白血病和核型分析培訓(xùn)課件

1、白血病和核型分析遺傳性血液病血液與遺傳的關(guān)系是十分密切的，目前發(fā)現(xiàn)的遺傳性血液病已經(jīng)在百種以上，造血和淋巴組織系腫瘤中幾乎都是屬于染色體病和體細胞遺傳病。在體細胞水平上遺傳物質(zhì)的 異常能擾亂細胞的正常生長發(fā)育及分化調(diào)節(jié)，從而誘發(fā)腫瘤。在白血病中，多數(shù)是由染色體易位導(dǎo)致原癌基因的重排。原癌基因重排可以導(dǎo)致癌基因的過量表達而致病，也可由于原癌基因與易位處的某一基因形成融合性基因而發(fā)生白血病。2白血病和核型分析 發(fā)病情況我國白血病發(fā)病率發(fā)病率：1-4/10萬，低于歐美。 ANLL 1.62/10萬，ALL 0.69/10萬，CML 0.36/10萬，CLL 0.05/10萬，急性比慢性多，成人急非淋

2、多見，兒童急淋多見，歐美慢淋多見。易發(fā)人群-兒童及35歲以下成人。死亡率：惡性腫瘤中 6位（男性） 8位（女性）。3白血病和核型分析白血病分類分形據(jù)白血病細胞的成熟程度和自然病程，將白血病分為急性白血?。ˋL）和慢性白血?。–L）兩大類。 根據(jù)主要受累的細胞系列將：AL分為：急性淋巴細胞白血病（ALL）和急性非淋巴細胞白血?。ˋNLL） 或急性髓性白血病（AML）CL分為：慢性粒細胞白血?。–ML）、慢性淋巴細胞白血病（CML）及少見類型的白血病，如毛細胞白血病（HCL）、幼淋巴細胞白血病（pLL）等。4白血病和核型分析 隨著血液病在發(fā)病機理、診斷方法以及治療手段等方面的進展，急性白血病的診斷

3、技術(shù)也有很大發(fā)展，急性白血病的分型基本上分三個階段。5白血病和核型分析 急性白血病分型的三個發(fā)展階段FAB分型 1976（M）MIC分型 1986（MIC）WHO分型 2001（MICM）6白血病和核型分析 70年代（1976. Benne等）法、美、英7位學(xué)者 提出FAB分型，其后多次加以修改補充 70年代中用單克隆抗體發(fā)現(xiàn)造血細胞表面抗原，對AL進行 免疫表型分析。 C hromosome分析90%AL有核型異常。 80年代提出MIC分型 (M：morphology, I: immunology, C:Cytogenetics) 近年 MICM（MIC+分子生物學(xué)）分型7白血病和核型分析急

4、性白血病 （AL）急性白血病是：造血干細胞的惡性克隆性疾病，發(fā)病的骨髓中異常的原始細胞及幼稚細胞（白血病細胞）大量增殖并廣泛浸潤肝、脾、淋巴結(jié)等各種臟器，抑制正常造血。主要表現(xiàn)為貧血、出血、感染和浸潤等征象。 分類 國際常用的法美英（FAB）分類將AL分為ALL及ANLL（或 急性隨性隨性白血病AML）兩大類。這兩大類再分成多種亞型。（一）急性淋巴細胞白血?。ˋLL）分型：FAB分型：ALL_L1原始淋巴細胞以胞體?。ㄖ睆?2m）而規(guī)則為特點，ALL_L2原始淋巴細胞則以大小不一，（直徑12m）和胞核形狀不規(guī)則見長，ALL_L3原始和幼淋巴細胞以大細胞為主，大小較一致，細胞內(nèi)有明顯空泡，胞漿嗜

5、堿性，染色深。因與EB病毒感染有關(guān)故又稱Burkitt細胞，在免疫表型上則為成熟型B細胞8白血病和核型分析 另外，由于形態(tài)學(xué)分型為基礎(chǔ)的FAB分型具有一定的局限性，如：T、B淋巴細胞不能區(qū)分，沒有沒有提供染色體異常和基因重排等對發(fā)病機制、治療選擇和對預(yù)后判斷重要意義的信息。因此除形態(tài)學(xué)外還應(yīng)做免疫學(xué)分型。急性淋巴細胞白血?。ǎ┑腗IC分型：B系1、早前B細胞型ALL（早前B-ALL）2、前B細胞型（前B-ALL）3、普通型ALL（）4、成熟細胞型ALL（B-ALL）T系早前T細胞型ALL（T-ALL）成熟T細胞型ALL（T_ALL）9白血病和核型分析急性髓性白血?。ˋML）的FAB分型AML共

6、分8型如下：M0 急性髓細胞白血病微分化型M1 急性粒細胞白血病未分化型M2 急性粒細胞白血病部分分化型M3 急性早幼粒細胞白血?。ˋPL）M4 急性粒單核細胞白血?。ˋMML）M4Eo除上述M4型的各特點外，嗜酸性粒細胞在NEC5%。M5 急性單核細胞白血?。ˋMoL）M6 紅白血病（EL）M7 急性巨核細胞白血病10白血病和核型分析白血病染色體畸變與非隨機性（一 ）集中傾向性從理論上說，人類的24種染色體（常染色體加X和Y性染色體）以均等機會參與腫瘤的畸變，但現(xiàn)實的研究結(jié)果并非如此。腫瘤染色體畸變常是涉及其中部分的染色體，畸變分布不均，且?guī)в心撤N集中傾向（聚集現(xiàn)象）和 非隨機性Mitelm

7、an曾對1266例一白血病為主的15種腫瘤進行染色體畸變分析，可見腫瘤染色體畸變集中在第1、3、5、7、8、9、14、17、20、21、和22號染色體中，而第1、8和14號染色體則涉及78種腫瘤。在腫瘤染色體重排的研究中，惡性腫瘤染色體重排分布和良性腫瘤染色體畸變均是非隨機性的。11白血病和核型分析（二）地域分布研究地理分布的非隨機性，也可發(fā)現(xiàn)腫瘤染色體畸變發(fā)生率存在地區(qū)異質(zhì)性。CML中，歐洲和日本+17的頻率高于澳大利亞與美國，日本+19的頻率是歐美的3倍；AML中，美國-5和-7的頻率比澳大利亞高2倍，而在日本則為罕見；淋巴瘤14q+發(fā)生的頻率，在歐洲為47%，美國為83%；CLL的t(8

8、；14)在歐洲為 67%,在美國則未見。我國及東南亞較少見。（三）年齡分布11q23重排是嬰兒AML患者最常見的細胞遺傳學(xué)異常，而在成人中的發(fā)病率僅為5%。t(1；22)(p13p13)僅限于兒童M7，尤其是嬰兒患者。-5、-7、i(17q)，完整的第8，11，13和14號染色體的三體，以及復(fù)雜核型均多見于年齡較大的患者。t(15;17)t(8;21)t(6;9)t(6;16)t(3;5)等異常核型則常見于年輕患者。12白血病和核型分析（四）標記染色體分布在腫瘤染色體的檢測中，標記染色體的分布也是非隨機的。5q-常見于難治性貧血和治療相關(guān)AML和MDS6q-在ALL中的發(fā)生率為20%，在淋巴瘤

9、中的發(fā)生率為12%,在CLL、CGL、AML及其他惡性腫瘤中少見。7q-常見于所有的白血病，最常見的為AML14q-主要見于淋巴系腫瘤，少見于其他惡性腫瘤。t(8;14)在B系白血病和淋巴瘤中是特異的，其斷裂位點是專一的。i(17q)為CML急性期的特征，少見于其他腫瘤。20q-主要見于真紅細胞增多癥。22q-則廣泛存在于白血病中。13白血病和核型分析骨髓染色體核型分析腫瘤有超過600種染色體結(jié)構(gòu)異常的核型；絕大多數(shù)血液腫瘤都有非隨機的染色體畸變；血液病: 急性非淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病、骨髓增生異常綜合征：63%淋巴瘤：10%實體腫瘤：27%14白血病和核型分析1

10、。、由于腫瘤細胞在體外的增殖能力較差，中期細胞數(shù)量少；2、腫瘤細胞的染色體核型形態(tài)較差，難分析；3、細胞毒性藥物的治療也會影響骨髓細胞培養(yǎng)成功率，最好是治療前的標本進行培養(yǎng)；MPD中的骨髓抑制治療以及MDS中的支持治療也往往干擾細胞培養(yǎng)的結(jié)果；4、不同培養(yǎng)方式，檢出率不同，如t(15;17)類型的病例，需要進行24-48小時的培養(yǎng)才能得到結(jié)果。技術(shù)難點15白血病和核型分析骨髓細胞染色體分析流程圖骨髓細胞骨髓培養(yǎng)基24h秋水仙胺5h0.5h16白血病和核型分析染色體制備影響因素分析 1、培養(yǎng)基pH、濃度、小牛血清量及培養(yǎng)箱溫度的恒定是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。2、適量秋水仙素、適宜的處理時機和時間,是獲得

11、良好、足夠分裂相的條件。分裂相的多少和染色體形態(tài)及帶型處理良好與否均受其影響。3、低滲處理是獲得分散良好的分裂相的關(guān)鍵步驟 ,低滲過度或不足都會造成染色體形態(tài)不良的結(jié)果。 在低滲處理時期細胞十分嬌嫩 ,并且表面發(fā)黏 ,低滲細胞混勻時 ,吹打要適宜 ,避免細胞破碎及粘團 ,另外不要將細胞吸到吸管上部及離心管上部 ,避免細胞丟失。 17白血病和核型分析4、固定技術(shù)是制備良好分散的染色體的重要步驟。 若染色體分散不良 ,可適當加大冰乙酸含量 ,其同時有改善由于低滲處理不夠或固定不充分所造成的缺陷 ,但過量會造成染色體形態(tài)變化和影響分帶結(jié)果。 染色體形態(tài)不良與加固定液速度有關(guān) ,加第一次固定液快或過快

12、 ,可造成飄帶樣染色體。5、固定液每次使用必須新鮮配制 ,否則將會形成酯類 ,從而影響固定效果。 6、滴片是染色體制備中影響染色體形態(tài)的關(guān)鍵一步。 首先是載玻片要非常干凈,否則會影響染色體的分散和分帶效果。 其次是滴片的距離、制片的方式都會影響染色體分期效果?？酒臏囟?、時間與染色體形態(tài)和分帶有關(guān)。不宜溫度過高和烤片時間過長。18白血病和核型分析常用染色體帶紋顯示方法R-bandingG-bandingG（Giemsa）帶：Giemsa顯帶，經(jīng)典方式，常用于臨床R（Reverse）帶：與G顯帶帶紋相反，可觀察染色體的末端缺失19白血病和核型分析染色體閱片的七大影響因素1、染色體分裂指數(shù)低 2、

13、染色體形態(tài)不理想3、染色體形態(tài)偏長 :4、染色體形態(tài)偏短 5、染色體分帶不良6、染色背景不良7、培養(yǎng)失敗20白血病和核型分析白血病類型的細胞遺傳學(xué)表現(xiàn)由于絕大多數(shù)白血病患者都有非隨機的染色體畸變，它們對于白血病的診斷分型、預(yù)后估計、治療方案的選擇乃至發(fā)病機制的研究都有極為重要的價值。盡管染色體改變的種類繁多，但具有四種基本特征：獲得性：克隆性原發(fā)性和繼發(fā)性平衡性和不平衡性21白血病和核型分析獲得性獲得性：白血病染色體畸變?yōu)楹筇飓@得而非先天遺傳。許多研究表明，如同卵雙生子之一患CGL，ph染色體不見于其健康的孿生同胞；白血病患者所生子女通常缺乏同樣的白血病和核型異常的證據(jù)；白血病患者其染色體畸變

14、通常不見于皮膚和結(jié)締組織。22白血病和核型分析克隆性克隆性：是指來自同一個惡性轉(zhuǎn)化細胞的一群白血病細胞具有相同的染色體異常23白血病和核型分析原發(fā)性和繼發(fā)性原發(fā)性和繼發(fā)性：原發(fā)性畸變是指發(fā)生于疾病早期，與白血病的發(fā)生有關(guān)，和白血病的細胞學(xué)，免疫學(xué)有關(guān)。因而對白血病有分類和標志性的意義并決定其生物學(xué)特征的一類異常。繼發(fā)性畸變：指病程中由于克隆衍化所致的異常，它雖和疾病的發(fā)生無關(guān)，但卻賦予疾病更加惡性的特征24白血病和核型分析平衡性和不平衡性平衡性和不平衡性：平衡性畸變是指白血病患者的染色體異常，常表現(xiàn)為染色體的結(jié)構(gòu)重排，如相互易位或者是倒位，而無DAN含量的改變；非平衡性畸變是指染色體異常常表現(xiàn)

15、為整條染色體或部分的增加或丟失，而有DAN含量的改變。25白血病和核型分析染色體畸變的類型1、數(shù)目畸變(numerical aberration)2、結(jié)構(gòu)畸變(structural aberration)26白血病和核型分析1、染色體數(shù)目異常(1).多倍體(2).非整倍體27白血病和核型分析2、染色體結(jié)構(gòu)異常（1）缺失（2）插入（3）倒位（4）易位（5）重復(fù)（6）環(huán)狀染色體（7）等臂染色體（8）雙著絲粒染色體28白血病和核型分析29白血病和核型分析30白血病和核型分析31白血病和核型分析32白血病和核型分析33白血病和核型分析常見結(jié)構(gòu)異常的符號及含義34白血病和核型分析一、慢性粒細胞白血?。–

16、ML）Ph染色體：ph染色體是9和22號染色體易位后的der(22) t(9;22)(q34;q11) .Ph染色體見于全部的髓系細胞、一部分B系細胞和極少數(shù)的T系細胞。這表明是多能造血干細胞突變所致的克隆性疾病。由于號染色體長臂上的斷裂點是變化的，因而導(dǎo)致種不同大小的染色體：型（最大），斷裂點位于.；型（大），斷裂點位于.；型（中等），斷裂點位于；型（最小），斷裂點位于.其中前兩型少見，后兩型較多見白血病類型的細胞遺傳學(xué)表現(xiàn)35白血病和核型分析 2、Ph易位的類型變異易位隱匿易位典型易位t(9;22)(q34;q11)36白血病和核型分析CML t(9;22)(q34;q11)37白血病和核

17、型分析 CML 不典型Ph易位38白血病和核型分析慢粒慢性期的染色體改變46,t(9;22)t(9;22),-Y;+8;+Ph39白血病和核型分析CML t(9;22),-Y40白血病和核型分析慢粒急變期的染色體改變及其意義20%保持46,t(9;22)不變80%除t(9;22)外出現(xiàn)額外異常，依次為2Ph、+8、i(17q)、+19、+21等少數(shù)病例Ph染色體可和t(8;21)、t(15;17)、inv(16)或inv(3)同時存在額外異常比臨床血液學(xué)急變征象早出現(xiàn)2-4個月無額外異常組 80%對治療有反應(yīng)，MS 5.7個月 部分細胞有額外異常組 50%對治療有反應(yīng)，MS 4.9個月 全部細

18、胞有額外異常組成 30%對治療有反應(yīng),MS 2.5個月41白血病和核型分析慢粒的細胞遺傳學(xué)分型Ph-bcr+50%Ph-bcr-50%Ph-Ph+42白血病和核型分析二、慢淋的染色體變化43白血病和核型分析 +12 1/3染色體異常CLL 數(shù)目異常 +3（6%） +18（5%） B細胞慢淋 14q+ 25%染色體異常CLL t(11;14)(q13;q32) t(14;19)(q32;q13) 結(jié)構(gòu)異常 del(13q) 20%染色體異常CLL i(17q) 6q- T細胞慢淋 inv(14)(q11q32)44白血病和核型分析CLL +1245白血病和核型分析CLL 13q-,i(17q)4

19、6白血病和核型分析CLL +7,t(8;22),11q-,+mar247白血病和核型分析T-CLL inv(14)48白血病和核型分析三、急非淋/急髓白血病的染色體改變?nèi)旧w異常檢出率50%-80%，最高達93%，檢出率高低主要與方法學(xué)有關(guān)，其次與地理環(huán)境及種族的差異有關(guān)原發(fā)性核型異常分兩大類和FAB亞型相關(guān)，特異性染色體重排和FAB亞型 不相關(guān)，大多為數(shù)目異常初診時核型異常在CR時消失，復(fù)發(fā)時再現(xiàn)部分病例由于核型演化產(chǎn)生繼發(fā)性異常49白血病和核型分析ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排1 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征t(8;21)(q22;q22)額外異常:性染色體丟失(

20、73%), 9q-(11%), 7q-或易位(10%), +8 (7.5%)分子水平上有AML/ ETO融合基因15%M2(M4,M1)1.MPO強陽性;2.顯著Auer小體;3.成熟粒細胞胞漿中有橙紅 色顆粒;4.白細胞胞漿中有空泡5.骨髓嗜酸細胞增多;6.CD34、HLA-DR、CD13、CD33、CD19和CD56陽性；7.CR率90%，MS 52個月。50白血病和核型分析AML-M2 t(8;21)(q22;q22),-Y51白血病和核型分析AML-M2 t(8;21),-Y52白血病和核型分析AML-M2 t(8;21),9q-,-Y53白血病和核型分析AML-M2 94,XXXX,

21、+4,+4,t(8;21)X254白血病和核型分析t(8;21)(q22;q22),-Y t(15;17)55白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征t(15;17)(q22;q21)10%M3(90-100%)異常早幼粒細胞增生，Auer小體柴捆狀，DIC，分子水平上PML/RAR融合基因，ATRA有效t(11;17)(q23;q21)t(11;17)(q13;q21)t(5;17)(q32;q21)dup(17)(q21.3q23)PLZF/RAR ATRA無效MuMA/ RAR NPM/ RARSTAT5b/RAR額外異常 +8最常見ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染

22、色體重排256白血病和核型分析AML-M3 t(15;17)57白血病和核型分析AML-M3 +8, t(15;17)58白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征inv(16)(p13q22)t(16;16)(p13;q22)del(16)(q22)ins(16)(q22p13.1 p13.3)額外異常:+8, +228%ANLL(25%M4)M4Eo(100%)骨髓嗜酸細胞異常，數(shù)目增加（5%)或形態(tài)異常（嗜酸細胞中混雜有大而不規(guī)則顆粒，PAS和NCE均強陽性，CR率接近100%，MS5年，治療不強時可發(fā)生腦白分子水平上有CBFB/MYH11融合基因ANLL/AML和FAB亞型相

23、關(guān)的特異性染色體重排359白血病和核型分析 16 倒位 inv(16)(p13q22)60白血病和核型分析AML-M4Eo +8,inv(16)61白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征 t/del(11q23)t(6;11)(q27;q23)t(9;11)(p22;q23)t(10;11)(p12;q23)t(11;17)(q23;q21)t(11;19)(q23;p13.1)6%成人AMLM5(M4)特殊的年齡分布：兒童AL50%，嬰兒AL70%高白細胞計數(shù)、髓外浸潤（肝脾腫大）和皮膚受累多見，預(yù)后不良分子水平上MLL基因和來自伙伴染色體的基因融合如t(9;11)形成MLL/

24、AF9融合基因ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排462白血病和核型分析AML-M5a t(6;11)63白血病和核型分析AML-M5a t(9;11)64白血病和核型分析AML-M5a t(11;19)65白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征 t(8;16) (p11;p13)0.4%M5b白血病細胞吞噬紅細胞，腦白和凝血缺陷多見，CR率50%且為時短促分子水平上為MOZ/ CBP融合基因ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排566白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征 t(6;9) (p23;q34)1%M2(M4)BM中嗜堿細胞1%

25、部分患者有MDS病史，CR率50%分子水平上有DEK/CAN融合基因ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排667白血病和核型分析AML-M2 t(6;9)68白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征t(7;11)(p15;p15)1%M2(M4、M5)Auer小體易見，NAP，CR率72.7%,MS 13個月，主要見于東方人種分子水平上有NUP98/HOXA9融合基因ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排769白血病和核型分析AML-M2 t(7;11)70白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征 t(16;21) (p11;q22)1%M4 或

26、M5病情進展快，CR率低，復(fù)發(fā)率高，分子水平上有FUS/ERG融合基因ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排871白血病和核型分析AML-M4 t(16;21)72白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征3q2126綜合癥inv(3)(q21q26)t(3;3)(q21;q26)t(3)(q26;21q26)額外異常：-7/7q5/5q-1%M1(M2、M4、M7)相對或絕對性血小板增多，骨髓巨核細胞異常生成，常有致變劑接觸或MDS史，治療有抵抗，預(yù)后不良分子水平上使EVI 1(3q26)和ribophorin(3q21)基因并置而致EVI 1基因過度表達ANLL/AM

27、L和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排973白血病和核型分析AML-M1(M2,M4,M7)inv(3)(q21q26)74白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB伴隨的主要特征 t(1;22) (p13;q13)兒童M7 (28%)嬰兒M7(67%)通常預(yù)后不良ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排1075白血病和核型分析 畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征 t/del(12) (p12-13)1%，預(yù)后不良ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排1176白血病和核型分析AML-M2 t(2;12)77白血病和核型分析畸變類型頻率FAB 伴隨的主要特征+40.1%M4(M2) 有致變劑接觸史和骨髓病態(tài)造血改變，部分病人可見雙微體ANLL/AML和FAB亞型相關(guān)的特異性染色