石大藥用植物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)01基本知識(shí)和技能

3(供藥學(xué)和中藥學(xué)專業(yè)使用)藥學(xué)院 基本知識(shí)和技能(一)標(biāo)本的壓制將采得的標(biāo)本，壓在標(biāo)本夾(夾板)內(nèi)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(依據(jù)材料的不而異)后用紙更要使花、葉展平、形態(tài)美觀，不能使多數(shù)葉片重疊壓反面葉片。落下來(lái)的花、果或葉片，要用小紙袋裝好，袋外寫(xiě)與標(biāo)本放在一起，以后貼在臺(tái)紙上。標(biāo)本與標(biāo)本之間須隔數(shù)層吸，并加適當(dāng)?shù)膲毫Γ么掷K將標(biāo)本夾捆起干紙時(shí)，須再仔細(xì)加工整理標(biāo)本。以后每日均需更換干紙至少一次，捆緊標(biāo)本夾后放在日光中，使水份迅速蒸發(fā)燥?；鸷婵?。換下的濕紙，要及時(shí)放日光中曬干或用火烤干，以備換紙鱗莖、果實(shí)可切開(kāi)壓制。南方多雨地區(qū)，每日應(yīng)換干紙二次，并可干的標(biāo)本要及時(shí)提出另放，即每隔一張單紙放一張標(biāo)本。并應(yīng)將同用一張單紙夾起，在夾紙的右下角，寫(xiě)上該號(hào)標(biāo)本的采集號(hào)。最后(二)標(biāo)本的消毒單位交換來(lái)的標(biāo)本，往往帶有害蟲(chóng)卵或霉菌孢子。故在標(biāo)本入柜，消毒方法可用升汞(HgCl2)的千分之二至千分之五的乙醇溶液放在搪透靜置5min左右，用夾子夾取，放在干的吸水紙中，壓干后即可上臺(tái)(三)標(biāo)本的裝訂己經(jīng)消毒的標(biāo)本，用毛筆將膠水(最好用植物膠)刷在標(biāo)本背面，花的部分不必上膠以便解剖觀察花部形態(tài)。然后移貼臺(tái)紙上(可用約40cm×30cm的厚卡片紙)，稍加壓力，放置干。貼時(shí)應(yīng)注意在左上角和右下角分別留出貼野外記錄簽和定名簽的位置。然后用紙條(或線)將葉片和植物粗壯部分穿釘固定在4(四)標(biāo)本的鑒定分種鑒定后，可將定名簽貼在臺(tái)紙右下角，野外記錄簽貼在貼一張薄而韌性強(qiáng)的封面襯紙放在一起，用一種夾夾起(可用牛皮紙按臺(tái)紙大小制作)并在種夾外注明該種植物學(xué)，按科、屬順序放。柜中可放入一些樟腦球防蟲(chóng)。整個(gè)標(biāo)本室可用硫釀氟或溴代甲烷(一)顯微鏡的類型結(jié)構(gòu)、組織特征和器官構(gòu)造最常用的重要儀器。顯微鏡的類型微鏡和電子顯微鏡兩大類。根據(jù)其功能的不同，光學(xué)顯微鏡又分—支持及調(diào)節(jié)系統(tǒng)組成。以可見(jiàn)光作光源，用玻璃制作透鏡式顯微鏡與復(fù)式顯微鏡兩類。單式顯微鏡由一個(gè)透鏡組成放大倍數(shù)稍復(fù)雜的單式顯微鏡為解剖顯微鏡，是由幾個(gè)透鏡組成，其放大倍數(shù)是一種將光線通過(guò)透明標(biāo)本細(xì)節(jié)時(shí)所產(chǎn)生的光程差(即相位差)轉(zhuǎn)化為光強(qiáng)差的特種顯光的干涉現(xiàn)象，將人眼不可分辨的相位差轉(zhuǎn)化為人眼可以分辨的振射時(shí)所產(chǎn)生的散射光來(lái)分辨樣品細(xì)節(jié)的特殊顯微鏡。其特5，而是將光線改變途徑，使其斜射投向被檢物，使入物鏡，利用被檢物體表反射或衍射光而形成明亮圖像便可通過(guò)物鏡和目鏡被觀察到，從而類顯微鏡。電子顯微鏡以特殊的電極和磁極作為透鏡代替玻璃透A左右的物體，放大倍數(shù)可達(dá)80~120萬(wàn)倍，其分辨力比光學(xué)顯微鏡大100(二)普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造造繁簡(jiǎn)不同，但總的來(lái)說(shuō)，都包括光學(xué)結(jié)構(gòu)和機(jī)械裝置兩大1系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成。成像系統(tǒng)包括物鏡和目鏡，照明系統(tǒng)包括6鏡筒的上端，通常由兩個(gè)透鏡組成，上面一個(gè)與眼睛接觸的叫接目透鏡，下面一個(gè)靠近視野的叫視野(會(huì)聚)透鏡，在上下透鏡的中間，有一金屬制成實(shí)象再放大一次并把物鏡映入影響。物鏡可分低倍、高倍的性能可以從物鏡外殼上標(biāo)志著的數(shù)值孔徑(numericalreNA)大小來(lái)表示。數(shù)值孔徑的大小又是衡量一臺(tái)顯微鏡分辨力強(qiáng)弱的依據(jù)。不同放大倍數(shù)3×~0.95物鏡的放大倍數(shù)愈高它的工作距離愈小載物臺(tái)下，是由幾個(gè)透鏡組成，用來(lái)集中光線的。虹彩圈安裝在聚個(gè)其中安有可變扁平形的環(huán)，上有一特別的柄使其張開(kāi)或關(guān)閉來(lái)調(diào)節(jié)聚光器的最下方，是由一面平一面凹的鏡子所組成，鏡面可作各種用是改變照明的光線，使光線能射向聚光透視。平面鏡在光線較7及調(diào)節(jié)系統(tǒng)整個(gè)顯微鏡裝配的骨架，它是安裝光學(xué)放大系統(tǒng)的基座。顯微鏡鏡的主要支持架，它由傾斜關(guān)節(jié)與鏡柱及鏡座連在一起，在使用時(shí)形金屬筒。上接目鏡，下連物鏡轉(zhuǎn)換器。并使目鏡和物鏡的配合保保護(hù)成像的光路和亮度，物鏡的放大率是對(duì)一定的鏡筒長(zhǎng)度而言的，而且成像質(zhì)量也受到影響。因此，使用顯微鏡時(shí)不能任意改變鏡筒長(zhǎng)度國(guó)際上將顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)筒長(zhǎng)定為160mm于鏡筒下端的圓盤。可自由轉(zhuǎn)動(dòng)，盤上有3~4個(gè)安裝物鏡的螺旋孔當(dāng)以調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本之間的距離，得到清晰的物像。在鏡臂兩側(cè)有粗l對(duì)(彎筒顯微鏡的調(diào)焦螺旋在鏡柱兩側(cè))下降，大的一對(duì)為粗調(diào)焦螺旋，旋轉(zhuǎn)一圈可使鏡筒移動(dòng)2mm左右約看到標(biāo)本為止，然后改用細(xì)調(diào)節(jié)器作精確調(diào)焦，使所觀察的標(biāo)臺(tái)也叫工作臺(tái)或鏡臺(tái)。它的作用是安放載玻片。載物臺(tái)中心有一個(gè)固定式和移動(dòng)式兩種，移動(dòng)式載物臺(tái)上旋鈕可左右前后移動(dòng)。載物臺(tái)(二)解剖鏡的構(gòu)造與使用8不過(guò)它的構(gòu)造比較簡(jiǎn)單。機(jī)械裝置有鏡座、鏡臺(tái)、鏡筒、支柱(立柱)和調(diào)節(jié)手輪等部分：光學(xué)系統(tǒng)有接目鏡、接物鏡和反光鏡等部分(見(jiàn)圖1-2)。雙筒解剖鏡具有兩個(gè)鏡筒、兩個(gè)目鏡和物鏡，因此，使用時(shí)兩眼可以同時(shí)觀察。在鏡筒的其中一個(gè)附有調(diào)整目鏡筒(目鏡調(diào)節(jié)圈)，用以校正觀察者的兩眼間距離。雙筒有一對(duì)粗調(diào)焦手輪，進(jìn)行焦距調(diào)節(jié)。按目鏡和接物鏡也有各種不同的放大率有反光鏡，有的缺反光鏡；有的在鏡身上附有照明燈。鏡臺(tái)上一面白色一面黑色的瓷板，根據(jù)觀察物的顏色和透明度可以調(diào)換光源的位置，調(diào)節(jié)兩鏡筒間的距離，使適合自己的兩眼間的寬度。臺(tái)選用玻璃板，光源由反光鏡底下照射。如觀察不透明的標(biāo)色標(biāo)本用白色一面，淺色標(biāo)本用黑色一面，光源以強(qiáng)光或燈光從標(biāo)本要觀察的部位應(yīng)轉(zhuǎn)向光源。在解剖鏡下，觀察到的物象為一91.目鏡護(hù)罩2.目鏡3.目鏡調(diào)節(jié)環(huán)4.升降手輪5.縮緊螺釘6.活動(dòng)支柱7.固定支柱8.鏡身9.轉(zhuǎn)盤10.大物鏡11.壓夾12.工作臺(tái)板13.底座永久制片三種。臨時(shí)制片是供臨時(shí)觀察中藥顯微構(gòu)造用，一般不作保存，制片簡(jiǎn)單，封藏劑(裝置液)為水、稀。半永久制片常用于需要保存一段時(shí)間的中藥制片，保存時(shí)間為3~12劑常用甘油凍膠。永久制片是作長(zhǎng)期保存的標(biāo)本片，如標(biāo)準(zhǔn)中藥的標(biāo)(一)徒手切片法隨制。切片用具有單面刀片、雙面刀片、鑷子、培養(yǎng)皿等。適用對(duì)(1)取材：根據(jù)鑒定的要求，選取有代表性的藥材樣品進(jìn)行制片。根類藥材分別在細(xì)的尾部取材；根莖類藥材和莖類藥材一般在節(jié)間取材；葉類藥材(2)切片：將刀片和材料在水中濕潤(rùn)，用左手拇指和食指夾持材料，食指略高于拇指下部托住材料。右手食指和拇指持刀片，從左前方向右后方平行地幾片后，把刀在盛水的培養(yǎng)皿中輕輕蕩蕩入水中。切片后，需調(diào)整左手所持材料高度。重復(fù)上面操作，直到(3)裝片：選擇較完整的切片。將載玻片斜向浸入水中，用鑷子輕輕地把切片移至用白布擦盡兩面的水漬，在材料上滴加裝置液l~2玻片一邊接觸裝置液邊緣，待裝置液沿邊緣擴(kuò)散后漸漸蓋下蓋玻。裝片后如裝置液過(guò)多，流溢到蓋玻片以外，要用吸水紙將多余的玻片滑動(dòng)和浸濁顯微鏡，如裝置液少，沒(méi)有在蓋玻片下充滿，可用小心將裝置液滴入，使其充滿。如在顯微鏡下觀察有氣泡存在，可玻片，使里邊氣體逸出，如氣泡太多，將會(huì)影響觀察效果，這樣的久制片。(二)表皮撕片法觀察表皮細(xì)胞垂周壁、氣孔及其類型、毛茸等顯微特征而采用的持葉片，必要時(shí)可用中指由下方托住葉片。右手持鑷子，用尖部在葉表皮一小塊，浸入盛水的培養(yǎng)皿中。左手持潔凈載玻片，將載?？拷合碌娜~表皮，右手持鑷子或解剖針，將葉表皮移到載玻片上，擦凈載玻片兩面的水漬，加裝置液1滴，加蓋玻片即成。染色、透明、封藏等過(guò)程，別加入30%乙醇5ml(1min)、40%乙醇5ml(1min)、50%乙醇5ml(1min)、番紅乙醇(50%)染色液5ml(2~6h)、65%乙醇5ml(1min)、75%乙醇5ml(1min)、85%乙醇5ml(1min)、固綠乙醇(95%)染色液5ml(0.5min)、95%乙醇5ml(1min)、無(wú)水乙醇5ml(1min)2次、無(wú)水乙醇-二甲苯混合液(1:1)5ml(1min)、二甲苯(1min)5ml(三)粉末制片法碎的和粉末狀的中藥而采用的一種制片方法，是中藥顯微鑒定中材，粉末中藥制成的丸、散、膏、丹等中成藥，易破碎的中藥材以(1)水裝片法：取過(guò)60目篩的中藥粉末少許，置載玻片中央，加水1它浸潤(rùn)粉末，再加1~2滴后蓋上蓋玻片即成。本法適用于觀察淀粉(2)水合氯醛透化裝片法：取粉末少許，置載玻片中央，加水合氯醛液1它浸潤(rùn)粉末，在酒精燈上加熱，沸即離火，再加加水合氯醛液1滴熱，如此反復(fù)三次。離火，加稀甘油1~2滴，拌勻，蓋片即成。本2永久制片法取粉末適量于離心管中，加人50二甲苯混合液(1:1)1次、二甲苯2次，每次l鐘。最后用吸管吸取材料于載玻片上，滴加加拿大樹(shù)膠，蓋上蓋玻片，貼上標(biāo)簽即(四)組織解離制片法，將組織軟化并使各組織細(xì)胞之間的果膠質(zhì)被溶化而分適用于觀察各種細(xì)胞完整的形態(tài)。解離前，需將材料切成1(1)氫氧化鉀法：適用于組織柔軟的材料，如葉、花、根尖等。燒懷中，加5%氫氧化鉀溶液2~5ml，水浴加熱20~30料能散開(kāi)為止，傾去堿液，用水洗滌，取少量材料置載玻片上(2)鉻酸—燒懷中，加解離液適量，浸泡1~2天，夏天在室溫即可，冬天，至用玻璃棒拌輕壓材料能離散開(kāi)為止，用清水離心洗滌數(shù)次，洗凈酸(3)氯酸鉀法：適用于木類以及堅(jiān)硬的果皮及種皮等藥材。其特點(diǎn)是解離迅速，有。止，冷卻，用水離心洗滌數(shù)次，洗凈酸液，吸取少量材料置載玻2永久制片法0%、甲苯1滴于載玻片上，滴加拿大樹(shù)膠1(五)花粉粒及孢子制片法用于花類中藥、全草類中藥、蜜源植物以及蕨類植物的鑒定。為飾和萌發(fā)孔等特征，在制片中有時(shí)需將內(nèi)部的原生質(zhì)體用化群，放于載玻片中央，用玻璃棒壓碎，去除花藥殘?jiān)蟮渭铀下热┮?滴，用解剖針攪動(dòng)，使氣泡溢出，再滴加水合氯醛液1滴，蓋上蓋玻片即成。冰醋酸軟化，或用熱水浸泡使其變軟，用玻璃棒壓碎，移至離心心，傾去上清液，加入新鮮配制的醋酸-硫酸(9:1)混合液約3ml，在水浴上加熱1~2分鐘，邊加熱，邊用玻璃棒攪拌，待消冷后離心，取沉淀，用水洗滌2次，再用甘油水(50:50)混合液浸15分鐘后離心，傾出上清液解剖針取一小塊甘油凍膠，放入離心管剖針把花粉攪均勻，蓋上蓋玻片，稍加壓，在蓋玻片四周涂上熔甘油凍膠配制：優(yōu)質(zhì)明膠5g，蒸餾水30ml，甘油35ml，石碳酸(溶解于10滴水中)0.5g(每100ml水中加1g)先將明膠溶解于35后將其他藥品加入，待完全溶解而溶液尚溫暖時(shí)，用粗濾紙濾入廣口見(jiàn)實(shí)物的形態(tài)，常常根據(jù)觀察到的實(shí)物進(jìn)行繪圖不僅加深了對(duì)觀察內(nèi)容的理解，而且也是基其顯微構(gòu)造，除可用文字描述外，一般均需附圖說(shuō)明，繪鑒定學(xué)工作中的一項(xiàng)基本技能。繪圖的精確與好壞，明顯地影響學(xué)研究的結(jié)果與質(zhì)量。常用繪圖方法有徒手繪圖法和顯微描繪法可分為鉛筆繪圖法、墨線繪圖法和彩色繪圖法等。繪制顯微組織(一)繪圖的基礎(chǔ)知識(shí)形態(tài)圖還要求富有立體感，不能隨意夸張和任意涂影如前大、后小、近明、遠(yuǎn)暗分叉，切忌重復(fù)描繪。②所有結(jié)構(gòu)線條不能用尺或其他圓規(guī)或曲線徒手作圖，以表示生物的自然形態(tài)。③顯示立體結(jié)構(gòu)可用透視線條柱體或圓錐體的立體結(jié)構(gòu)可以用圓點(diǎn)襯托明暗光線的方式，而不可點(diǎn)要小而圓，由密到稀逐步過(guò)渡。④各部位應(yīng)先畫(huà)了引線再注文字均勻、不交叉，以免誤指。注字時(shí)要盡可能詳在圖右邊的一側(cè)，排列整齊。圖內(nèi)的結(jié)構(gòu)名稱，可直接用文字寫(xiě)明楚、端正。圖下需注明標(biāo)本的數(shù)。⑤實(shí)驗(yàn)題目寫(xiě)在繪圖紙的上方，圖題和所用材料的名稱和部位測(cè)觀察物在同一方向上的實(shí)際長(zhǎng)度或大小(二)徒手繪圖法的步驟3．用較淡的鉛筆(2H或4H)，按照實(shí)物或顯微圖像的比例關(guān)系和立體投影畫(huà)出輪4．經(jīng)反復(fù)對(duì)照修改后，再用較濃的鉛筆(B或2B)繪出修改圖。(三)墨線繪圖法的附圖需制版后鉛印，不能用鉛筆圖，必須用墨線圖，故墨線圖實(shí)際同，但對(duì)畫(huà)線條和打點(diǎn)的要求更高。若有個(gè)別線條畫(huà)錯(cuò)，可先用銳利畫(huà)墨線圖的具體步驟：①用鉛筆在白紙上畫(huà)好草圖。②在玻璃板上(或下有白