冰凍切片和石蠟切片各自的優(yōu)劣之處

1、1、冰凍切片（ frozen section ）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬 度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用 于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類(lèi)較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法， 二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時(shí)代的 變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認(rèn)為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰 了。當(dāng)然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。編輯本段 冰凍切片的應(yīng)用（1）在手術(shù)進(jìn)行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷，原定手術(shù)方案不相 符合，或者懷疑時(shí)，需要病理確定。（2）了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以

2、利于確 定是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。（3）對(duì)于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠， 上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。（4）在做剖腹探查時(shí)所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。（ 5）顯示組織中的脂肪和脂類(lèi)物質(zhì)， 這常見(jiàn)于某些病例如脂肪瘤及肉瘤， 某些科研組織等。（ 6）某些酶的顯示如 ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。（ 7）神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如： Eager 氏法，Marchi 氏法，Cajal 氏法， Hortega 氏法和 Holzer 氏法等。（8）對(duì)某些物質(zhì)所進(jìn)行的免疫熒光的研究。編輯本段 冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以 Shandon As 6

3、20 E 型恒溫箱冷凍切片機(jī)為例，該機(jī)的箱面上有電子控 制板，裝有即時(shí)冷凍鍵和除霜鍵，啟動(dòng)即時(shí)冷凍鍵，機(jī)器馬上進(jìn)行工作狀態(tài)， 并可持續(xù) 10mins 。啟動(dòng)即時(shí)除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除 掉，并可持續(xù) 15mins 。有照明鍵一個(gè)，啟動(dòng)該鍵可照明工作間，有利工作及 觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個(gè)，當(dāng)進(jìn)行一周的工作或者一天的工作 后，啟動(dòng)該鍵，可對(duì)工作間進(jìn)行消毒。當(dāng)每天工作完畢時(shí)，可啟動(dòng)密鎖鍵， 鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個(gè)按鍵，兩個(gè)為快速自動(dòng)進(jìn)退鍵， 兩個(gè)為微小進(jìn)退鍵，還有一個(gè)手動(dòng)旋鈕，調(diào)節(jié)修組織塊時(shí)的進(jìn)退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺(tái)，溫度可達(dá) - 60左右，冷凍箱的中

4、間為一臺(tái)切片 機(jī)，工作間的溫度在 0- 30間可任意調(diào)節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示出來(lái)。操作方法及步驟 取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費(fèi)時(shí)，大者難 以切完整，最好為 24242mm。 取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺(tái)上， 冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個(gè)小臺(tái)后， 再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。 將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)持承器上，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋 鈕，將組織修平。 調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切， 纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在510um 間。 調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上

5、，這就要求操 作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時(shí)，切出的切片 能在第一時(shí)間順利地通過(guò)刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。 這時(shí)便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。 應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根 據(jù)不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋 巴結(jié)時(shí)，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，在 -10- - 15左右，切甲狀腺、脾、 腎、肌肉等組織時(shí)， 可調(diào)在 -15 20左右， 切帶脂肪的組織時(shí)， 應(yīng)調(diào)至 -25 左右， 切含大量的脂肪時(shí)，應(yīng)調(diào)至 -30。冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng) 防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需

6、經(jīng)常用毛筆挑除切 片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)?這個(gè)地方是切片通過(guò)和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將 會(huì)破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。 多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí)，可各自放于不同的支承器上，于 冷凍臺(tái)上凍起來(lái)，然后依據(jù)不同的編號(hào)，依序切片，這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì) 亂。 放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢(shì)來(lái)放置，所謂“砍柴看柴 勢(shì)”，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。 組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達(dá)到固定 前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭(zhēng)取時(shí)間， 二是固定了的組織，

7、反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做 冰凍切片，就會(huì)出現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中 的水份也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水份就存留于組織中，形 成了冰晶。 當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過(guò)度時(shí)，可將冰凍的組織連同支承器取出來(lái)， 在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊， 以此來(lái)軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn)。 用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因?yàn)?當(dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng) 溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別， 當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子彼

8、此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與 載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來(lái)附貼切片，由于溫度相 同，沒(méi)有發(fā)生上述的現(xiàn)象。冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定 1 分鐘后即 可染色。以往，為了防止切片脫落，當(dāng)切片附貼于載玻片后，即用電吹風(fēng)吹 干后再固定。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)比認(rèn)為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片，強(qiáng)熱作用后， 蛋白發(fā)生變性，核內(nèi)含有的物質(zhì)由于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨 不出核內(nèi)的各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定 液固定，這樣可以使切片中細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒(méi)有任何變化的情況下被固 定起來(lái)，核染色質(zhì)清晰，核仁明顯，其他

9、物質(zhì)都完好保存。方法： 切片固定 30 秒1 分鐘。 水洗。 染蘇木素 3 5 分鐘。 分化。 于堿水中返藍(lán) 20 秒。 伊紅染色 10 20 秒。 脫水，透明，中性樹(shù)膠封固。冰凍組織 12 分鐘，切片 1分鐘，固定 1 分鐘，染色共五分鐘。總共在10 分鐘內(nèi)完成快速制片過(guò)程，結(jié)果與 石蠟切片 不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化 碳冰凍切片法，半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前 來(lái)說(shuō)已很少使用，因此在這里不作闡述。編輯本段 優(yōu)缺點(diǎn)（一）優(yōu)點(diǎn)：1簡(jiǎn)便，可以不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切 片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2快速，用

10、時(shí)短。3組織變化不大。4能很好保存脂肪，類(lèi)脂等成分。5能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類(lèi)，特別是對(duì)于那些對(duì)有機(jī)溶 劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。（二）缺點(diǎn)：1不容易做連續(xù)切片。2切取的組織不能過(guò)大，組織過(guò)大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3不容易制作較薄的切片。4組織塊在凍結(jié)過(guò)程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原 物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。編輯本段 冰凍切片操作中的注意事項(xiàng)1）新鮮的組織制備組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有： CO2 氣（ 78） 丙酮干冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷（ 80） 液

11、 氮（ 190） 液氮冷卻的丙烷（ 19）。液氮適用于組織化學(xué)，較安 全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。（2）固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4、 24 小時(shí)的甲醛固定能很好地保存酶類(lèi)。但對(duì)許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫， 冷甲醛短時(shí)間固定（ 10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4緩沖戊二醛（ 25%戊二醛16ml；0.1M 二甲胂酸（ pH7） 84ml；蔗糖 8g）固定較好。這些固定液主要 用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。（3）恒冷箱溫度一般在冷凍后 10 分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在1520切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度， Pearse 及 Bancroft 的經(jīng)驗(yàn)如下：組織刀溫度組織溫度 恒冷箱溫度肝 -18 -10 -5腎 -15 -8 -5皮膚 -35 -10 -5腦 -18 -5 -5固定組織一般高 3-5 度（4）切片機(jī)的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過(guò)?？咕戆迓愿?/p>