自身抗體風(fēng)濕病中的應(yīng)用

自身抗體風(fēng)濕病中的應(yīng)用第1頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月狼瘡細(xì)胞（1948，Hargrave)第2頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月一、概述自身抗體的定義：以自身組織成分為靶抗原而出現(xiàn)的相應(yīng)抗體第3頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月風(fēng)濕免疫病自身抗體抗核抗體譜抗磷脂抗體類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗體肌炎抗體血管炎抗體自身免疫性肝病抗體第4頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月自身抗體在自身免疫病中的意義1、是自身免疫病的標(biāo)記2、有助于彌漫性結(jié)締組織?。–TD）的診斷和鑒別診斷3、判斷疾病的活動(dòng)性4、預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后第5頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月二、自身抗體的檢測(cè)方法

1、間接免疫熒光法（IFT）2、ELISA3、免疫印跡法4、放射免疫法5、免疫雙擴(kuò)散第6頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第7頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體（核仁型,Mi-2、PM-SCL、RNAPolymeraseI）第8頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體（核膜型,dsDNA）第9頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核抗體（均質(zhì)型,Histone-DNA）第10頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第11頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月三、常見的自身免疫性疾病的抗體第12頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA譜及其臨床意義定義：是一種對(duì)細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體，因此ANA應(yīng)稱為抗核抗體譜。第13頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月間接免疫熒光法（IFT）: HEp-2細(xì)胞靈長(zhǎng)類肝臟冰凍組織切片

1、完整的抗原譜(細(xì)胞核、細(xì)胞漿)

2、ANA檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，具有最高的敏感性和特異性

3、質(zhì)量控制容易

4、除ANA外，還可獲得一些對(duì)臨床醫(yī)生有用的其他信息(如ANCA)ANA的檢測(cè)方法第14頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA的檢測(cè)方法ELISA:用高度純化的抗原來篩查ANAs

1、抗原譜比IIF窄

2、對(duì)所用的靶抗原具有很高的敏感性和特異性

3、操作簡(jiǎn)便、快速第15頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA分類——抗DNA抗體抗DNA抗體：ssDNA/dsDNA抗原：?jiǎn)捂淒NA，變性的DNA(嘌呤和嘧啶堿基)

雙鏈DNA，天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)相關(guān)疾?。簊sDNAdsDNA

SLE80.8%30%

Sj?gren‘s綜合征40.0%硬皮病 44.0%

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎12.3%健康獻(xiàn)血員 6.8%

第16頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA分類——抗非組蛋白抗體

抗ENA抗體：此組抗體不含組蛋白，可以溶于鹽水而被提取檢測(cè)方法：免疫印跡法第17頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗Sm抗體抗原: 與U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA

相關(guān)的6種不同的蛋白分子

(核心蛋白B、B′、D、E、F、G)

相關(guān)疾病:SLE:

5%-30%

第18頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗核糖體蛋白抗體靶抗原: 由3個(gè)蛋白質(zhì)分子組成的核糖體60S亞單位：

P0、P1、P2(38、16、15kD)在碳末端具有相同的免疫反應(yīng)性表位

相關(guān)疾病:SLE: 5%-15%

第19頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗SS-A抗體靶抗原: 與Y1、Y3、Y4或Y5型RNA相關(guān)的2種蛋白分子(52kDa和60kDa)

相關(guān)疾病:干燥綜合征: 40%-95%

SLE: 34.7%第20頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗SS-B抗體靶抗原: 與小分子RNA(U6-RNA、tRNA前體)結(jié)合的磷蛋白(48kDa)相關(guān)疾病: 干燥綜合征：40%-95%

SLE:10%-20%

第21頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗U1-nRNP抗體靶抗原: 三種與U1-nRNA相關(guān)的蛋白

(70KD、A和C蛋白)

相關(guān)疾病: MCTD: 95%-100%

SLE: 15%-40%

第22頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗Scl-70抗體靶抗原:DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(100kDa)相關(guān)疾病:硬皮病:79.7%

(25%-75%)

第23頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗ENA抗體抗J0-1抗體靶抗原: 組氨酰-tRNA合成酶(50kDa)，

細(xì)胞漿磷蛋白 相關(guān)疾病:多肌炎/皮肌炎:25%-35%

伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎: 70%

第24頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA分類——抗非組蛋白抗體2、抗著絲點(diǎn)抗體

靶抗原:著絲點(diǎn)中的4種蛋白分子：A-(17kDa)、B-(80kDa)、C-(140B-(80kDa)、C-(140kDa)、D-蛋白(50kDa)

主要的靶抗原是著絲點(diǎn)蛋白B

相關(guān)疾病:硬皮病:18%

局限型(CREST綜合征): 80%-95%

第25頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA分類——抗組蛋白抗體抗原:組蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4

(主要的靶抗原為H1和H2B)

相關(guān)疾病:藥物誘導(dǎo)性LE:100%（標(biāo)志性抗體）SLE:40%-80%

在其他風(fēng)濕病中很少見第26頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月ANA分類——抗核仁抗體靶抗原: 核仁內(nèi)的RNA多聚酶、原纖維和To/Th抗原

相關(guān)疾?。篠Sc4%第27頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月SLE患者特異性自身抗體靶抗原 陽性率(%)ssDNA 70-95dsDNA 30-90組蛋白 40-80U1-nRNP 15-40Sm 5-30SS-A 20-60SS-B 10-20核糖體P蛋白 5-15增殖性細(xì)胞核抗原I(PCNA)3心磷脂，2-糖蛋白120-40Ku5-10抗核小體抗體90

第28頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月多肌炎和皮肌炎抗體譜靶抗原 陽性率(%)ssDNA 40-50Jo-1 25-35PM-Scl(重疊綜合征) 8Mi-2 5Ku(與硬皮病的重疊綜合征) 1-7PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3第29頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月原發(fā)性干燥綜合征抗體譜靶抗原 陽性率(%)SS-A 40-95SS-B 40-95ssDNA 40-95第30頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥抗體譜靶抗原陽性率(%)著絲點(diǎn) 80-95Scl-70 25-75ssDNA 30-60原纖維蛋白 5-10RNA多聚酶 4PM-Scl(重疊綜合征) 3NOR-90(核仁形成區(qū)) 少見Ku(與多肌炎的重疊綜合征) 1-7第31頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月可出現(xiàn)ANA的感染、藥物瘧疾血吸蟲結(jié)核麻風(fēng)沙門氏菌克雷伯菌EB病毒HIV肯定的藥物肼苯噠嗪普魯卡因酰胺異煙肼可能的藥物(近80種）米諾環(huán)素SASPEtanercept,Infliximab第32頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月可出現(xiàn)ANA的肝病慢性活動(dòng)性肝炎原發(fā)性膽汁性肝硬化自身免疫肝炎自身免疫膽管炎可出現(xiàn)ANA的肺病特發(fā)性肺纖維化石棉導(dǎo)致的纖維化原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓可出現(xiàn)ANA的腫瘤白血病黑色素瘤實(shí)體瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、腎癌）淋巴瘤可出現(xiàn)ANA的血液病特發(fā)性血小板減少性紫癜自身免疫性溶血性貧血可出現(xiàn)ANA的內(nèi)分泌病1型糖尿病Grave病Hashimoto甲狀腺炎第33頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月RA自身抗體譜及臨床意義RF 60％RA中出現(xiàn)，量與RA活動(dòng)性及嚴(yán)重性呈正相關(guān)。亦在其它CTD出現(xiàn) 抗CCP 在50％RA中出現(xiàn)（聚角蛋白微絲蛋白）特異性較高AKA（抗角蛋白抗體） 在40％RA陽性APF（抗核周因子） 在52％RA陽性抗RA33 RA陽性率為35％抗Sa 在部分RA陽性第34頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月類風(fēng)濕因子（RF)抗原：變性的IgGFc段意義RA陽性率70%，陽性預(yù)測(cè)值24%。滴度與疾病活動(dòng)平行其他風(fēng)濕病可陽性感染、非感染疾病、正常人可陽性第35頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月非風(fēng)濕病中的RF狀態(tài)RF頻率（%）年齡（>60）5-25%感染細(xì)菌性心內(nèi)膜炎25-50乙型或丙型肝炎20-75結(jié)核8梅毒13寄生蟲病20-90麻風(fēng)5-58病毒感染15-65肺病結(jié)節(jié)病3-33肺間質(zhì)纖維化10-50矽肺30-50石棉肺30各種各樣疾病原發(fā)性膽汁性肝硬化45-70惡性腫瘤5-25多次免疫接種后10-15第36頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗核周因子-(APF)靶抗原位于人頰粘膜細(xì)胞的核周顆粒中間接免疫熒光法檢測(cè)對(duì)RA診斷的特異性高達(dá)90%以上APF陽性與病情相關(guān)，往往提示預(yù)后欠佳（尤其對(duì)RF陰性的患者）第37頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗角蛋白抗體-（AKA）取6周齡雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片為底物間接免疫熒光法以典型的角質(zhì)層板層狀、線狀沉積的熒光為陽性對(duì)RA診斷的敏感性44.13%、特異性89%與RA的病情嚴(yán)重程度相關(guān),提示預(yù)后不良第38頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第39頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗Sa抗

體

新鮮胎盤提取免疫印跡法分子量為50和/或55KD部位出現(xiàn)條帶者為陽性敏感性36.7%、特異性91.6%HLA-DR4相關(guān)是慢性、嚴(yán)重RA的早期標(biāo)記RA的滑液中也有高濃度的抗Sa抗檢出，提示在滑膜可能發(fā)生原位免疫反應(yīng)第40頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗RA33/36抗體

從Hela細(xì)胞或Ehrilich瘤細(xì)胞核中提取免疫印跡法分子量33或36KD區(qū)帶出現(xiàn)陽性者為陽性敏感性35.8%、特異性99.6%第41頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體

1998年證實(shí)抗filaggrin相關(guān)抗體識(shí)別的主要抗原決定簇成分是瓜氨酸2000年合成環(huán)瓜氨酸肽（CCP），并將抗CCP抗體用于RA檢測(cè)ELISA法檢測(cè)對(duì)RA診斷高度敏感和特異陽性者骨破壞較陰性者嚴(yán)重對(duì)RA的早期診斷和預(yù)后評(píng)估都很有意義第42頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗肽酰基精氨酸脫亞氨酶(PADI4)抗體RA抗PADI4抗體陽性率為47%,抗PADI4抗體對(duì)RA診斷的敏感性為43%,特異性為92%。RF陰性患者PADI4抗體陽性50%;AKA陰性的患者PADI4抗體陽性43%;抗CCP抗體陰性的患者抗PADI4抗體陽性60%。第43頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗突變型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗體136例RA患者抗MCV抗體敏感性和特異性分別為95.6%和80.8%?？筂CV抗體與抗CCP抗體、AKA和RF的重疊陽性率分別為91.9%、52.8%和76.5%。第44頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月血管炎相關(guān)抗體cANCA靶抗原：PR-3(蛋白酶3〕pANCA靶抗原：MPO(髓過氧化酶)彈性蛋白酶乳鐵蛋白

Wegener肉芽腫其量指示病情活動(dòng)其它血管炎及炎性腸病第45頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗絲氨酸蛋白酶（PR3)抗體抗原：絲氨酸蛋白酶（PR3）意義主要出現(xiàn)在Wegner肉芽腫和顯微鏡下多動(dòng)脈炎在Wegner肉芽腫、顯微鏡下多動(dòng)脈炎cANCA持續(xù)高滴度或滴度升高常與疾病復(fù)發(fā)相關(guān)(2/3)。第46頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月針對(duì)蛋白酶3的cANCA的意義疾病頻率（%）Wegener’s肉芽腫90顯微鏡下多動(dòng)脈炎50結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎5-10變應(yīng)性肉芽腫性血管炎10過敏性血管炎R(shí)are光敏性紫癜RareIgA腎病Rare感染后腎小球腎炎R(shí)are系統(tǒng)性紅斑狼瘡Rare川崎病+對(duì)照±第47頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗髓過氧化物酶（MPO）抗體抗原：髓過氧化物酶（MPO）意義可出現(xiàn)于多種血管炎性疾病。也可見于SLE、藥物等第48頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月針對(duì)MPO的pANCA的意義疾病頻率（%）顯微鏡下多動(dòng)脈炎50-70特發(fā)性壞死性腎小球腎炎50-85變應(yīng)性肉芽腫性血管炎70-85Goodpasture綜合征10-30Wegener肉芽腫5-10結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎+多血管炎重疊+系統(tǒng)性紅斑狼瘡+肼苯噠嗪誘導(dǎo)的腎炎+川崎病+第49頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月cANCA(胞漿型,絲氨酸蛋白酶)第50頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月pANCA(核周型）1、髓過氧化物酶2、彈力酶3、組織蛋白酶G4、乳鐵蛋白5、溶酶體6、細(xì)菌增透蛋白7、Azurocidin8、……第51頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月原發(fā)性膽汁性肝硬化抗體譜靶抗原 陽性率(%)AMAM2 85-95AMAM4 40-60AMAM9 35Sp-100(核點(diǎn)) 30肌動(dòng)蛋白 10-20第52頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月AMAM2靶抗原:由3種不同的乙?；D(zhuǎn)移酶組成的多酶復(fù)合物：

-丙酮酸脫氫酶(74kDa)

-2-酮酸脫氫酶(50kDa)

-2-酮戊二酸脫氫酶(50kDa)

與丙酮酸脫氫酶復(fù)合物相關(guān)的蛋白X(52kDa)

相關(guān)疾病: PBC: 85%-95% 第53頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月自身免疫性肝炎抗體譜

靶抗原 陽性率(%)肝特異性蛋白(LSP) 50-100肝細(xì)胞膜抗原(LMA) 35-100唾液酸糖蛋白受體 80-90肌動(dòng)蛋白 40-90ANA 30-40核膜 ?SLA/LP 15-30肝腎微粒體(LKM-1) 7LC-1 ?第54頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗磷脂抗體(APA)APA定義：是一大類針對(duì)各種負(fù)電荷磷脂一蛋白復(fù)合