈的玻片兩邊，一端滴一滴生理鹽水，一端滴一滴血漿，接種環(huán)挑菌落分別與它們混合。5min后均無(wú)凝固現(xiàn)象的為陰性；若血漿中出現(xiàn)顆粒狀凝塊而生理鹽水中沒(méi)有，則為陽(yáng)性。五、拖鞋微生物檢驗(yàn)方法霉菌與酵母菌（生理鹽水中要加入玻璃珠）1.培養(yǎng)基:霉菌培養(yǎng)基、（虎紅）孟加拉紅培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）2.取樣：有棉拭子在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處的5cmx5cm面積上均勻涂抹3次，一雙拖鞋為一份樣品；.將盛有棉拭子的試管在手心用力振蕩100次，使霉菌抱子分開(kāi)；.培養(yǎng)：在霉菌培養(yǎng)箱中25~28C,培養(yǎng)觀(guān)察一■周。2.單包是cfu/50cmo六、浴盆、臉（腳）盆微生物檢測(cè)（一）細(xì)菌總數(shù)無(wú)菌生理鹽水：分裝125mL/瓶供浴盆采樣；50mL供臉（腳）盆采樣。采樣部位：在盆內(nèi)側(cè)二分之一到三分之一高度；布點(diǎn)：浴盆梅花布點(diǎn)；臉（腳）盆相對(duì)兩側(cè)壁布點(diǎn)；方法：涂抹法（與茶具方法一致）單位：cfu/25cm2。（二）大腸菌群（同茶具）七、游泳池水微生物檢測(cè)（一）、細(xì)菌總數(shù).采樣瓶：無(wú)酸、無(wú)堿、無(wú)毒的玻璃容器。.滅菌前要加入足量的10%的硫代硫酸鈉溶液，一般125mL水樣加0.1mL。3.采樣游泳池水回積，m2兒童池成人池天然游泳池；三1000>1000三2500>2500采樣點(diǎn)數(shù)1-2235>5注：在水而下30cm處取水樣450mL4.操作步驟（與茶具細(xì)菌總數(shù)一樣）（二）大腸菌群.培養(yǎng)基：三倍濃縮乳糖蛋白陳培養(yǎng)液（蒸儲(chǔ)水量不變，其他成分三倍）.步驟（1）推測(cè)性試驗(yàn)2個(gè)裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白陳培養(yǎng)液的大試管內(nèi)（裝有小試管）各加入100mL的水樣；在10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白陳培養(yǎng)液的試管里（裝有小試管）加入10mL水樣。搖勻，培養(yǎng)。（2）平板分離接種伊紅美藍(lán)，培養(yǎng)、觀(guān)察；典型菌落形態(tài)：黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤。（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，培養(yǎng)，觀(guān)察。（4）查表：1000mL水樣中大腸菌群的MPN值。八、生活飲用水微生物檢驗(yàn)方法（一）采樣.采樣容器應(yīng)采用潔凈、無(wú)色、無(wú)毒的聚乙烯塑料和硬質(zhì)玻璃（又稱(chēng)硼硅玻璃）。樣品瓶必須專(zhuān)瓶專(zhuān)用，切不可用實(shí)驗(yàn)室盛裝過(guò)濃溶液的瓶作采樣瓶。通常我們使用500ml的高壓滅菌的細(xì)口瓶采樣。.容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度。.檢驗(yàn)中所用的一切用品必須是完全滅菌的。在滅菌前應(yīng)徹底洗滌干凈，121c高壓蒸汽滅菌20min,或160c干烤2h。.冷藏，4h內(nèi)檢測(cè)。如有游離余氯應(yīng)在采樣瓶消毒前每125ml加0.1ml硫代硫酸鈉溶液。（二）細(xì)菌總數(shù)（操作步驟同茶具，記得做空白對(duì)照）（三）總大腸菌群.乳糖發(fā)酵試驗(yàn)10mL水樣加入10mL雙料乳糖發(fā)酵管中；1mL水樣加入10mL單料乳糖發(fā)酵管中；0.1mL水樣加到10mL單料乳糖發(fā)酵管中；每一稀釋度接種5管。37c培養(yǎng)24小時(shí)，觀(guān)察產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象.分離培養(yǎng)（接種伊紅美藍(lán)，培養(yǎng)）.證實(shí)實(shí)驗(yàn)（革蘭氏染色，鏡檢，接種乳糖發(fā)酵管）.結(jié)果報(bào)考：查表。（四）耐熱大腸菌群.培養(yǎng)基：EC培養(yǎng)基.操作步驟：同大腸菌群多管發(fā)酵法。.培養(yǎng)溫度：44.5C培養(yǎng)24ho（五）大腸埃希氏菌.培養(yǎng)基：EC-MUG培養(yǎng)基（培養(yǎng)基加熱溶解后要先在366nm紫光下檢查有無(wú)熒光）.培養(yǎng)溫度：44.5C培養(yǎng)24ho.觀(guān)察：在暗處用366nm的紫外燈照射，是否有藍(lán)色熒光產(chǎn)生；.計(jì)算陽(yáng)性管數(shù)，查表得出最可能數(shù)，結(jié)果以MPN/100mL報(bào)告。九、公共場(chǎng)所集中空調(diào)系統(tǒng)（一）冷凝水、冷卻水中嗜肺軍團(tuán)菌（1）采樣.采樣容器：可選擇玻璃瓶或聚乙烯瓶，廣口瓶，用前滅菌。.采樣量：每個(gè)采樣點(diǎn)依無(wú)菌操作取水樣（或沉積物、軟泥等樣品）約500mlo.中和：經(jīng)氯或臭氧等消毒的樣品，采樣容器滅菌前加硫代硫酸鈉溶液中和。.樣品運(yùn)輸與貯存：樣品最好2天內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，不必冷凍，但要避光和防止受熱，室溫下貯存不得超過(guò)15天。（2）熱處理：取1ml洗脫樣品置50c水浴加熱30min。酸處理：取5ml洗脫樣品，調(diào)pH至2.2,輕輕搖勻，放置5min。（3）接種平板靜置于濃度為2.5%的CO2培養(yǎng)箱中，35?37C,觀(guān)察到有培養(yǎng)物生成時(shí)，反轉(zhuǎn)平板，孵育10d,注意保濕。（4）觀(guān)察軍團(tuán)菌生長(zhǎng)緩慢，易被其它菌掩蓋，需每天在體式鏡上觀(guān)察。軍團(tuán)菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍(lán)色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，部分有熒光。（二）送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)以無(wú)菌操作，使用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器，以空氣流量為28.3L/min,在采樣點(diǎn)采集5?15min。將采集細(xì)菌后的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿置35?37c培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。（三）送風(fēng)中真菌總數(shù)采樣方法同上將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿置28c培養(yǎng)5?7d,逐日觀(guān)察并于第7d記錄結(jié)果。若真菌數(shù)量過(guò)多可于第5d計(jì)數(shù)結(jié)果，并記錄培養(yǎng)時(shí)間，換算成cfu/