健脾理氣方對功能性消化不良大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能及胃動(dòng)素、胃泌素的影響

健脾理氣方對功能性消化不良大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能及胃動(dòng)素、胃泌素的影響

功能減退（fd）是臨床上常見的功能胃腸疾病，其特點(diǎn)往往逐年增加。根據(jù)中國廣東省城市居民的問卷，消化不良的發(fā)病率為19.8%。我們用健脾理氣方治療脾虛氣滯型功能性消化不良也獲得良好療效,為了探討其作用機(jī)制,我們研究了該方對功能性消化不良大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能及胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS)的影響。1材料表面1.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施健康成年8周齡SPF級(jí)Wistar大鼠共72只,體重為(200±20)g,雌雄各半,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)0056796,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用許可證SYXK(粵)2008-0094。采用架式籠養(yǎng)喂養(yǎng),每天自食足量顆粒飼料。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察為開放式,溫度、照明、噪音、換氣等條件控制在規(guī)定范圍內(nèi),每天定時(shí)清潔動(dòng)物房。1.2藥物和試劑1.3設(shè)備酶標(biāo)儀,南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司;UV-7504分光光度計(jì),上海欣茂儀器有限公司。2方法2.1造模不一先隨機(jī)抽取12只大鼠作為正常組,雌雄各半,不予造模。剩余60只予造模后,隨機(jī)分為5組:模型組、健脾理氣方低、中、高劑量組及莫沙比利組,每組12只,雌雄各半。2.2實(shí)驗(yàn)大鼠暴力犯罪按照參考文獻(xiàn)采用郭氏適度夾尾制造FD模型:將每組4只同籠大鼠,用長海綿鉗夾大鼠尾巴遠(yuǎn)端l/3處,以不破皮為度,令其暴怒,尋釁與其他大鼠撕打,以激怒全籠大鼠。每次刺激30min,半小時(shí)內(nèi)連續(xù)不斷地刺激,隨著打斗的加劇,大鼠可能被抓傷,為避免炎癥干擾,可用0.5%的碘伏涂擦受傷部位,以控制感染,每隔3h刺激1次,每日4次,連續(xù)刺激7d。2.3莫沙比利組依據(jù)體表面積法,健脾理氣方高、中、低劑量組分別為80,48,16g·kg-1;莫沙比利組予莫沙比利0.005g·kg-1;空白對照組及模型組以等體積生理鹽水ig,每天給藥1次,從造模后第7天開始用藥,持續(xù)給藥14d。2.4指標(biāo)檢測2.4.1小鼠推進(jìn)速度測定各組大鼠造模成功并末次給藥前禁食12h,給藥后2h,每只大鼠用0.04%酚紅溶液(含l0%明膠)2mLig,20min麻醉后抽取大鼠腹主動(dòng)脈血液4mL,1min內(nèi)接著處死動(dòng)物,同時(shí)取出胃及小腸。將小腸平鋪于白紙上,以酚紅在小腸中的移行距離與小腸全長的百分比乘以100%作為小腸推進(jìn)百分率來評價(jià)小腸推進(jìn)速度。胃置于5.0g·L-1NaOH溶液30mL中,沿胃大彎剪開,充分清洗胃內(nèi)容物,取洗液5mL離心(3000r·min-1,10min),吸上清液用分光光度計(jì)于560nm波長處比色。測其吸光度(A),以胃酚紅殘留率(胃酚紅殘留率=A胃酚紅/A基數(shù)酚紅×100%)評價(jià)胃排空速度。2.4.2活性物質(zhì)檢測各組大鼠采集外周靜脈血2mL,置于預(yù)先加入10%EDTA-K230μL、抑肽酶1000U的抗凝采血管中,混勻后立即在4℃下,以3000r·min-1離心10min,分離血漿于-70℃超低溫冰箱保存,為避免血漿中冷凝蛋白的干擾,測定時(shí)復(fù)融血漿,再次于4℃以3000r·min-1離心10min,采集上清液測定。采用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA),按照試劑盒說明的各項(xiàng)步驟進(jìn)行檢測。根據(jù)酶標(biāo)儀檢測得到樣品的吸光值(A,檢測波長為450nm),利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的二次方程式計(jì)算得出待檢樣品中MTL及GAS的濃度(ng·L-1)。2.5統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)包建立數(shù)據(jù)庫,計(jì)量資料數(shù)據(jù)用表示,多組間比較采用方差分析及兩兩比較,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1造模動(dòng)物的一般情況造模時(shí)通過夾大鼠尾根部,可見引發(fā)大鼠間相互撕打,打斗后大鼠前肢離地抬高,豎立對峙,并發(fā)出“呼呼”的怒叫,半小時(shí)內(nèi)始終保持暴怒狀態(tài)。造模動(dòng)物自造模后第2天出現(xiàn)進(jìn)食量、飲水量減少;第3天起出現(xiàn)煩燥、易怒,排泄物臭穢,第5天反應(yīng)遲鈍,第6天打斗減弱,第7天進(jìn)食量明顯減少,毛發(fā)變暗、枯黃、不順,并有緊張,焦慮,與所需的FD模型相符。與正常組大鼠相比,造模7d后各組大鼠的體重均明顯減輕,飲食量明顯下降。3.2胃竇黏膜形態(tài)變化各組大鼠均取2張胃竇黏膜組織病理切片做HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察胃竇黏膜形態(tài)改變。觀察結(jié)果顯示:各組大鼠胃竇黏膜均未見糜爛、化生、萎縮、不典型增生、炎癥細(xì)胞滲出等病理改變,僅模型組大鼠胃竇黏膜可見輕度炎癥。3.3組不同劑量莫沙比利組作用比較由表1可見,健脾理氣方各劑量組均可不程度地降低模型大鼠胃酚紅殘留率(P<0.05或P<0.01),且高劑量組與莫沙比利組作用無顯著性差異。健脾理氣方各劑量組均可不程度地升高模型大鼠小腸推進(jìn)率(P<0.05或P<0.01),且高劑量組與莫沙比利組作用無顯著性差異。3.4對大鼠血清中mtl和gas含量的影響由表2可見,健脾理氣方各劑量組均可不程度地增加模型大鼠血清中MTL,GAS的含量(P<0.05或P<0.01),且高劑量組與莫沙比利組作用無顯著性差異。4對fd大鼠胃正常功能的作用FD屬于中醫(yī)學(xué)“痞滿”、“胃脘痛”等范疇。導(dǎo)師黃穗平教授通過大量的臨床實(shí)踐認(rèn)為FD病程長、病情纏綿,多在脾胃虛弱的基礎(chǔ)上發(fā)生,為素體脾胃虛弱、飲食失常、勞累過度、內(nèi)傷七情等損傷脾胃,脾虛氣弱,運(yùn)化無力,郁而不行,最終中焦氣機(jī)紊亂,脾胃升降失常,胃失和降,受納不暢,出現(xiàn)脾虛氣滯型FD。從虛實(shí)辨證看,虛多于實(shí),每實(shí)而兼虛,虛證貫穿于全過程。脾虛氣滯為基本病機(jī),脾胃虛弱是本,氣滯為標(biāo),虛中夾實(shí)。治宜補(bǔ)虛固本,標(biāo)本同治,以健脾益氣,理氣消脹,和胃止痛為基本治法,方用健脾理氣方。胃腸動(dòng)力是消化系統(tǒng)的重要生理功能。國內(nèi)外均較重視胃動(dòng)力障礙在FD發(fā)病中的作用,表現(xiàn)為胃排空延遲,胃竇動(dòng)力低下,胃竇幽門十二指腸協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)障礙、胃容納性舒張功能下降、胃電節(jié)律失常等。研究表明FD患者餐后胃竇運(yùn)動(dòng)功能的減弱導(dǎo)致了患者胃排空的延遲。促胃腸動(dòng)力中藥在FD的臨床治療中取得了較好的療效,有人提出了“胃腸動(dòng)力中藥”這一概念。健脾理氣方中木香、砂仁、枳實(shí)、白術(shù)對胃排空及腸道傳輸均有明顯增加的促進(jìn)作用。胃腸激素在調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)中起重要作用,胃動(dòng)素、胃泌素是重要的胃腸道內(nèi)分泌激素,能引起胃電節(jié)律加快,并誘發(fā)峰電位的產(chǎn)生,從而增強(qiáng)胃竇的收縮,促進(jìn)胃的排空。脾虛證動(dòng)物模型的研究已有30余年,而近幾年又開展了FD的動(dòng)物模型研究。目前國內(nèi)應(yīng)用較多的為郭海軍的適度夾尾刺激動(dòng)物模型,我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn):從造模大鼠的一般表現(xiàn)、胃竇黏膜組織HE染色的結(jié)果以及造模大鼠體重變化及進(jìn)食量的變化情況,可以證明較好地復(fù)制出FD動(dòng)物模型。但功能性消化不良的病機(jī)關(guān)鍵是脾胃虛弱為本,病程較長,而此FD動(dòng)物模型的造模時(shí)間相對較短,如何復(fù)制出更加合適的病證結(jié)合動(dòng)物模型也是今后中醫(yī)界研究的難點(diǎn)和重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組大鼠血漿中MTL,GAS的含量比正常對照組明顯降低;健脾理氣方不同劑量組能不同程度地提高大鼠血漿中MTL,GAS含量,其藥理作用呈量效關(guān)系;健脾理氣方高劑量組與莫沙必利比較,差異沒有顯著性意義。綜上所述,健脾理氣方可以改善脾虛氣滯型FD大鼠的胃排空功能、促進(jìn)小腸推進(jìn)功能、提高血清胃動(dòng)素及胃泌素水平等作用,這可能是其治療FD的作用機(jī)制之一。健脾理氣方:處方中藥材飲片均為康美藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品,并鑒定