口岸松材線蟲疫情監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

口岸松材線蟲疫情監(jiān)測技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了口岸松材線蟲疫情監(jiān)測方法和技術(shù)，明確了監(jiān)測抽樣、實(shí)驗(yàn)室檢測以及疫情管理等要求。本文件適用于口岸進(jìn)出境松木及其制品、木質(zhì)包裝材料、松材線蟲寄主繁殖材料以及監(jiān)管場所誘捕的媒介天牛是否攜帶松材線蟲的疫情監(jiān)測。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T23476松材線蟲病檢疫技術(shù)規(guī)程GB/T23478松材線蟲普查監(jiān)測技術(shù)規(guī)程GB/T35342松材線蟲分子檢測鑒定技術(shù)規(guī)程SN/T1132松材線蟲檢疫鑒定方法SN/T1724進(jìn)境針葉樹原木、木制品和木質(zhì)包裝材料中松材線蟲的檢疫操作規(guī)程SN/T4350旅客攜帶物和郵寄物檢疫鑒定和處理程序術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。松材線蟲pinewoodnematode學(xué)名：Bursaphelenchusxylophilus（Steiner&Buhrer）Nickle。一種植物寄生線蟲，屬于線蟲門（Nematoda）、側(cè)尾腺綱（Secernentea）、滑刃目（Aphelenchida）、滑刃總科（Aphelenchoidoidea）、滑刃科（Aphelenchoididae）、傘真滑刃亞科（Bursaphelenchinae）、傘滑刃線蟲屬（Bursaphelenchus），能引起松樹萎蔫病，是針葉樹木上最重要的病原生物之一。媒介天牛vectorbeetle在自然條件下，松材線蟲需依靠墨天牛屬（Monochamus）的天牛實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)距離傳播，可傳播松材線蟲的天牛稱之為媒介天牛。松墨天牛MonochamusalternatusHope，1843又名松褐天牛、松天牛，屬于天?？疲–erambycidae）、墨天牛屬（Monochamus），是為害松樹的一種蛀干性昆蟲，為傳播松材線蟲的主要媒介天牛。木材wood帶皮或不帶皮的原木、鋸木、木板、木片等。原木rawwoods未經(jīng)過干燥、化學(xué)防腐劑等處理，并未永久改變其特性的木材。松木及其制品pinewoodandwoodenware指松科木材和由松科木材為原料制作的產(chǎn)品，包括松木木質(zhì)包裝材料。經(jīng)人工合成或經(jīng)加熱、加壓等深度加工的木質(zhì)材料（如膠合板、纖維板等）除外。木質(zhì)包裝材料woodpackingmaterials用于承載、包裝、鋪墊、支撐、加固貨物的木質(zhì)材料，如木板箱、木條箱、木托盤、木框、木桶、木軸、木楔、墊木、枕木、襯木等。疫木diseasedwood感染松材線蟲病的寄主植物及其制品，主要為松屬（Pinus）植物及其制品。藍(lán)變blue-stain由于松材線蟲為害常伴有藍(lán)變菌（或青變菌）的存在而導(dǎo)致木材變?yōu)樗{(lán)灰色，是判斷松材線蟲監(jiān)測抽樣的一個(gè)輔助而非必要依據(jù)。海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所customssupervisionworkplace是指由企業(yè)負(fù)責(zé)經(jīng)營管理，供進(jìn)出境運(yùn)輸工具或者境內(nèi)承運(yùn)海關(guān)監(jiān)管貨物的運(yùn)輸工具進(jìn)出、?？浚瑥氖潞ｊP(guān)監(jiān)管貨物的進(jìn)出、裝卸、儲(chǔ)存、集拼、暫時(shí)存放等有關(guān)經(jīng)營活動(dòng)，符合《海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所設(shè)置規(guī)范》，辦理相關(guān)海關(guān)手續(xù)的場所。集中作業(yè)場地customscentralizedoperationsite是指從事海關(guān)監(jiān)管貨物的進(jìn)出、裝卸、儲(chǔ)存、集拼、暫時(shí)存放等有關(guān)經(jīng)營活動(dòng)，基本符合《海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）設(shè)置規(guī)范》，有一定環(huán)境條件或檢驗(yàn)、檢疫專業(yè)要求，因經(jīng)營主體、屬性等因素不具備“海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所”管理?xiàng)l件，辦理相關(guān)海關(guān)手續(xù)的作業(yè)場地。海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）customssupervisionworkplace（site）海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）劃分為監(jiān)管作業(yè)場所和集中作業(yè)場地。監(jiān)管作業(yè)場所包括水路運(yùn)輸類海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所、公路運(yùn)輸類海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所、航空運(yùn)輸類海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所、鐵路運(yùn)輸類海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所、快遞類海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所等；集中作業(yè)場地包括旅客通關(guān)作業(yè)場地、郵檢作業(yè)場地等。海關(guān)指定監(jiān)管場地customsdesignatedsupervisionsite是指符合《海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）的設(shè)置規(guī)范》，滿足動(dòng)植物疫病疫情防控需要，對(duì)特定進(jìn)境高風(fēng)險(xiǎn)動(dòng)植物及其產(chǎn)品實(shí)施查驗(yàn)、檢驗(yàn)、檢疫的監(jiān)管作業(yè)場地。海關(guān)監(jiān)管貨物cargoundercustomssupervision是指所有進(jìn)出境貨物，包括海關(guān)監(jiān)管時(shí)限內(nèi)的進(jìn)出口貨物，過境貨物、轉(zhuǎn)運(yùn)貨物、通運(yùn)貨物，特定減免稅貨物，以及暫時(shí)進(jìn)出口貨物、保稅貨物和其他尚未辦結(jié)海關(guān)手續(xù)的進(jìn)出境貨物。誘捕器監(jiān)測trapmonitoring利用人工合成引誘劑來捕獲松墨天牛，并檢查其體內(nèi)、體表是否攜帶松材線蟲的一種監(jiān)測方法。松墨天牛引誘劑pinesawyerattractant由萜烯類等特異性植物源成分組成的對(duì)松墨天牛成蟲具有引誘活性的揮發(fā)性化合物，需與松墨天牛誘捕器配合使用。監(jiān)測范圍及內(nèi)容監(jiān)測范圍海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）及其周邊。根據(jù)進(jìn)境木材、種苗的類別和口岸地理特征設(shè)置監(jiān)測區(qū)域，重點(diǎn)在進(jìn)境木材指定監(jiān)管場地和進(jìn)境種苗指定監(jiān)管場地開展監(jiān)測。監(jiān)測內(nèi)容依據(jù)全國海關(guān)各口岸松材線蟲疫情截獲數(shù)據(jù)，結(jié)合本關(guān)區(qū)業(yè)務(wù)實(shí)際，科學(xué)制定監(jiān)測計(jì)劃及具體實(shí)施方案，確保疫情監(jiān)測不留死角，對(duì)應(yīng)施監(jiān)測的植物及其產(chǎn)品開展松材線蟲疫情監(jiān)測，即在海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所重點(diǎn)開展松木及其制品是否攜帶松材線蟲的監(jiān)測；在海關(guān)集中作業(yè)場地開展進(jìn)境郵寄物及旅客攜帶物是否攜帶松材線蟲的監(jiān)測；在海關(guān)監(jiān)管作業(yè)場所（場地）及其周邊開展誘捕器監(jiān)測，對(duì)誘捕的媒介天牛是否攜帶松材線蟲實(shí)施監(jiān)測，周邊有林地的按照GB/T23478-2009中4.9.2執(zhí)行。重點(diǎn)關(guān)注來自美國、加拿大、墨西哥、日本、韓國、朝鮮、葡萄牙、西班牙、印度尼西亞、南非以及中國XX、香港等國家或地區(qū)的松木及其制品、郵寄物及旅客攜帶物。應(yīng)施監(jiān)測的植物及其產(chǎn)品為：來自國內(nèi)外疫情發(fā)生區(qū)的松屬、雪松屬、冷杉屬、云杉屬和落葉松屬等松材線蟲寄主植物的苗木、接X、插條、盆景等生長繁殖材料；來自國內(nèi)外疫情發(fā)生區(qū)的上述植物的木材、枝椏、根樁、木片以及它們的制品；帶有松材線蟲及其傳播媒介昆蟲活體的貨物、包裝材料、鋪墊材料、運(yùn)輸工具、郵寄物及旅客攜帶物。松材線蟲的寄主植物范圍參見GB/T23476-2009中附錄A。監(jiān)測方法抽樣監(jiān)測觀察木材材質(zhì)是否干燥，木質(zhì)部是否有藍(lán)變，有無媒介昆蟲棲居的痕跡，如侵入孔、蛀道、蛹室等。重點(diǎn)抽取材質(zhì)干燥無松脂香味、有藍(lán)變、有媒介昆蟲棲居痕跡的松木或其加工制品，若無上述特征時(shí)，可隨機(jī)抽樣。針對(duì)貨物的抽樣監(jiān)測，需結(jié)合單證查驗(yàn)，即核實(shí)產(chǎn)地、品種、數(shù)量、證書等信息否與貨物相符合，抽樣及采樣方法按照SN/T1724-2006中6.2和6.3執(zhí)行。針對(duì)郵寄物及旅客攜帶物的抽樣監(jiān)測，按照SN/T4350-2015中第5章和第6章內(nèi)容，對(duì)可能攜帶松材線蟲的所有寄主植物及其繁殖材料、松木及其制品進(jìn)行取樣監(jiān)測，不宜現(xiàn)場取樣的可將其整體帶回送實(shí)驗(yàn)室檢測。樣品標(biāo)識(shí)信息應(yīng)完整、清晰，確?？伤菰?、可追查。誘捕器監(jiān)測誘捕器設(shè)置重點(diǎn)在口岸木材及木制品裝卸地和木質(zhì)包裝集散點(diǎn)等重要疫情監(jiān)測區(qū)域進(jìn)行布點(diǎn)，每個(gè)誘捕器之間相距50m～100m。誘捕時(shí)間誘捕時(shí)間一般為每年的4月至11月，即松墨天牛成蟲羽化初期開始，直至當(dāng)年成蟲羽化完畢為宜。誘捕器安裝及維護(hù)誘捕器應(yīng)安裝在空氣流通較好的地方，懸空掛置，誘捕器下端離地面1.5m～2.0m。誘捕器上下兩端應(yīng)用鐵絲綁牢并固定，引誘劑使用前應(yīng)充分搖勻，添加或更換引誘劑，應(yīng)注意防撒漏、防跌落，以免影響誘捕效果。誘捕器應(yīng)及時(shí)維護(hù)，結(jié)合查蟲定期巡查誘捕器，清洗集蟲罐，補(bǔ)充水淹式集蟲罐中的清水。風(fēng)雨過后也要及時(shí)檢查誘捕器，確保誘捕器處于良好的誘蟲狀態(tài)。定期添加誘劑，每隔10d～15d添加1次，并準(zhǔn)確填寫相關(guān)維護(hù)記錄。媒介天牛的收集每隔3d～5d檢查一次，及時(shí)收集并清理誘捕器中的媒介天牛，詳細(xì)記錄相關(guān)信息并在當(dāng)日送實(shí)驗(yàn)室檢測。安全事項(xiàng)松墨天牛引誘劑屬于易燃品，在運(yùn)輸、儲(chǔ)存和使用過程中，應(yīng)遵守國家有關(guān)易燃品安全管理的有關(guān)規(guī)定和安全使用方法。實(shí)驗(yàn)室檢測松材線蟲的分離采用貝爾曼漏斗法或淺盤法或改進(jìn)型線蟲分離器法分離線蟲，具體操作按照GB/T23476-2009中附錄C執(zhí)行。分離時(shí)室內(nèi)溫度應(yīng)保持在20℃～30℃之間，或置于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行分離，分離時(shí)間一般需12h～24h以上。將線蟲分離液收集到試管或者燒杯中，通過自然沉淀或者使用離心機(jī)處理后進(jìn)行鏡檢。媒介天牛樣品松材線蟲的分離，可將天牛剪碎后直接分離或可采用局部分離線蟲的方法分離線蟲，即將天牛的觸角端部或胸部腿節(jié)取下，搗碎后用漏斗法或淺盤法分離線蟲，也可直接浸泡于加水的表面皿或培養(yǎng)皿中，2h后在體視顯微鏡下直接觀察是否有線蟲。鏡檢在體視顯微鏡下仔細(xì)觀察線蟲分離液中是否有線蟲。若發(fā)現(xiàn)線蟲，用挑針挑取線蟲并轉(zhuǎn)移至滴加少量水（30μL～40μL）的載玻片上或用微量移液器吸取線蟲至載玻片上，載玻片滴加水的部位在酒精燈火焰上方勻速經(jīng)過8～10次左右，冷卻5s后蓋上蓋玻片制成臨時(shí)水玻片，置于顯微鏡下觀察。若分離的線蟲均為幼蟲或成蟲數(shù)量極少影響后續(xù)鑒定時(shí)，需培養(yǎng)至成蟲后進(jìn)行鑒定。半永久標(biāo)本及永久標(biāo)本的制作按照SN/T1132-2002中附錄C.2相關(guān)內(nèi)容執(zhí)行。線蟲培養(yǎng)按照SN/T1724-2006中附錄B執(zhí)行。松材線蟲檢測鑒定形態(tài)學(xué)鑒定按照SN/T1132-2002中第8章內(nèi)容執(zhí)行。分子生物學(xué)檢測普通PCR檢測按照GB/T23476-2009中7.5及附錄G相關(guān)內(nèi)容執(zhí)行。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測按照GB/T35342-2017中附錄C及5.1相關(guān)內(nèi)容執(zhí)行。結(jié)果判定及復(fù)核結(jié)果判定采用形態(tài)學(xué)方法鑒定的，其結(jié)果判定按照SN/T1132-2002中第9章內(nèi)容執(zhí)行。采用分子生物學(xué)方法檢測的，普通PCR檢測結(jié)果判定按照按照GB/T23476-2009中附錄G.3執(zhí)行，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測判定按照GB/T35342-2017中5.1.5執(zhí)行。結(jié)果復(fù)核對(duì)第一次截獲松材線蟲的結(jié)果，需經(jīng)過專家復(fù)核或相關(guān)專業(yè)檢測實(shí)驗(yàn)室復(fù)核。其中相關(guān)專業(yè)檢測實(shí)驗(yàn)室是指具備相應(yīng)檢測技術(shù)能力的實(shí)驗(yàn)室，即實(shí)驗(yàn)室獲得CNAS認(rèn)可的有效能力范圍覆蓋松材線蟲檢測項(xiàng)目。提供復(fù)核的材料為具松材線蟲雌成蟲、雄成蟲的線蟲分離液、臨時(shí)玻片、照片或影像材料等。樣品的保存及處理樣品應(yīng)及時(shí)分離鑒定，若需要保存，應(yīng)在4℃條件下保存。如木屑、木片或木條等樣品，可放入塑料袋內(nèi)，扎緊袋口，在袋上扎幾個(gè)小孔，放入4℃冰箱；木段、圓盤可直接裹上幾層濕紗布后放入4℃冰箱保存。若需保存時(shí)間較長，樣品需經(jīng)常噴水保濕。樣品保存應(yīng)做好登記工作，保存期不少于2個(gè)月。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)含有松材線蟲的樣品，保存期不少于6個(gè)月，以備復(fù)查、談判或仲裁。對(duì)不宜保存的樣品，應(yīng)及