最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件

藥材粗粉提取混合物分離有效成分藥材粗粉提取混合物分離有效成分提取分離方法●提取●分離溶劑提取法水蒸汽蒸餾法兩相溶劑萃取法沉淀法透析法分餾法鹽析法結晶法與重結晶法超臨界流體萃取法色譜法提取分離方法●提取溶劑提取法水蒸汽蒸餾法兩相溶劑萃取一、溶劑提取法第一節(jié)天然藥物化學成分的提取1、溶劑的極性極性：指一根共價鍵或一個共價分子中電荷分布的不均勻性。如果電荷分布得不均勻，則稱該鍵或分子為極性；如果均勻，則稱為非極性。與介電常數(shù)成正相關。一、溶劑提取法第一節(jié)天然藥物化學成分的提取1、溶劑的極性極H2O(水)78.5HCOOH(甲酸)58.5HCON(CH3)2(N,N-二甲基甲酰胺)36.7CH3OH(甲醇)32.7C2H5OH(乙醇)24.5CH3COCH3(丙酮)20.7n-C6H13OH（正己醇）13.3CH3COOH(乙酸)6.15

C6H6(苯)2.28CCl4(四氯化碳)2.24n-C6H14（正己烷）1.88介電常數(shù)介電常數(shù)由弱到強的順序如下：石油醚(低沸點高沸點)<二硫化碳<四氯化碳<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<醋酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水選擇溶劑的要點：能有效的提取成分；相似相溶，沸點適中易回收；低毒安全。由弱到強的順序如下：石油醚(低沸點高沸點)<二硫化2、溶劑的類型水親水性有機溶劑（極性溶劑）親脂性有機溶劑（非極性溶劑）2、溶劑的類型水親水性有機溶劑（極性溶劑）親脂性有機溶劑（（1）水優(yōu)點：溶解范圍廣、穿透能力強、易得、安全

缺點：a.有些苷類成分的酶解b.有些脂溶性成分溶解不完全c.水提液易發(fā)霉、變質(zhì)d.水溶性雜質(zhì)多，過濾困難e.沸點高，濃縮困難（1）水(2)親水性有機溶劑優(yōu)點：溶解范圍廣、水溶性雜質(zhì)溶出少、提取液不易發(fā)霉、變質(zhì)、大部分可回收利用。缺點：但有揮發(fā)性、易燃燒。(2)親水性有機溶劑（3）親脂性有機溶劑優(yōu)點：對化合物溶解選擇性較強、水溶性雜質(zhì)少、易純化。缺點：揮發(fā)性大、易燃燒，有毒、價格昂貴，對提取設備要求高穿透力較弱，提取時間長。（3）親脂性有機溶劑3、被提取成分的性質(zhì)極性（親水性）非極性（親脂性）中等極性（既有親水性又有親脂性）常見取代基的極性大小順序：酸＞酚＞醇＞胺＞醛＞酮＞酯＞醚＞烯＞烷3、被提取成分的性質(zhì)4、溶劑選擇的原則（1）“相似相溶”，對有效成分溶解度大，對雜志溶解度小。（2）溶劑與所溶成分不發(fā)生化學反應，即使發(fā)生也是可逆的。（3）廉價、易得、使用安全、易于回收和濃縮。4、溶劑選擇的原則（三）提取技術1、浸漬法適用于：有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、粘液質(zhì)、樹膠等多糖物質(zhì)較多的中藥。（三）提取技術適用于：有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、粘液2、煎煮法適用于：能溶于水且遇熱穩(wěn)定成分的提取。2、煎煮法適用于：能溶于水且遇熱穩(wěn)定成分的提取。3、滲漉法適用于：遇熱易被破壞的成分。3、滲漉法適用于：遇熱易被破壞的成分。4、回流提取法適用于：對熱穩(wěn)定的成分提取。4、回流提取法適用于：對熱穩(wěn)定的成分提取。5、連續(xù)回流提取法索氏提取器5、連續(xù)回流提取法索氏提取器溶劑提取法分類提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水有機溶劑不加熱，在常溫下浸泡提取效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機溶劑不加熱滲漉筒—脂溶性成分消耗溶劑量大，費時長煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機溶劑在回流裝置中水浴加熱提取—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機溶劑以索氏提取器水浴加熱回流提取節(jié)省溶劑效率最高親脂性較強成分時間長溶劑提取法分類提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水不（四）影響提取效率的主要因素溶劑的選擇（關鍵）提取技術濃度差藥物的粉碎度溫度、時間（四）影響提取效率的主要因素（五）提取液的濃縮1、蒸餾指將提取液加熱濃縮，特點是不僅對回收的溶劑可再利用，降低成本，減少有機溶劑對環(huán)境的污染和對操作人員的危害。（五）提取液的濃縮2、蒸發(fā)通過加熱使提取液中的溶劑氣化并除去，從而提高提取液濃度。2、蒸發(fā)通過加熱使提取液中的溶劑氣化并除去，從而提高原理：被提取成分和水一起加熱時，其蒸汽壓與水蒸氣壓總和為一個大氣壓，液體沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性成分一并帶出。范圍：難溶于水或不溶于水的揮發(fā)性成分，加熱不被破壞。如：揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分子的醌類成分。二、水蒸氣蒸餾法：

共水蒸餾法（即直接加熱法）通水蒸氣蒸餾法原理：被提取成分和水一起加熱時，其蒸汽壓與水蒸氣壓總和為一個適用于：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、與水不發(fā)生反應且不溶或難溶于水的成分的提取。適用于：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、與水不發(fā)生反應三、超臨界流體萃取物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上狀態(tài)時，成為單一相態(tài)，稱超臨界狀態(tài)。兼具有氣液兩相性質(zhì)（常用萃取劑CO2）：①液體相近的密度，強穿透力；②氣體相近的擴散力，提取速率高。三、超臨界流體萃取物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上狀態(tài)時，成為最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件第二節(jié)天然藥物化學成分的分離一、兩相溶劑萃取法（一）基本原理液液萃取是以分配定律為基礎分配定律：一定T、P下，溶質(zhì)在兩個互不相溶的溶劑中分配，平衡時，溶質(zhì)在兩相中濃度之比為常數(shù)。K-分配系數(shù)第二節(jié)天然藥物化學成分的分離一、兩相溶劑萃取法液液萃取是以雜質(zhì)溶質(zhì)原溶劑萃取劑雜質(zhì)溶質(zhì)原溶劑萃取劑實驗室液液萃取過程實驗室液液萃取過程（二）萃取劑的選擇原則1、互不相溶2、分配系數(shù)相差越大越好3、水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃取；有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，需用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。（二）萃取劑的選擇原則溶劑萃取步驟溶劑體積為樣品溶液的30％-35％。振蕩幾次打開活塞Gas蒸氣逸出（也叫放氣）溶劑萃取步驟溶劑體積為樣品振蕩幾次打開活塞Gas蒸氣逸出（也絮狀物（乳化）有機相水相水相和絮狀物靜置分層激烈振搖1-2min絮狀物有機相水相水相和絮狀物靜置分層激烈振搖有機相3～5次少量多次原則有機相3～5次少量多次原則二、沉淀法（一）酸堿沉淀法

利用天然藥物中游離酸性（或堿性）成分可與堿性（或酸性）試劑反應生成鹽而溶于水，再加酸（或堿性）試劑，重新生成原來的游離酸性（或堿性）成分而從溶液中沉淀析出的性質(zhì)，濾過（或加有機溶劑萃?。┒c其他成分或雜質(zhì)分離的一種方法。（二）乙醇沉淀法

在濃縮后的水提液中，加入一定量的乙醇（使含醇量達80%以上），則難溶于高濃度乙醇的成分如蛋白質(zhì)、淀粉、樹膠等從溶液中析出，經(jīng)過濾即可除去。二、沉淀法三、結晶法與重結晶法（一）基本概念三、結晶法與重結晶法（一）基本概念結晶：由非晶形經(jīng)過結晶操作形成有晶形的過程。原理：根據(jù)混合物中各成分在某種溶劑中溶解度的差異。先加熱溶液，蒸發(fā)溶劑成飽和溶液，此時降低熱飽和溶液的溫度，溶解度隨溫度變化較大的溶質(zhì)就會呈晶體析出。關鍵---溶劑:被溶解成分的溶解度隨溫度不同有顯著差別；與成分不產(chǎn)生化學反應；沸點適中；常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯結晶：由非晶形經(jīng)過結晶操作形成有晶形的過程。（二）操作過程1、選擇適宜的溶劑

根據(jù)欲結晶成分的性質(zhì)及在溶劑中溶解度大小來選擇。2、制備飽和的結晶溶液（1）過飽和溶液的形成（2）晶核生成（3）晶體的生長(1)冷卻(2)溶劑蒸發(fā)（二）操作過程(1)冷卻(2)溶劑蒸發(fā)3、趁熱過濾3、趁熱過濾最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件（三）結晶溶劑的選擇（1）與被提純的有機化合物不起化學反應。（2）對被提純的有機物應具有熱溶，冷不溶（3）雜質(zhì)化合物的溶解性對溫度變化不敏感（4）對要提純的有機物能在溶劑中形成較整齊的晶體。（5）溶劑的沸點，不宜太低（易損），也不宜太高（難除）。（6）價廉易得無毒。（三）結晶溶劑的選擇最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件四、鹽析法

鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。鹽析用的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸銨鹽析制備。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時，亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機溶劑萃取。四、鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽五、透析法

透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達到分離的方法。例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時，可用透析法以除去無機鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進入膜外溶液中，而加以分離精制。透析是否成功與透析膜的規(guī)格關系極大。

五、透析法最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件六、升華法

固體物質(zhì)受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，故可利用升華法直接自中草藥中提取出來。例如樟木中升華的樟腦（camphor），在《本草綱目》中已有詳細的記載，為世界上最早應用升華法制取藥材有效成分的記述。又如茶葉中的咖啡因具有升華性，可將茶葉放在大小適宜的燒杯中，上面用圓底燒瓶盛水冷卻，然后加熱，到一定溫度（178℃），咖啡因可凝結于燒瓶底部，成白色針狀結晶。六、升華法最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件七、分餾法

對沸點相近的混合物，在分餾柱內(nèi)反復進行氣化、冷凝、回流等程序而分離的一種方法。七、分餾法第三節(jié)色譜分離法第三節(jié)色譜分離法

1906年，俄國植物學家Tswett

目的：分離植物色素

過程：將植物綠葉的石油醚提取液倒入玻璃管中，并用石油醚不斷淋洗，逐漸形成色帶，各色素成分被分離

命名：分離方法為“色譜法”

稱：玻璃管“色譜柱”

稱：碳酸鈣“固定相”

稱：石油醚“流動相”

石油醚石油醚植物色素分離圖示植物色素分離圖示色譜分離法又稱層析分離法：即是利用混合物中各組分的物理化學性質(zhì)（分子的形狀和大小，分子的極性，吸附力，分子的親和力，分子的分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相是固定的，稱固定相；另一相是流動的，稱流動相。當流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，而達到分離。色譜分離法又稱層析分離法：即是利用混合物中各組分的物理化分類按流動相分氣相色譜液相色譜超臨界流體色譜按機理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜凝膠色譜分類按流動相分氣相色譜按機理分吸附色譜分類吸附色譜——利用固定相中吸附劑表面對各組分不同的物理吸附能力(氣—固色譜）分配色譜——不同組分在兩相中有不同的分配系數(shù)(氣—液色譜)離子交換色譜——利用離子交換原理(離子色譜)凝膠色譜——利用多空性物質(zhì)對不同大小分子的排阻作用(液相色譜)分類一、吸附色譜法當溶液中某組分的分子在運動中碰到一個固體表面時，分子會貼在固定表面上，這就發(fā)生了吸附作用。一、吸附色譜法當溶液中某組分的分子在運動中碰到一個固體表面時1.分離原理各組分與流動相分子爭奪吸附劑表面活性中心,利用吸附劑對不同組分的吸附能力差異而實現(xiàn)分離.經(jīng)過吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分離.

1.分離原理各組分與流動相分子爭奪吸附劑2.固定相及其選擇固定相是表面具有許多吸附中心的吸附劑，常用吸附劑硅膠表面的硅醇基為吸附中心。經(jīng)典液相柱色譜和薄層色譜使用一般硅膠。（1）對吸附劑的要求

①有大的表面積和足夠的吸附能力；②對不同的化學成分有不同的吸附力，能較好地把混合物分開；③與流動相、溶劑及樣品中各成分不起化學反應；④在所用的溶劑及流動相中不溶解；⑤顆粒均勻，操作過程中不會碎裂。2.固定相及其選擇固定相是表面具有許多吸（2）吸附劑的類別①有機類淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纖維素等②無機類氧化鋁、硅膠、活性炭、碳酸鈣、硅藻土等（3）吸附劑的活度因含水使吸附劑活度，含水量，活性(活度)級別，活性（2）吸附劑的類別①有機類淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纖維素等（4）吸附劑的選擇a硅膠：為首選吸附劑。本身具微酸性，適用于分離酸性及中性物質(zhì)，如有機酸、氨基酸、甾體等。b氧化鋁：氧化鋁具有分離能力強、活性可以控制等優(yōu)點。

堿性氧化鋁pH9～10適于分析堿性、中性物質(zhì)中性氧化鋁pH7.5適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)酸性氧化鋁pH4～5適于分析酸性、中性物質(zhì)C聚酰胺:氫鍵作用,氫鍵能力↑強，組分越后出柱

分離極性小的物質(zhì)，一般選用活性大些的吸附劑；反之，分離極性大的物質(zhì)，選用活性小的吸附劑。（4）吸附劑的選擇a硅膠：為首選吸附劑。本身具微酸性，適3.流動相及其選擇（1）要求

①應使用較純試劑，含雜質(zhì)會影響洗脫能力②與樣品或吸附劑不發(fā)生化學反應③能溶解樣品中各成分，且各被分離組分有不同的K值④粘度小，易流動（2）流動相流動相的洗脫能力主要由其極性決定，極性強的流動相分子占據(jù)極性中心的能力強，洗脫能力就強。流動相的選擇要依據(jù)樣品的極性、吸附劑的活性而定。3.流動相及其選擇（1）要求（2）流動相（3）常用溶劑的極性石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水（4）流動相的選擇用硅膠或氧化鋁作色譜分離時，如被測成分極性較大，用活性較低的吸附劑，極性較大的沖洗劑；被測成分極性較小，選用活性較強的吸附劑，極性較小的沖洗劑（3）常用溶劑的極性石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<4.洗脫順序吸附弱的組分先被洗脫，吸附強的組分后被洗脫。吸附的強弱與組分的性質(zhì)(極性、取代基的類型和數(shù)目、構型）有關。一般規(guī)律是：①非極性化合物，吸附弱。②基本母核相同，分子中取代基的極性越強，或極性基團越多，分子極性越強(但要考慮其他因素的影響)，吸附能力越強。③分子中雙鍵數(shù)越多，則吸附力越強。④能形成分子內(nèi)氫鍵的化合物，其吸附能力降低。

4.洗脫順序吸附弱的組分先被洗脫，吸附強的組分后常見化合物的吸附能力的順序如下：烷烴(-CH3、-CH2-)<烯烴(-CH=CH-)<醚類(-OCH3)<硝基化合物(-NO2)<二甲胺(-N(CH3)2)<酯類(-COOR)<酮類(>C=O)<醛類(-CHO)<硫醇(-SH)<胺類(-NH2)<酰胺(-NHCOCH3)<醇類(-OH)<酚類(Ar-OH)<羧酸類(-COOH)常見化合物的吸附能力的順序如下：烷烴(-CH3、-CH2薄層色譜法

薄層色譜是在平面上進行分離的一種方法，又叫平面色譜法。通常將固定相(吸附劑)均勻地涂鋪在表面潔凈的玻璃、塑料或金屬板形成薄層，制成薄板，進行樣品分離。薄層色譜法

薄層色譜是在平面上進行分離的一種方法，又叫平(一)吸附色譜分離原理利用吸附劑對不同成分吸附力的大小及展開劑解吸附作用的差異進行分離。吸附牢的組分隨展開劑移動慢，吸附弱的組分隨展開劑移動快，一段時后，組分被分離。固定相:固體吸附劑流動相:液體展開劑一、基本原理(一)吸附色譜分離原理一、基本原理溶劑

前沿起始線ABabc（1）比移值Rf：Rf是薄層色譜法基本定性參數(shù)，一定條件時Rf為定值，在0～1之間，可用范圍Rf值在0.2～0.8之間。組分極性越大，Rf越小,反之越大。（二）比移值與相對比移值溶劑

前沿起始線ABabc（1）比移值Rf：Rf是薄層色譜法硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質(zhì)極性越大，越易被吸附。一般規(guī)律：（1）官能團極性越大，整個分子極性越大，越易被吸附；（2）形成分子內(nèi)H鍵時，被吸附力減弱；（3）同系物中，分子量越大，極性越小，被吸附力越弱。被分離物質(zhì)極性與吸附能力的關系硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質(zhì)極性越大，越易被吸附。被分離物質(zhì)硅膠薄層色譜規(guī)律總結被分離組分展開劑Rf被分離物洗脫順序極性大極性大小后洗脫極性小極性小大先洗脫硅膠薄層色譜規(guī)律總結被分離組分展開劑Rf被分離物洗脫順序極性（1）軟板的制備軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑要求：厚度→隨分離要求而定，一般0.25～0.5mm玻璃棒推動速度不宜過快、也不應停頓→影響厚度均一性操作步驟（1）軟板的制備軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合2、點樣（1）樣品溶液的制備：

2、點樣（1）樣品溶液的制備：2、點樣（2）點樣量：

與薄層板的關系太多太少的影響點樣基線：距底邊2.0cm樣點直徑：2-4mm點間距離：1.5-2.0cm2、點樣（2）點樣量：點樣基線：距底邊2.0cm2、點樣（3）點樣方法：

劃線、樣品記號點、點樣

注：動作要輕，毛細管或點樣器不能混用，斑點大小適當，可多次點樣。平頭50ul微量點樣器全自動點樣儀2、點樣（3）點樣方法：平頭50ul微量點樣器全自動點樣儀3、展開展開缸（色譜缸）3、展開展開缸（色譜缸）3、展開（1）展開方式：a、近水平展開特點：速度快、適用于軟板的展開。3、展開（1）展開方式：a、近水平展開特點：速度快、適用于軟3、展開（1）展開方式：b、上行展開過程：預飽和（濾紙貼于展開槽內(nèi)側）、展開、標記溶劑前沿3、展開（1）展開方式：b、上行展開過程：預飽和（濾4、顯色和定位一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑加顯色劑：多噴霧，軟板使用浸漬顯色法紫外燈觀察噴顯色劑觀察4、顯色和定位一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑紫判斷依據(jù)：Rf值四、結果計算和判斷判斷依據(jù)：Rf值四、結果計算和判斷二、分配色譜法1.分離原理：將液體均勻地涂漬在惰性物質(zhì)(載體)表面上作為固定相，利用被分離組分在固定相與流動相中的溶解度差別所造成的分配系數(shù)差別而被分離。二、分配色譜法1.分離原理：將液體均勻地涂漬在惰性物質(zhì)(2.固定相和流動相要求：固定相→機械吸附在惰性載體上的液體,常用的固定液有水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等強極性溶劑

載體→惰性物質(zhì)，無吸附性性質(zhì)穩(wěn)定，不與固定相和流動相發(fā)生化學反應常用的有吸水硅膠、纖維素、多孔硅藻土等。流動相→必須與固定相不為互溶石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵代烷及苯等。2.固定相和流動相要求：流動相→必須與固定相不為互溶石油醚、3.洗脫順序正相色譜

固定相極性大于流動相極性,主要分離極性樣品.極性弱的組分先被洗脫，極性強的組分后被洗脫。反相色譜

固定相極性小于流動相極性,主要分離非極性樣品和中等極性樣品.極性強的組分先出柱，極性弱的組分后出柱。3.洗脫順序正相色譜固定相極性大于流動相極性,主要分

定義：

紙色譜分離法又稱紙層析法，是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相中的分配比不同而進行分離的一種微量分離方法。紙色譜法載體——層析紙（濾紙）；固定相——濾紙上的吸濕水分；流動相——有機溶劑（展開劑）。定義：紙色譜法載體——層析紙（濾紙）；實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值79實驗原理分離示意圖AB上行法實驗原理分離示意圖AB上行法80實驗原理原點展開后斑點溶劑前沿a1a2bAB實驗原理原點展開后斑點溶劑前沿a1a2bAB81實驗原理RF:

通常用比移值RF衡量各組分的分離程度：RF:0～1。RF值相差越大，分離效果越好。實驗原理RF:RF:0～1。82RF：物質(zhì)定性分析的依據(jù)。在進行分析工作時，可使用各組分相應的標準樣品同時作對照實驗。影響因素：主要是展開劑、濾紙質(zhì)量、溫度等實驗條件。實驗原理RF：物質(zhì)定性分析的依據(jù)。實驗原理83本實驗分離和鑒定的氨基酸混合液：異亮氨酸、賴氨酸和谷氨酸。氨基酸是無色的，在層析后需在紙上噴灑顯色劑茚三酮，斑點呈現(xiàn)藍紫色。本實驗分離和鑒定的氨基酸混合液：異亮氨酸、賴氨酸和谷氨酸。84主要儀器：（1）玻璃層析筒150mm×300mm(φ×h)。（2）層析紙條100mm×240mm。（3）毛細管直徑1mm左右。（4）噴霧器儀器試劑主要儀器：儀器試劑85主要試劑：（1）展開劑正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。（2）氨基酸標準溶液2g·L-1水溶液。（3）茚三酮1g·L-1乙醇溶液。（4）氨基酸混合試液將（2）配制的三種氨基酸等量混合。儀器試劑主要試劑：儀器試劑86實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值87實驗步驟

——點樣2.0cm2.0cm1234異亮氨酸賴氨酸谷氨酸混合液各點φ≈2mm實驗步驟

——點樣2.0cm2.0cm1288實驗步驟

——展開分離展開劑濾紙下端浸入展開劑約0.5cm，計時。一段時間后，前沿上升15cm左右記下展開停止時間實驗步驟

——展開分離展開劑濾紙下端浸入展開劑約0.5cm，89實驗步驟

——展開分離取出層析紙，畫出溶劑前沿晾干或烘干展開劑實驗步驟

——展開分離取出層析紙，畫出溶劑前沿晾干或烘干展開90實驗步驟

——顯色在層析紙上均勻噴灑顯色劑l00℃烘箱中，烘3～5min實驗步驟

——顯色在層析紙上均勻噴灑顯色劑l00℃烘箱中，91實驗步驟

——計算RF用鉛筆描出各斑點的輪廓ba1a2a3實驗步驟

——計算RF用鉛筆描出各斑點的輪廓ba1a2a392

（1）計算RF。（2）定性分析。數(shù)據(jù)處理（1）計算RF。數(shù)據(jù)處理93三、聚酰胺吸附色譜法聚酰胺：固定相流動相三、聚酰胺吸附色譜法聚酰胺：94（3）吸附規(guī)律：

[1]形成氫鍵基團數(shù)目越多，則吸附能力越強[2]形成氫鍵基團位置不同，被吸附的強度也不同[3]分子芳香核、共軛雙鍵越多，吸附越牢[4]化合物形成分子內(nèi)氫鍵，則被吸附的強度減小[5]與溶劑介質(zhì)有關.形成氫鍵能力:

水中最強,堿中最弱（3）吸附規(guī)律：

[1]形成氫鍵基團數(shù)目越多，則吸附能力四、離子交換色譜法要求：固定相→離子交換樹脂流動相→水為溶劑的緩沖溶液被分離組分→離子型的有機物或無機物1.分離原理陽離子交換樹脂

RSO3-H++X+→RSO3-X++H+

固定離子可交換離子待測離子依據(jù)被測組分與離子交換劑交換能力（親和力）不同而實現(xiàn)分離四、離子交換色譜法要求：陽離子交換樹脂固定離子可交換離子離子交換的基本過程：離子交換的基本過程：2.固定相和流動相

固定相是離子交換劑——常見的是離子交換樹脂，是具有網(wǎng)狀立體結構高分子的聚合物。如，苯乙烯和二乙烯苯聚合，其中二乙烯苯是交聯(lián)劑。流動相——水、緩沖溶液、或加入少量的乙醇、四氫呋喃、乙腈等有機溶劑，提高選擇性2.固定相和流動相固定相是離子交換劑——常見的是離子交換五、凝膠色譜法凝膠色譜是基于分子大小不同而進行分離的一種分離技術（分子篩）。它具有一系列優(yōu)點：操作方便、不會使物質(zhì)變性、適用于不穩(wěn)定的化合物、凝膠不用再生、可反復使用。缺點：分離速度較慢。五、凝膠色譜法凝膠色譜是基于分子大小不同而進行分離的一種分離最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件凝膠過濾層析過程示意圖小分子大分子凝膠基質(zhì)凝膠珠凝膠過濾層析過程示意圖小分子大分子凝膠基質(zhì)凝膠珠六、其他色譜法（一）大孔樹脂色譜法吸附原理——范德華引力＋分子篩大孔樹脂具有吸附性及分子篩的雙重作用，可分離天然藥物中相對分子量大小及吸附力強弱不同的化學成分分離。

六、其他色譜法（二）氣相色譜法

用氣體作為移動相的色譜法。根據(jù)所用固定相的不同可分為兩類：固定相是固體的，稱為氣固色譜法；固定相是液體的則稱為氣液色譜法。（二）氣相色譜法高效液相色譜法(highpressureLiquidchromatography，HPLC)是利用物質(zhì)在兩相之間吸附或分配的微小差異達到分離的目的。當兩相作相對移動時，被測物質(zhì)在兩相之間做反復多次的分配，這樣使原來微小的差異產(chǎn)生了很大的分離效果，達到分離、分析和測定一些理化常數(shù)的目的。（三）高效液相色譜法

高效液相色譜法(highpressureLiquidcHPLC與經(jīng)典LC區(qū)別經(jīng)典液相色譜高效液相色譜常壓或減壓填料顆粒大柱效低分析速度慢色譜柱只用一次不能在線檢測高壓，40～50Mpa填料顆粒小，2～50μm柱效高，40000～60000塊/m分析速度快色譜柱可重復多次使用能在線檢測HPLC與經(jīng)典LC區(qū)別經(jīng)典液相色譜高效液相色譜常壓或減壓高流程及主要部件流程及主要部件液相色譜儀液相色譜儀液相色譜儀液相色譜儀藥材粗粉提取混合物分離有效成分藥材粗粉提取混合物分離有效成分提取分離方法●提取●分離溶劑提取法水蒸汽蒸餾法兩相溶劑萃取法沉淀法透析法分餾法鹽析法結晶法與重結晶法超臨界流體萃取法色譜法提取分離方法●提取溶劑提取法水蒸汽蒸餾法兩相溶劑萃取一、溶劑提取法第一節(jié)天然藥物化學成分的提取1、溶劑的極性極性：指一根共價鍵或一個共價分子中電荷分布的不均勻性。如果電荷分布得不均勻，則稱該鍵或分子為極性；如果均勻，則稱為非極性。與介電常數(shù)成正相關。一、溶劑提取法第一節(jié)天然藥物化學成分的提取1、溶劑的極性極H2O(水)78.5HCOOH(甲酸)58.5HCON(CH3)2(N,N-二甲基甲酰胺)36.7CH3OH(甲醇)32.7C2H5OH(乙醇)24.5CH3COCH3(丙酮)20.7n-C6H13OH（正己醇）13.3CH3COOH(乙酸)6.15

C6H6(苯)2.28CCl4(四氯化碳)2.24n-C6H14（正己烷）1.88介電常數(shù)介電常數(shù)由弱到強的順序如下：石油醚(低沸點高沸點)<二硫化碳<四氯化碳<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<醋酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水選擇溶劑的要點：能有效的提取成分；相似相溶，沸點適中易回收；低毒安全。由弱到強的順序如下：石油醚(低沸點高沸點)<二硫化2、溶劑的類型水親水性有機溶劑（極性溶劑）親脂性有機溶劑（非極性溶劑）2、溶劑的類型水親水性有機溶劑（極性溶劑）親脂性有機溶劑（（1）水優(yōu)點：溶解范圍廣、穿透能力強、易得、安全

缺點：a.有些苷類成分的酶解b.有些脂溶性成分溶解不完全c.水提液易發(fā)霉、變質(zhì)d.水溶性雜質(zhì)多，過濾困難e.沸點高，濃縮困難（1）水(2)親水性有機溶劑優(yōu)點：溶解范圍廣、水溶性雜質(zhì)溶出少、提取液不易發(fā)霉、變質(zhì)、大部分可回收利用。缺點：但有揮發(fā)性、易燃燒。(2)親水性有機溶劑（3）親脂性有機溶劑優(yōu)點：對化合物溶解選擇性較強、水溶性雜質(zhì)少、易純化。缺點：揮發(fā)性大、易燃燒，有毒、價格昂貴，對提取設備要求高穿透力較弱，提取時間長。（3）親脂性有機溶劑3、被提取成分的性質(zhì)極性（親水性）非極性（親脂性）中等極性（既有親水性又有親脂性）常見取代基的極性大小順序：酸＞酚＞醇＞胺＞醛＞酮＞酯＞醚＞烯＞烷3、被提取成分的性質(zhì)4、溶劑選擇的原則（1）“相似相溶”，對有效成分溶解度大，對雜志溶解度小。（2）溶劑與所溶成分不發(fā)生化學反應，即使發(fā)生也是可逆的。（3）廉價、易得、使用安全、易于回收和濃縮。4、溶劑選擇的原則（三）提取技術1、浸漬法適用于：有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、粘液質(zhì)、樹膠等多糖物質(zhì)較多的中藥。（三）提取技術適用于：有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、粘液2、煎煮法適用于：能溶于水且遇熱穩(wěn)定成分的提取。2、煎煮法適用于：能溶于水且遇熱穩(wěn)定成分的提取。3、滲漉法適用于：遇熱易被破壞的成分。3、滲漉法適用于：遇熱易被破壞的成分。4、回流提取法適用于：對熱穩(wěn)定的成分提取。4、回流提取法適用于：對熱穩(wěn)定的成分提取。5、連續(xù)回流提取法索氏提取器5、連續(xù)回流提取法索氏提取器溶劑提取法分類提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水有機溶劑不加熱，在常溫下浸泡提取效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機溶劑不加熱滲漉筒—脂溶性成分消耗溶劑量大，費時長煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機溶劑在回流裝置中水浴加熱提取—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機溶劑以索氏提取器水浴加熱回流提取節(jié)省溶劑效率最高親脂性較強成分時間長溶劑提取法分類提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水不（四）影響提取效率的主要因素溶劑的選擇（關鍵）提取技術濃度差藥物的粉碎度溫度、時間（四）影響提取效率的主要因素（五）提取液的濃縮1、蒸餾指將提取液加熱濃縮，特點是不僅對回收的溶劑可再利用，降低成本，減少有機溶劑對環(huán)境的污染和對操作人員的危害。（五）提取液的濃縮2、蒸發(fā)通過加熱使提取液中的溶劑氣化并除去，從而提高提取液濃度。2、蒸發(fā)通過加熱使提取液中的溶劑氣化并除去，從而提高原理：被提取成分和水一起加熱時，其蒸汽壓與水蒸氣壓總和為一個大氣壓，液體沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性成分一并帶出。范圍：難溶于水或不溶于水的揮發(fā)性成分，加熱不被破壞。如：揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分子的醌類成分。二、水蒸氣蒸餾法：

共水蒸餾法（即直接加熱法）通水蒸氣蒸餾法原理：被提取成分和水一起加熱時，其蒸汽壓與水蒸氣壓總和為一個適用于：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、與水不發(fā)生反應且不溶或難溶于水的成分的提取。適用于：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、與水不發(fā)生反應三、超臨界流體萃取物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上狀態(tài)時，成為單一相態(tài)，稱超臨界狀態(tài)。兼具有氣液兩相性質(zhì)（常用萃取劑CO2）：①液體相近的密度，強穿透力；②氣體相近的擴散力，提取速率高。三、超臨界流體萃取物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上狀態(tài)時，成為最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件第二節(jié)天然藥物化學成分的分離一、兩相溶劑萃取法（一）基本原理液液萃取是以分配定律為基礎分配定律：一定T、P下，溶質(zhì)在兩個互不相溶的溶劑中分配，平衡時，溶質(zhì)在兩相中濃度之比為常數(shù)。K-分配系數(shù)第二節(jié)天然藥物化學成分的分離一、兩相溶劑萃取法液液萃取是以雜質(zhì)溶質(zhì)原溶劑萃取劑雜質(zhì)溶質(zhì)原溶劑萃取劑實驗室液液萃取過程實驗室液液萃取過程（二）萃取劑的選擇原則1、互不相溶2、分配系數(shù)相差越大越好3、水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃??；有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，需用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。（二）萃取劑的選擇原則溶劑萃取步驟溶劑體積為樣品溶液的30％-35％。振蕩幾次打開活塞Gas蒸氣逸出（也叫放氣）溶劑萃取步驟溶劑體積為樣品振蕩幾次打開活塞Gas蒸氣逸出（也絮狀物（乳化）有機相水相水相和絮狀物靜置分層激烈振搖1-2min絮狀物有機相水相水相和絮狀物靜置分層激烈振搖有機相3～5次少量多次原則有機相3～5次少量多次原則二、沉淀法（一）酸堿沉淀法

利用天然藥物中游離酸性（或堿性）成分可與堿性（或酸性）試劑反應生成鹽而溶于水，再加酸（或堿性）試劑，重新生成原來的游離酸性（或堿性）成分而從溶液中沉淀析出的性質(zhì)，濾過（或加有機溶劑萃?。┒c其他成分或雜質(zhì)分離的一種方法。（二）乙醇沉淀法

在濃縮后的水提液中，加入一定量的乙醇（使含醇量達80%以上），則難溶于高濃度乙醇的成分如蛋白質(zhì)、淀粉、樹膠等從溶液中析出，經(jīng)過濾即可除去。二、沉淀法三、結晶法與重結晶法（一）基本概念三、結晶法與重結晶法（一）基本概念結晶：由非晶形經(jīng)過結晶操作形成有晶形的過程。原理：根據(jù)混合物中各成分在某種溶劑中溶解度的差異。先加熱溶液，蒸發(fā)溶劑成飽和溶液，此時降低熱飽和溶液的溫度，溶解度隨溫度變化較大的溶質(zhì)就會呈晶體析出。關鍵---溶劑:被溶解成分的溶解度隨溫度不同有顯著差別；與成分不產(chǎn)生化學反應；沸點適中；常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯結晶：由非晶形經(jīng)過結晶操作形成有晶形的過程。（二）操作過程1、選擇適宜的溶劑

根據(jù)欲結晶成分的性質(zhì)及在溶劑中溶解度大小來選擇。2、制備飽和的結晶溶液（1）過飽和溶液的形成（2）晶核生成（3）晶體的生長(1)冷卻(2)溶劑蒸發(fā)（二）操作過程(1)冷卻(2)溶劑蒸發(fā)3、趁熱過濾3、趁熱過濾最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件（三）結晶溶劑的選擇（1）與被提純的有機化合物不起化學反應。（2）對被提純的有機物應具有熱溶，冷不溶（3）雜質(zhì)化合物的溶解性對溫度變化不敏感（4）對要提純的有機物能在溶劑中形成較整齊的晶體。（5）溶劑的沸點，不宜太低（易損），也不宜太高（難除）。（6）價廉易得無毒。（三）結晶溶劑的選擇最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件四、鹽析法

鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。鹽析用的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸銨鹽析制備。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時，亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機溶劑萃取。四、鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽五、透析法

透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達到分離的方法。例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時，可用透析法以除去無機鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進入膜外溶液中，而加以分離精制。透析是否成功與透析膜的規(guī)格關系極大。

五、透析法最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件六、升華法

固體物質(zhì)受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，故可利用升華法直接自中草藥中提取出來。例如樟木中升華的樟腦（camphor），在《本草綱目》中已有詳細的記載，為世界上最早應用升華法制取藥材有效成分的記述。又如茶葉中的咖啡因具有升華性，可將茶葉放在大小適宜的燒杯中，上面用圓底燒瓶盛水冷卻，然后加熱，到一定溫度（178℃），咖啡因可凝結于燒瓶底部，成白色針狀結晶。六、升華法最新天然藥物化學成分的提取和分離主題講座課件七、分餾法

對沸點相近的混合物，在分餾柱內(nèi)反復進行氣化、冷凝、回流等程序而分離的一種方法。七、分餾法第三節(jié)色譜分離法第三節(jié)色譜分離法

1906年，俄國植物學家Tswett

目的：分離植物色素

過程：將植物綠葉的石油醚提取液倒入玻璃管中，并用石油醚不斷淋洗，逐漸形成色帶，各色素成分被分離

命名：分離方法為“色譜法”

稱：玻璃管“色譜柱”

稱：碳酸鈣“固定相”

稱：石油醚“流動相”

石油醚石油醚植物色素分離圖示植物色素分離圖示色譜分離法又稱層析分離法：即是利用混合物中各組分的物理化學性質(zhì)（分子的形狀和大小，分子的極性，吸附力，分子的親和力，分子的分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相是固定的，稱固定相；另一相是流動的，稱流動相。當流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，而達到分離。色譜分離法又稱層析分離法：即是利用混合物中各組分的物理化分類按流動相分氣相色譜液相色譜超臨界流體色譜按機理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜凝膠色譜分類按流動相分氣相色譜按機理分吸附色譜分類吸附色譜——利用固定相中吸附劑表面對各組分不同的物理吸附能力(氣—固色譜）分配色譜——不同組分在兩相中有不同的分配系數(shù)(氣—液色譜)離子交換色譜——利用離子交換原理(離子色譜)凝膠色譜——利用多空性物質(zhì)對不同大小分子的排阻作用(液相色譜)分類一、吸附色譜法當溶液中某組分的分子在運動中碰到一個固體表面時，分子會貼在固定表面上，這就發(fā)生了吸附作用。一、吸附色譜法當溶液中某組分的分子在運動中碰到一個固體表面時1.分離原理各組分與流動相分子爭奪吸附劑表面活性中心,利用吸附劑對不同組分的吸附能力差異而實現(xiàn)分離.經(jīng)過吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分離.

1.分離原理各組分與流動相分子爭奪吸附劑2.固定相及其選擇固定相是表面具有許多吸附中心的吸附劑，常用吸附劑硅膠表面的硅醇基為吸附中心。經(jīng)典液相柱色譜和薄層色譜使用一般硅膠。（1）對吸附劑的要求

①有大的表面積和足夠的吸附能力；②對不同的化學成分有不同的吸附力，能較好地把混合物分開；③與流動相、溶劑及樣品中各成分不起化學反應；④在所用的溶劑及流動相中不溶解；⑤顆粒均勻，操作過程中不會碎裂。2.固定相及其選擇固定相是表面具有許多吸（2）吸附劑的類別①有機類淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纖維素等②無機類氧化鋁、硅膠、活性炭、碳酸鈣、硅藻土等（3）吸附劑的活度因含水使吸附劑活度，含水量，活性(活度)級別，活性（2）吸附劑的類別①有機類淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纖維素等（4）吸附劑的選擇a硅膠：為首選吸附劑。本身具微酸性，適用于分離酸性及中性物質(zhì)，如有機酸、氨基酸、甾體等。b氧化鋁：氧化鋁具有分離能力強、活性可以控制等優(yōu)點。

堿性氧化鋁pH9～10適于分析堿性、中性物質(zhì)中性氧化鋁pH7.5適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)酸性氧化鋁pH4～5適于分析酸性、中性物質(zhì)C聚酰胺:氫鍵作用,氫鍵能力↑強，組分越后出柱

分離極性小的物質(zhì)，一般選用活性大些的吸附劑；反之，分離極性大的物質(zhì)，選用活性小的吸附劑。（4）吸附劑的選擇a硅膠：為首選吸附劑。本身具微酸性，適3.流動相及其選擇（1）要求

①應使用較純試劑，含雜質(zhì)會影響洗脫能力②與樣品或吸附劑不發(fā)生化學反應③能溶解樣品中各成分，且各被分離組分有不同的K值④粘度小，易流動（2）流動相流動相的洗脫能力主要由其極性決定，極性強的流動相分子占據(jù)極性中心的能力強，洗脫能力就強。流動相的選擇要依據(jù)樣品的極性、吸附劑的活性而定。3.流動相及其選擇（1）要求（2）流動相（3）常用溶劑的極性石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水（4）流動相的選擇用硅膠或氧化鋁作色譜分離時，如被測成分極性較大，用活性較低的吸附劑，極性較大的沖洗劑；被測成分極性較小，選用活性較強的吸附劑，極性較小的沖洗劑（3）常用溶劑的極性石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<4.洗脫順序吸附弱的組分先被洗脫，吸附強的組分后被洗脫。吸附的強弱與組分的性質(zhì)(極性、取代基的類型和數(shù)目、構型）有關。一般規(guī)律是：①非極性化合物，吸附弱。②基本母核相同，分子中取代基的極性越強，或極性基團越多，分子極性越強(但要考慮其他因素的影響)，吸附能力越強。③分子中雙鍵數(shù)越多，則吸附力越強。④能形成分子內(nèi)氫鍵的化合物，其吸附能力降低。

4.洗脫順序吸附弱的組分先被洗脫，吸附強的組分后常見化合物的吸附能力的順序如下：烷烴(-CH3、-CH2-)<烯烴(-CH=CH-)<醚類(-OCH3)<硝基化合物(-NO2)<二甲胺(-N(CH3)2)<酯類(-COOR)<酮類(>C=O)<醛類(-CHO)<硫醇(-SH)<胺類(-NH2)<酰胺(-NHCOCH3)<醇類(-OH)<酚類(Ar-OH)<羧酸類(-COOH)常見化合物的吸附能力的順序如下：烷烴(-CH3、-CH2薄層色譜法

薄層色譜是在平面上進行分離的一種方法，又叫平面色譜法。通常將固定相(吸附劑)均勻地涂鋪在表面潔凈的玻璃、塑料或金屬板形成薄層，制成薄板，進行樣品分離。薄層色譜法

薄層色譜是在平面上進行分離的一種方法，又叫平(一)吸附色譜分離原理利用吸附劑對不同成分吸附力的大小及展開劑解吸附作用的差異進行分離。吸附牢的組分隨展開劑移動慢，吸附弱的組分隨展開劑移動快，一段時后，組分被分離。固定相:固體吸附劑流動相:液體展開劑一、基本原理(一)吸附色譜分離原理一、基本原理溶劑

前沿起始線ABabc（1）比移值Rf：Rf是薄層色譜法基本定性參數(shù)，一定條件時Rf為定值，在0～1之間，可用范圍Rf值在0.2～0.8之間。組分極性越大，Rf越小,反之越大。（二）比移值與相對比移值溶劑

前沿起始線ABabc（1）比移值Rf：Rf是薄層色譜法硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質(zhì)極性越大，越易被吸附。一般規(guī)律：（1）官能團極性越大，整個分子極性越大，越易被吸附；（2）形成分子內(nèi)H鍵時，被吸附力減弱；（3）同系物中，分子量越大，極性越小，被吸附力越弱。被分離物質(zhì)極性與吸附能力的關系硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質(zhì)極性越大，越易被吸附。被分離物質(zhì)硅膠薄層色譜規(guī)律總結被分離組分展開劑Rf被分離物洗脫順序極性大極性大小后洗脫極性小極性小大先洗脫硅膠薄層色譜規(guī)律總結被分離組分展開劑Rf被分離物洗脫順序極性（1）軟板的制備軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑要求：厚度→隨分離要求而定，一般0.25～0.5mm玻璃棒推動速度不宜過快、也不應停頓→影響厚度均一性操作步驟（1）軟板的制備軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合2、點樣（1）樣品溶液的制備：

2、點樣（1）樣品溶液的制備：2、點樣（2）點樣量：

與薄層板的關系太多太少的影響點樣基線：距底邊2.0cm樣點直徑：2-4mm點間距離：1.5-2.0cm2、點樣（2）點樣量：點樣基線：距底邊2.0cm2、點樣（3）點樣方法：

劃線、樣品記號點、點樣

注：動作要輕，毛細管或點樣器不能混用，斑點大小適當，可多次點樣。平頭50ul微量點樣器全自動點樣儀2、點樣（3）點樣方法：平頭50ul微量點樣器全自動點樣儀3、展開展開缸（色譜缸）3、展開展開缸（色譜缸）3、展開（1）展開方式：a、近水平展開特點：速度快、適用于軟板的展開。3、展開（1）展開方式：a、近水平展開特點：速度快、適用于軟3、展開（1）展開方式：b、上行展開過程：預飽和（濾紙貼于展開槽內(nèi)側）、展開、標記溶劑前沿3、展開（1）展開方式：b、上行展開過程：預飽和（濾4、顯色和定位一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑加顯色劑：多噴霧，軟板使用浸漬顯色法紫外燈觀察噴顯色劑觀察4、顯色和定位一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑紫判斷依據(jù)：Rf值四、結果計算和判斷判斷依據(jù)：Rf值四、結果計算和判斷二、分配色譜法1.分離原理：將液體均勻地涂漬在惰性物質(zhì)(載體)表面上作為固定相，利用被分離組分在固定相與流動相中的溶解度差別所造成的分配系數(shù)差別而被分離。二、分配色譜法1.分離原理：將液體均勻地涂漬在惰性物質(zhì)(2.固定相和流動相要求：固定相→機械吸附在惰性載體上的液體,常用的固定液有水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等強極性溶劑

載體→惰性物質(zhì)，無吸附性性質(zhì)穩(wěn)定，不與固定相和流動相發(fā)生化學反應常用的有吸水硅膠、纖維素、多孔硅藻土等。流動相→必須與固定相不為互溶石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵代烷及苯等。2.固定相和流動相要求：流動相→必須與固定相不為互溶石油醚、3.洗脫順序正相色譜

固定相極性大于流動相極性,主要分離極性樣品.極性弱的組分先被洗脫，極性強的組分后被洗脫。反相色譜

固定相極性小于流動相極性,主要分離非極性樣品和中等極性樣品.極性強的組分先出柱，極性弱的組分后出柱。3.洗脫順序正相色譜固定相極性大于流動相極性,主要分

定義：

紙色譜分離法又稱紙層析法，是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相中的分配比不同而進行分離的一種微量分離方法。紙色譜法載體——層析紙（濾紙）；固定相——濾紙上的吸濕水分；流動相——有機溶劑（展開劑）。定義：紙色譜法載體——層析紙（濾紙）；實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值實驗步驟點樣展開分離顯色計算比移值187實驗原理分離示意圖AB上行法實驗原理分離示意圖AB上行法188實驗原理原點展開后斑點溶劑前沿a1a2bAB實驗原理原點展開后斑點溶劑前沿a1a2bAB189實驗原理RF:

通常用比移值RF衡量各組分的分離程度：RF:0～1。RF值相差越大，分離效果越好。實驗原理RF:RF:0～1。190RF：物質(zhì)定性分析的依據(jù)。在進行分析工作時，可使用各組分相應的