第4節(jié)高效毛細管電泳分離模式

2023/2/4第十一章

高效毛細管電泳分析法一、毛細管區(qū)帶電泳(CZE)capillaryzoneelectrophoresis二、毛細管凝膠電泳(CZE)capillarygelelectrophoresis三、膠束電動毛細管色譜micelleelectrokineticcapillaryelectrophoresis四、毛細管等電聚焦(CIEF)capillaryisoelectricfocusing五、毛細管等速電泳capillaryisotachophoresis第四節(jié)

高效毛細管電泳分離模式highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEseparatetypesofHPCE

2023/2/4分離類型八種分離類型，介紹常用的幾種；根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型；每種機理的選擇性不同；2023/2/4一、毛細管區(qū)帶電泳

capillaryzoneelectrophoresis，CZE

帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。

正離子：兩種效應(yīng)的運動方向一致，在負極最先流出；中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運動方向相反；ν電滲流>ν電泳時,陰離子在負極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。

最基本、應(yīng)用廣的分離模式；2023/2/4二、毛細管凝膠電泳

capillarygelelectrophoresis，CGE

將聚丙烯酰胺等在毛細管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。蛋白質(zhì)、DNA等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，DAN排序的重要手段。特點：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。2023/2/4

1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負電的膠束。三、膠束電動毛細管色譜（MECC，MEKC）

micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC

在電場力的作用下，膠束在柱中移動。2023/2/4

2.電泳流和電滲流的方向相反，且ν電滲流>ν電泳，負電膠束以較慢的速度向負極移動；

5.色譜與電泳分離模式的結(jié)合。3.中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長；4.可用來分離中性物質(zhì)，擴展了高效毛細管電泳的應(yīng)用范圍；討論問題2023/2/4為什么毛細管膠束電色譜可分離中性化合物?而毛細管區(qū)帶電泳不能分離中性化合物?2.在石英毛細管區(qū)帶電泳分析,為什么中性化合物也流過陰極?2023/2/4

1.根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；2.毛細管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當施加直流電壓（6～8V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的pH梯度；3.氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零；四、毛細管等電聚焦

capillaryisoelectricfocusing，CIEF2023/2/4

4.聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達滿足其等電點pH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離；

5.陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOH溶液；6.加壓將毛細管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測；7.電滲流在CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。2023/2/4

1.將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導離子(充滿毛細管)和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動。2.負離子分析時，前導電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負離子的。所有試樣都按前導離子的速度等速向陽極前進，逐漸形成各自獨立的區(qū)帶而分離。陰極進樣，陽極檢測。五、毛細管等速電泳

capillaryisotachophoresis，CITP2023/2/4

3.不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強度不同(ν=μE)，淌度大的離子區(qū)帶電場強度??；沿出口到進口，將不同區(qū)帶依次排序1、2、3、4電場強度依次增大。假設(shè)“2”號中離子擴散到“3”號，該區(qū)電場強度大，離子被加速，返回到“2”區(qū)；當“2”號中離子跑到“1”號區(qū)，離子被減速使之歸隊；4.特點：界面明顯，富集、濃縮作用；capillaryisotachophoresis，CITP2023/2/4

在毛細管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流為流動相，試樣組分在兩相間的分配為分離機理的電動色譜過程；六、毛細管電滲色譜

capillaryelectroosmosticchromatography，CEC2023/2/4請選擇內(nèi)容第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細管電泳儀器highperfor