有關(guān)體外生物診斷試劑說明書撰寫的建議

1、有關(guān)體外生物診斷試劑說明書撰寫的建議 生物制品及體外診斷試劑組 張麗為加強藥品監(jiān)督管理，規(guī)范藥品的包裝、標(biāo)簽和說明書，以利于藥品的運輸、貯藏和使用，保證人民用藥安全有效,國家藥品監(jiān)督管理局于2000/10/15日發(fā)布了關(guān)于藥品包裝、標(biāo)簽和說明書管理規(guī)定的第23號令，對藥品包裝、標(biāo)簽和說明書的撰寫，作了明確的規(guī)定。但體外生物診斷試劑作為一種診斷用藥,在說明書的撰寫方面與治療用藥品的說明書有許多不同, 又由于診斷試劑產(chǎn)品的學(xué)科跨度大、品種繁雜，申報單位對于如何撰寫體外生物診斷試劑的說明書不十分明確，在審評過程中，說明書反復(fù)修改的比列較高，嚴(yán)重的影響了整體審評效率?，F(xiàn)參照23號令、EMEA、FDA、

2、IFCC等有關(guān)文獻(xiàn)，對體外生物診斷試劑說明書格式、說明書中各項內(nèi)容的書寫提出建議，并附一個產(chǎn)品說明書范例（虛擬），以供研發(fā)者在書寫產(chǎn)品說明書時參考、借鑒。 一 體外生物診斷試劑說明書格式： ××××說明書 【藥品名稱】 通用名： 商品名： 英文名： 漢語拼音： 【使用目的】 【試驗原理】 【主要組成成份】 【適用儀器】 【樣本要求】 【試驗方法】 【對試驗結(jié)果的解釋】 【該試驗方法的局限性】 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 【注意事項】 【包裝、規(guī)格】 【貯存】 【有效期】 【批準(zhǔn)文號】 【生產(chǎn)企業(yè)電話及傳真】 企業(yè)名稱： 地址： 郵政編碼： 電話號碼： 傳真號碼：

3、網(wǎng)址： 二 各項內(nèi)容書寫的說明： 【藥品名稱】 1. 通用名；漢語拼音；英文名： 通用名須采用國家批準(zhǔn)的法定名稱。 如該品屬中國生物制品規(guī)程（以下簡稱“規(guī)程”）收載的品種，其通用名、漢語拼音及英文名應(yīng)與“規(guī)程”一致；非規(guī)程收載的品種，其通用名稱須按體外生物診斷試劑的命名原則命名既：被測物+方法+診斷（檢測）+試劑（盒） 2商品名：不得用外文字母、漢語拼音或阿拉伯?dāng)?shù)字代替。不應(yīng)造成醫(yī)療使用的誤解或不便，不能暗示使用目的，應(yīng)有工商行政管理部門核準(zhǔn)注冊的報告?！臼褂媚康摹?說明使用目的如：定性或定量測定、篩查、家用、確認(rèn)等。 【試驗原理、方法】 詳細(xì)說明試驗原理、方法，該試驗的優(yōu)點及其局限性。 【主

4、要組成成份】 1.對于供應(yīng)商提供的試劑組份： (1)說明名稱、數(shù)量、每個組成成份在反應(yīng)體系中的比例或濃度，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其它特性。 (2)明確說明不同批號試劑盒中各組份是否可以互換。 2.對于供應(yīng)商沒有提供，但對該試驗必須的試劑組份：供應(yīng)商應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。 3. 對于標(biāo)準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品）和質(zhì)控品：（1）說明主要組成成份和其生物學(xué)來源。（2）注明標(biāo)準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品）的定值及其溯源性。注明標(biāo)準(zhǔn)品的定值、質(zhì)控品的允許范圍。 【適用儀器】 應(yīng)提供與儀器有關(guān)的所有信息以便用戶能夠作出最好的選擇。 【樣本要求】 應(yīng)在以下幾方面進(jìn)行

5、說明： 1.在樣本收集過程中的特別注意事項，包括該試驗要求患者所作的準(zhǔn)備工作。 2.為保證樣本各組份穩(wěn)定所必須的抗凝劑或保護(hù)劑。 3.已知的干擾物。 4.能夠保證樣本穩(wěn)定的貯藏、處理和運輸方法。 【試驗方法】 為保證試驗的正確進(jìn)行，應(yīng)在以下幾方面，對試驗的每一步進(jìn)行詳細(xì)說明： 1. 試劑配制：各試劑組份的稀釋、混合及其它必要的程序，包括試劑的貯藏條件、工作液的穩(wěn)定性，以及作為稀釋劑或作為溶劑的液體種類。列出不穩(wěn)定或變性的物理、生物或化學(xué)指標(biāo)。 2. 必須滿足的試驗條件：如 pH值、溫度、每一步試驗所需的時間、波長、最終反應(yīng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性等。試驗過程中必須注意的事項。 3.校準(zhǔn)程序（如果需要）：標(biāo)

6、準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品）的準(zhǔn)備和使用，空白的使用及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。 4.質(zhì)量控制程序：質(zhì)控物的使用、質(zhì)量控制方法。 5. 試驗結(jié)果的計算，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。 6. 參考值及其確定方法。 【對試驗結(jié)果的解釋】 說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，說明在何種情況下需要采用更特異或更靈敏的方法進(jìn)行確認(rèn)試驗，建議采用的試驗方法。 【該試驗方法的局限性】 說明該試驗方法的局限性。 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 說明該產(chǎn)品的性能指標(biāo)包括靈敏度、準(zhǔn)確性、特異性、精密度、可報告范圍等。 【注意事項】 注明必要的注意事項如本品僅用于體外診斷等。 【包裝、規(guī)格】 注明可測試的樣本數(shù)。 【貯藏】

7、具體條件（溫度、干濕、明暗）的表示方法按藥典要求。 【有效期】 系指被批準(zhǔn)的該產(chǎn)品使用有期限。 【批準(zhǔn)文號】 系指國家批準(zhǔn)的生產(chǎn)文號。 【生產(chǎn)企業(yè)】 系指該產(chǎn)品的生產(chǎn)企業(yè)，按下列方式列出： 企業(yè)名稱： 地址：（須標(biāo)詳細(xì)地址） 郵政編碼： 電話和傳真號碼：須標(biāo)明國內(nèi)區(qū)號。 網(wǎng)址：(如無網(wǎng)址可不寫，此項不保留) 三 范例： *定量測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 說明書 藥品名稱 通用名：*定量測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 使用目的 用于EDTA抗凝全血樣本中*的定量測定。 試驗原理 *是一種來源于真菌、具有很強的免疫抑制性的大環(huán)內(nèi)脂。它可以抑制混合的淋巴細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生T細(xì)胞毒素，在臨床上有很好的免疫抑制效果。

8、*抑制細(xì)胞內(nèi)的磷酸脂酶，使IL-2和IL-2受體對激活的T細(xì)胞產(chǎn)生免疫抑制性。*是通過肝臟中的P450 IIIA酶代謝，其中5%通過尿液排泄，95%通過膽汁排泄。 *主要用于防止肝移植患者的器官受損，也可用于腎、心和骨髓移植等患者。雖然*有很好的臨床療效，但也會產(chǎn)生副作用，其副作用與環(huán)孢A 大致相似如會引起腎中毒，胃腸不好和神經(jīng)中毒等一些病癥。 本品采用了競爭法酶聯(lián)免疫試驗原理：用羊抗鼠IgG包被微孔板，將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和樣本加入酶標(biāo)板、再加入*單克隆抗體，在室溫下孵育30分鐘后加入*辣根過氧化物酶工作液后孵育60分鐘，洗板。再加入顯色劑孵育15分鐘。最后加入酸終止反應(yīng)，通過雙波長450/630

9、納米測定吸光度，反應(yīng)產(chǎn)物顏色與樣本中的*含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本中*的濃度。試劑主要組成成分 1、酶標(biāo)板96孔/板 抗鼠IgG包被。 2、抗體8ml/瓶保存于TRIS緩沖液中的鼠*單克隆抗體。 3、酶標(biāo)記物 2ml/瓶 辣根過氧化物酶標(biāo)記的*。 4、酶標(biāo)記物稀釋液9 ml/瓶 5、標(biāo)準(zhǔn)品五瓶 0.5ml/瓶 保存在全血樣本中的純*，添加有防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 0.3、1.0、3.0、10、30ng/ml，可直接使用。儲存在零下18至25攝氏度可穩(wěn)定至效期。允許三次凍融。該標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)FUJISAWA醫(yī)藥公司高度提純的*標(biāo)定。 6、零標(biāo)準(zhǔn)品NSB2ml/瓶 保存在全血樣本中并添加有防腐劑，

10、可直接使用.儲存在零下18至25攝氏度可穩(wěn)定至效期，允許三次凍融。 7、質(zhì)控物二瓶0.5 ml/瓶靶值及允許范圍分別為: 保存在全血樣本中的純*并添加有防腐劑，可直接使用，儲存在零下18至25攝氏度可穩(wěn)定至效期，允許三次凍融。 8、顯色劑22ml/瓶 TMB9、終止液50ml/瓶 2N H2SO410、濃縮洗液50ml/瓶11、消化試劑10 ml/瓶 含有皂角甙和鈣的蛋白酶凍干混合物12、蓋板 1個 儀器 1、 具有雙波長檢測能力的酶標(biāo)儀。 2、 微孔板清洗器。 樣本要求 50微升EDTA抗凝的全血樣本。 采靜脈血于5或10ml空玻璃管中，使用EDTA作抗凝劑（7.2mg/5ml全血）。如果樣

11、本不立即使用，可在零下18至25攝氏度儲存6個月。對于沒有立即處理的新樣本或已經(jīng)儲存在零下18至25攝氏度的樣本，試驗前需完全混勻。新樣本和冷藏樣本的測定結(jié)果有一定的區(qū)別，因此針對同一患者，應(yīng)使用同一種類型的樣本。（也就是說應(yīng)使用新樣本或使用冷藏樣本而不應(yīng)將兩者混合），高濃度的脂類、膽紅素或微生物污染對測定結(jié)果的影響尚未確定。 試驗方法 1、將濃縮洗液按1:10的比例用蒸餾水或去離子水稀釋。 2、取每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、零標(biāo)準(zhǔn)品NSB、質(zhì)控物和樣本50L加入相應(yīng)標(biāo)簽的試管中。 5、用蒸餾水或去離子水復(fù)溶20ml消化試劑，該試劑可以在室溫下放置10分鐘，完全混勻后30分鐘內(nèi)使用，剩余部分應(yīng)立即冷凍保

12、存。該試劑允許三次凍融。 6、取300l復(fù)溶消化試劑加入每個試管中，用蓋將管口蓋好，將所有的試管渦流震蕩15至30秒鐘。 7、在室溫下孵育13至17分鐘。 8、將試管轉(zhuǎn)移到74至76攝氏度的水槽中孵育13至17分鐘。 9、將試管從水槽中取出，渦流震蕩15至30秒種。 10、在室溫下將試管以1800Xg的速度離心10分鐘。 11、取每個樣本的上清液100L放入微孔板中，每個樣本都需要雙孔測定。 12、取50l*單克隆抗體放入除NSB的其它微孔板中，取50l酶標(biāo)記物稀釋液放入NSB孔中。 13、用封口膜和板蓋將板孔蓋好，將整塊板固定在震蕩器上，并在室溫下以650RPM至750RPM震蕩28至32分

13、鐘。 14、按1:4的比例稀釋酶標(biāo)記物（例如：1ml酶標(biāo)記物+4ml酶標(biāo)記物稀釋液），應(yīng)準(zhǔn)備好足夠量的稀釋酶標(biāo)記物做當(dāng)天的測試。剩余的稀釋酶標(biāo)記物要扔掉。 15、取50l稀釋后的酶標(biāo)記物放入每個孔中， 16、用封口膜和板蓋將板孔蓋好，將整塊板固定在震蕩器上，并在室溫下以650RPM至750RPM震蕩55至65分鐘。 17、用大約300l洗液清洗每個孔三次，將板倒置將孔內(nèi)剩余的洗液倒在吸紙上。 18、在5分鐘內(nèi)，取200L顯色劑加入每個清洗微孔板中，用封口膜和板蓋將微孔板蓋好，將整塊板固定在震蕩器上，并在室溫下以650RPM至750RPM震蕩14至 16分鐘。 19、取100l終止液加入微孔中。

14、顏色變化從藍(lán)到黃。充分混合確保完全終止反應(yīng)。 20、在450/630納米的雙波長下測定吸光值，要求在終止反應(yīng)5分鐘內(nèi)完成。 21、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本和質(zhì)控物的濃度。 實驗過程中應(yīng)注意 1、NSB的吸光值應(yīng)小于0.200 。 2、在加入試劑時應(yīng)沿著孔壁加入，以免外濺。 3、顯色劑和酶標(biāo)記物要避光。 4、酶標(biāo)記物是一種粘液，要小心加入以確保結(jié)果精確。 5、如果某一個樣本的吸光值高于最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，用零標(biāo)準(zhǔn)品NSB 以1:2或1：4的比例稀釋樣本后重新測試，測試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)不應(yīng)大于1：4。 質(zhì)量控制每個酶標(biāo)板上至少采用兩個濃度的質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每個酶標(biāo)板測定結(jié)

15、果的可靠性。 1、零標(biāo)準(zhǔn)品NSB的最小吸光值1.500。 2、質(zhì)控物的平均值在允許范圍內(nèi)。 3、4PL曲線方程的C參數(shù)5.0。 4、重復(fù)樣本的測定結(jié)果相差在15%以內(nèi)。 如不能同時滿足上述條件，則此酶標(biāo)板的試驗結(jié)果無效，全部試驗需重新進(jìn)行。 測定結(jié)果的計算 1、計算每個標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和樣本的平均吸光值。 2、使用對數(shù)線性圖紙，X軸為濃度的對數(shù)值，Y軸為吸光值的對數(shù)值。通過每個標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光值和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的FK 506濃度值。吸光值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本既其濃度小于0.3ng/ml或大于30ng/ml的樣本，其測定結(jié)果無效。 4、實際上，大多實驗室使用計算機數(shù)

16、據(jù)管理系統(tǒng)。本公司使用具有4參數(shù)曲線的Multicalc?數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)。范例如下所示： 表一：標(biāo)準(zhǔn)品和樣本測定結(jié)果 復(fù)孔吸光值 平均吸光值 濃度 (ng/ml) O 標(biāo)準(zhǔn)品 2.626 2.582 標(biāo)準(zhǔn)品 A 2.377 2.359 0.3 A 2.342 B 2.000 1.972 1.0 B 1.944 C 1.923 1.290 3.0 C 1.287 D 0.567 0.558 10.0 D 0.548 E 0.292 0.294 30.0 0.297 未知濃度樣本 1 1.476 1.451 2.36 1.426 2 0.373 0.367 19.28 0.361 圖一： 橫軸：濃度

17、（ng/ml） 縱軸：吸光值 表一和圖一為范例標(biāo)準(zhǔn)曲線。該信息僅供參考，不應(yīng)用來計算任何值。 參考值 目前臨床研究還未確立全血樣本中有效*濃度的治療范圍。患者之間對*的吸收和清除差別很大。對*治療的臨床反應(yīng)和用藥劑量一致性很差。臨床狀態(tài)的復(fù)雜性、個體間對免疫抑制、腎毒性和*毒性效應(yīng)的敏感性不同，與其他免疫抑制劑的協(xié)同用藥，移植后時間以及其它許多因素導(dǎo)致對最適*血藥濃度的需要不同。僅憑個體的*濃度值并不能作為改變治療方案的指標(biāo)。 據(jù)Lake Louise報道：雖然尚未確立*治療范圍，但用藥后12小時之內(nèi)的建議濃度為5-20ng/ml。副作用引起的事故率隨全血*濃度的升高而升高。 該實驗的局限性1

18、、本品只能用于EDTA抗凝全血樣本的測定而不能用于其他體液樣本。 2、通過其他方法得到的*值與本品測定結(jié)果不具有直接的可比性。 3、該實驗對某些*的代謝物是非特異性的，并且對某些*的代謝物具有交叉反應(yīng)（表6）。當(dāng)*代謝減弱（例如：在膽汁郁積的情況下），* 代謝物可能造成堆積，這種情況下應(yīng)采用HPLC/MS/MS方法進(jìn)一步驗證樣本中*的濃度。 4、注意：診斷或治療中接受過鼠單克隆抗體制劑的患者樣本中會含有人抗鼠抗體（HAMA）。這些樣本經(jīng)利用鼠單克隆抗體的分析試劑盒檢驗時，所得結(jié)果會偏高或偏底。這些樣本不能利用本試劑盒進(jìn)行分析測定。 產(chǎn)品性能指標(biāo)注意：該數(shù)據(jù)是通過使用下例儀器得出：Denley

19、WellprepTM4微孔板清洗器，Diasorin XL 5000微孔板酶標(biāo)儀，BioTek ELP40 微孔板脫色清洗器，BioTek儀器EL X 800微孔板酶標(biāo)儀。 1、靈敏度： 1.1分析靈敏度： 分析靈敏度：0標(biāo)準(zhǔn)品吸光均值減去2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對應(yīng)的濃度值。本品分析靈敏度為0.27ng/ml。 1.2功能靈敏度： 功能靈敏度：用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋患者樣本至0.52.0ng/ml，每個樣本重復(fù)8孔測試以確定變異系數(shù)CV%，CV=20%處的濃度定義為功能靈敏度。本品的功能靈敏度為 1.0 ng/ml。 2.精密度： 根據(jù)NCCLS指導(dǎo)文獻(xiàn)EP5-T2：在20天內(nèi)，每天測定一次添加有*的三個濃度

20、全血樣本進(jìn)行精密度分析。計算批內(nèi)變異和三個批號試劑盒測定的總變異。在520 ng/ml的濃度范圍內(nèi)，批內(nèi)變異小于10%，總變異小于15%。結(jié)果如表2。 表二：精密度試驗結(jié)果 N 平均值 SD 批內(nèi)CV 總CV 80 3.8 0.3 7.5% 8.8% 80 8.0 0.5 6.5% 7.2% 80 16.3 1.4 8.7% 9.8% 3.測定范圍： 用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋添加有*的高濃度全血樣本，以確定本品的測定范圍。本品測定范圍為1.030ng/ml。 4.回收率： 將已知濃度的*加入到EDTA抗凝的全血樣本中，得到濃度為5ng/ml、10 ng/ml、和20 ng/ml的樣本，測定上述樣本并計算

21、回收率，結(jié)果如下： 表三：回收試驗結(jié)果 添加*濃度 測定結(jié)果（N=40） 回收率 5ng/ml 3.9±0.2ng/ml 78% 10ng/ml 8.2±0.4ng/ml 82% 20ng/ml 16.9±0.8ng/ml 84% 5.干擾性化合物的干擾試驗和交叉反應(yīng) 參考NCCLS指導(dǎo)文獻(xiàn)（EP7P）進(jìn)行干擾性試驗：通過向含*的全血樣本中添加2.5倍治療水平濃度的潛在干擾化合物。所有樣本做5次重復(fù)測定。如果平均測定濃度小于加入濃度的15%，則該化合物確定為無顯著性干擾。下列藥物在所測定濃度下都無顯著性干擾。 表四：潛在干擾性化合物的干擾試驗結(jié)果 檢驗藥品 檢驗濃

22、度 檢驗藥品 檢驗濃度 乙酰 40ul/mL Ganciclovir* 1000 ul/mL 阿昔洛韋* 1000 ul/mL ltraconazole 10 ul/mL 阿米卡星 60 ul/mL 酮康唑 10 ul/mL 兩性霉素B 20 ul/mL 利多卡因 10 ul/mL 咪唑疏嘌呤 1 ul/mL 霉酚酸 600 ul/mL Azithromycin* 5 ul/mL 甲基強的松龍 100 ul/mL 長烏西平 20 ul/mL 心痛定 60 ul/mL 頭孢唑啉 150 ul/mL 青霉素 100 ul/mL 頭孢曲松 500 ul/mL 苯巴比妥 80 ul/mL 西米地丁 1

23、0 ul/mL 苯妥英 40 ul/mL Clarithomycin 5 ul/mL 強的松 10 ul/mL 環(huán)孢菌素* 1000 ul/mL 雷尼替丁 1 ul/mL 地高辛 5 ul/mL Rapamycin 5 ul/mL 紅霉素 5 ul/mL 妥布霉素 20 ul/mL Famotidine 10 ul/mL 甲氧芐啶 5 ul/mL Fluconazole 15 ul/mL 新諾明 150 ul/mL 呋塞米 100 ul/mL 丙戊酸 200 ul/mL 慶大霉素 20 ul/mL 維拉帕米 1 ul/mL *10倍于治療水平濃度下檢測 參考NCCLS指導(dǎo)文獻(xiàn)（EP7P）進(jìn)行交

24、叉反應(yīng)試驗：通過向含有5ng/ml親本藥物的全血樣本中加入5ng/ml的代謝物以確定代謝物的交叉反應(yīng)性。試驗結(jié)果表明： 代謝物的交叉反應(yīng)性和有關(guān)文獻(xiàn)報道基本一致。 表五： *代謝物的免疫交叉反應(yīng)試驗結(jié)果 代謝物 修飾基團 交叉反應(yīng) M-1 （13-0-脫甲基-） 0% M-2 （31-0-脫甲基-） 85% M-3 （15-0-脫甲基-） 38% M-4 （12-0-羥基-） 0% M-5 （15，31-0-雙脫甲基-） 44% M-6 （13，31-0-雙脫甲基-） 0% M-7 （13，15-0-雙脫甲基-） 0% M-8 （31-0-雙脫甲基，重排） ND ND=not determined（不確定） 內(nèi)源物質(zhì)的干擾：加入潛在的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行內(nèi)源物質(zhì)的干擾試驗，結(jié)果表明：蛋白質(zhì)或膽紅素水平升高會影響試驗結(jié)果。 表六：內(nèi)源性物質(zhì)的干擾試驗結(jié)果 潛在的內(nèi)源性干擾物 終濃度 加入前樣本中*濃度（ng/ml） 加入后*測定結(jié)果（ng/ml） 誤差% 甘油三酯 8.0mg/ml 3.0 2.6 13% 9.9 9.2 7% 18.1 16.2 10% 尿酸 0.4mg/ml 3.0 2.6 13% 9.5 9.8 3% 19.0 18.0 5% 膽紅素 0.4mg/ml 3.0 3.