第九章發(fā)育毒性與致畸作用hyn

1、第九章 發(fā)育毒性與致畸作用第一節(jié) 概 述發(fā)育毒性 (developmental toxicity) 指出生前接觸某些環(huán)境因子對從胚胎或胎仔發(fā)育到出生后青春期前的子代造 成的有害作用，包括發(fā)育生物體死亡、結(jié)構(gòu)異常、生長遲緩、功能缺陷。發(fā)育毒理學(developmental toxicology ):研究出生前暴露于環(huán)境有 害因子導致的異常發(fā)育結(jié)局及其作用機制、發(fā)生原理、影響因 素、毒物動力學及其評價的科學?；W( teratology )現(xiàn)代實驗畸胎學( 19 世紀初)歷史的教訓1940年澳大利亞風疹大流行，次年流行嬰兒先天性白內(nèi)障、耳聾、智力不全、先天性心臟病 1945年廣島長崎原子彈爆炸，

2、受輻射兒童小頭畸形、智力低下，一年內(nèi)死亡率25%1960年反應停事件 ( thalidomide incident )， 歐洲出生 8000多海豹畸形或海豹癥 ( phocomelus ) 兒童1968年日本多氯聯(lián)苯污染米糠油事件，孕婦出現(xiàn)死產(chǎn)、早產(chǎn)、? 油癥兒 ?19611970年美國在越戰(zhàn)中使用落葉劑 2,4,5-T (含TCDD，孕婦流產(chǎn)、產(chǎn)下小頭和 Dowr? _s綜合 征畸形兒19661972年美國孕婦服用己烯雌酚( diethylstilbestrol， DES)， 30 0多少女發(fā)生陰道癌反應停(沙利度胺)事件孕婦的理想選擇？ 1953年，聯(lián)邦德國一家名為 Chemie Grue

3、rerthal 的制藥公司研 究人員發(fā)現(xiàn)，反應停具有一定的鎮(zhèn)靜安眠作用，而且對孕婦懷 孕早期的妊娠嘔吐療效極佳。1957.10.1 該公司將反應停正式推向市場令人恐怖的副作用 到1960年，歐洲醫(yī)生開始發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)畸形嬰兒的出生率明顯上升：四肢畸形(主要是雙 上肢短肢畸形)、腭裂、盲兒、聾啞兒、內(nèi)臟畸形等12000截至 1963年在世界各地，如西德、美國、荷蘭和日本等國，由于服用該藥物而誕生了 多名這種形狀如海豹一樣的可憐的嬰兒。3454天之內(nèi)，服用此藥后，遲早會出現(xiàn)各種不同經(jīng)過調(diào)查證實，母親從停止月經(jīng)算起， 的癥狀。第二節(jié) 發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念發(fā)育毒性 : 出生前經(jīng)父體或 （和） 母

4、體接觸外源性理化因素， 引起在子代到 達成體之前這段時間內(nèi)出現(xiàn)的有害作用。發(fā)育毒性具體表現(xiàn) 生長改變：一般指生長遲緩，胚胎與胎兒發(fā)育在外來化合物的影響下，較正常 的發(fā)育過程緩慢。結(jié)構(gòu)異常：由于外來化合物的干擾，胎兒在出生時表現(xiàn)出形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，即畸 形。功能缺陷：胎兒的生理、生化、代謝、免疫、神經(jīng)活動及行為的缺陷或異常。 發(fā)育生物體死亡：由于外來化合物的作用，在胚胎或胎兒發(fā)育期間對胚胎或胎 兒產(chǎn)生損害，并致其死亡，具體表現(xiàn)為自然流產(chǎn)、死產(chǎn)，死胎率增加?；危涸谂咛グl(fā)育過程中，由于受到各種理化因素的影響，使胚胎細胞的分化、 器官形成和發(fā)育不能正常進行，以致出現(xiàn)器官的器質(zhì)性缺陷，造成形態(tài)結(jié)構(gòu)的 異常

5、（狹義）。分為嚴重畸形和輕微畸形。廣義的畸形還包括生理、生化以及 精神（行為）發(fā)育缺陷。致畸性和致畸作用：在妊娠期接觸外源性理化因素引起后代結(jié)構(gòu)畸形的特性或 作用。致畸物（致畸原）：凡是能透過母體的胎盤屏障，直接作用于胚胎細胞，引起 胚胎發(fā)育障礙，導致先天性畸形的外來物，稱為致畸物或致畸原。? 不良妊娠結(jié)局：妊娠后不能產(chǎn)生外觀和功能正常的子代。包括所有的不良 結(jié)果，如流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、宮內(nèi)生長遲緩、發(fā)育異常、新生兒和嬰幼兒 期死亡等。二、發(fā)育各階段生殖毒性作用特點 著床前期發(fā)育毒性從受精算起，到完成著床前（人類為 11-12 天、嚙齒類動物為前 6天） 通常是未分化細胞受化學毒物損傷而致胚泡死

6、亡，即著床前丟 失 也有著床前接觸毒物導致畸形的例子：環(huán)氧己烷、甲基亞硝脲器官形成期（胚體發(fā)育期）著床 - 硬腭閉合自受精日計算：人 3-8 周；大鼠約 9-17 天；小鼠約 7.5-16 天；家 兔6-18天 在致畸作用中，對致畸物最敏感的階段是器官發(fā)生期，一般稱 為危險期或關(guān)鍵期（ critical period ）至第八周末 在器官發(fā)生期中，致畸物與胚胎接觸可能造成形態(tài)結(jié)構(gòu)異常；也有 可能發(fā)生胚胎死亡、生長遲緩；發(fā)育中的胚胎對致畸作用的敏感期雖然主要在器官發(fā)生期，但在此 期間，各種不同器官還各有特別敏感的時間，即 “靶窗（ target window）”大鼠器官發(fā)生期為受精后 9-17

7、天，但眼的最敏感期為受孕后 9天，心 臟和主動脈弓約為 9-10 天大鼠胚胎各器官的特殊敏感期同一劑量的一種致畸物在敏感期中與胚胎接觸，可因胚胎所處發(fā)育階段不同而出現(xiàn)不同的畸形如將大量維生素A在受精后第8天給予大鼠，主要出現(xiàn)骨骼畸形；如在第 12天給予，則誘發(fā)腭裂胎兒期器官形成結(jié)束后 （以硬顎閉合為標志） 即進入胎兒期（人類從 56-58天起）， 直到分娩 特點：以組織分化、生長和生理學的成熟為主。最易表現(xiàn)的發(fā)育毒性是生長遲緩、 特異的功能障礙（神經(jīng)、內(nèi)分泌及 免疫系統(tǒng)機能的改變）、經(jīng)胎盤致癌和偶見死胎 胎仔或胎兒對胚胎致死作用的易感性雖然較胚體低， 但仍有一定數(shù)目 的死產(chǎn)胎發(fā)生圍生期和出生后

8、的發(fā)育期一些功能方面的缺陷出生時不易發(fā)現(xiàn)， 需要出生后繼續(xù)觀察， 研究 較多的是 發(fā)育免疫毒性 神經(jīng)行為發(fā)育異常兒童期腫瘤特點 機體不同系統(tǒng)和器官的形成與發(fā)育不完全同步；分娩時多數(shù)器 官胎兒期發(fā)育成熟，但神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)直到兒童期、少年 期、成熟期才告完成。不同化學毒物作用于不同發(fā)育階段，產(chǎn)生不同效應。 最容易引起畸形的階段是器官形成期（二）、發(fā)育毒性的劑量 - 反應模式 和閾值 （二）發(fā)育毒性的劑量反應關(guān)系模式：發(fā)育毒性是否有閾值尚存在爭論 很難用實驗找出一個發(fā)生率很低的劑量 - 反應關(guān)系，因為那需要極大 的樣本數(shù)量，如每劑量組幾百到幾千窩的動物 多數(shù)發(fā)育毒性機制還不了解，有的已知機制支持

9、閾值的存在，而有 些機制則不支持 通常認為哺乳動物的發(fā)育毒性是一種有閾劑量的效應致畸帶：從NOAES胚胎死亡劑量之間的范圍，致畸帶越寬，該物質(zhì) 的致畸危險性越大致畸的物種個體差異 ： 任何環(huán)境有害因素的損害效應都存在物種品系及個體差異，在致 畸作用中較突出。例如，殺蟲劑西維因?qū)﹄嗍缶哂兄禄饔?，?家免和倉鼠并不致畸。農(nóng)藥敵枯雙對大鼠致畸作用明顯，但未得 到人群調(diào)查的證實資料。同一物種不同品系對一種致畸物敏感性的差別很大，反應停和脫氫皮質(zhì)酮都有這種現(xiàn)象可能由于同一致畸物在不同物種和同一物種的不同品系動 物的代謝過程有一定差異； 也可能由于致畸物主要是通過母 體胎盤作用于胚胎，而不同物種動物胎盤

10、構(gòu)造也不相同。 這 些差異可能是由于遺傳因素，即基因型差異。母體毒性作用可分為遺傳學：如腭裂的發(fā)生率依賴于母體的而非嬰兒的基因型，白 人中的發(fā)病率比黑人更高疾?。耗阁w未控制的糖尿病、某些感染，經(jīng)過間接的疾病相關(guān) 的母體變化或直接經(jīng)胎盤的感染對孕體有不利的影響 營養(yǎng) 應激對胎盤的影響母體毒性與胚胎毒性的關(guān)系具有致畸作用，但無母體毒性出現(xiàn)，稱為非共效應致畸物( non-coeffective teratogen)此類外源化學物的致畸作用具有特定的作用機理，與母體毒性無關(guān)，如反應停此類外源化學物的致畸作用往往較強，最容易被忽視也最危險， 應特別注意出現(xiàn)致畸作用的同時也表現(xiàn)母體毒性，稱為共效應致畸物c

11、oeffective teratogen此種受試物可能既對胚胎有特定的致畸機理，同時也對母體具有損 害作用，但二者無直接聯(lián)系，可能是繼發(fā)效應。僅具有母體毒性，但不具有致畸作用在一定劑量下，既無母體毒性，也不表現(xiàn)胚胎毒性發(fā)育毒性是否由母體毒性導致的？ 明確有發(fā)育毒性的有害因素同時也有母體毒性； 發(fā)育毒性的嚴重程度和發(fā)生率與母體毒性相關(guān)。四、父源性發(fā)育毒性通過父親對發(fā)育個體產(chǎn)生不良影響 - 父源性出生缺陷、流產(chǎn)、死胎、 兒童腫瘤、出生性別比改變 某些出生缺陷與父親的遺傳、年齡和暴露因素等有關(guān)，被稱作為父 源性出生缺陷 （paternal birth defect）化學物致畸力（ ILSI ）（一）

12、乙醇與吸煙（二）乙烯雌酚（三）甲基汞（四）鉛可影響心臟、骨骼、小腸、腎、生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，兒童中 樞神經(jīng)系統(tǒng)對鉛非常敏感。鉛可造成兒童智商明顯降低、注意力缺陷多動障礙、閱讀和學習能力顯著減弱。（四）視黃酸視黃酸是具有維生素 A 結(jié)構(gòu)或與其功能相似的天然或人工合成 的化合物。致畸活性由多種受體及其配體介導 視黃酸受體（ RAR）服用過量維生素引起畸形第三節(jié) 致畸（發(fā)育毒性）作用機制（Mechanisms of Teratogenic Action哺乳動物正常發(fā)育的分子機制尚不清楚原因不清楚出生缺陷：15%-25%遺傳因素4%母體狀況3%母體感染1%-2%臍帶阻斷等宮內(nèi)機械性問題 1%有明確化學

13、物或其他環(huán)境因素65%未知病因Wilson致畸學基本原理（1973）對致畸的易感性依賴于孕體的基因型及其與有害環(huán)境因子相互作用的方 式對致畸的易感性隨著對有害因素暴露的發(fā)育時期不同而變化致畸物以特定方式作用于發(fā)育的細胞和組織，啟動一系列的異常發(fā)育事件對發(fā)育組織的有害影響依賴于有害因素的性質(zhì)異常發(fā)育的四種表型是：死亡、畸形、生長遲緩和功能缺陷隨著劑量增加，異常發(fā)育表型的頻率和程度增加，從無作用到全部致死水平Wilson（1977）提出了畸形發(fā)生的9種機制，包括突變、染色體斷 裂、有絲分裂改變、改變核酸完整性或功能、減少前體或底物 的補給、減少能源支持、改變膜特性、滲透壓不平衡和酶抑制 作用。近年

14、來在分子水平的研究有很大的進展，雖然胚胎有代 償機制彌補外源性化學物的影響，但是，是否產(chǎn)生畸形依賴于 在致病過程中的每個步驟在損傷和修復之間的平衡?？赡軝C制干擾基因表達基因突變與染色體畸變自發(fā)流產(chǎn)的胚胎中至少 50 %存在染色體畸變（主要是不分離）細胞損傷和死亡干擾細胞-細胞交互作用通過胎盤毒性引起發(fā)育毒性干擾母體穩(wěn)態(tài)發(fā)育免疫毒性機制發(fā)育神經(jīng)毒性機制一、基因突變與染色體畸變環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)可誘發(fā)DNA斷裂和染色體畸變，同時也被用作致畸試驗的陽性物，可引起腦積水、露眼、腭裂、小頜畸形、臍疝、尾部和肢體畸形等。染色體畸變占人類發(fā)育缺陷原因的3%，自發(fā)流產(chǎn)至少有50

15、%存在染色體畸變。二、干擾基因表達在培養(yǎng)的小鼠胚胎中用反義寡核苷酸探針抑制原癌基因Wnt-1或Wnt-3a，可產(chǎn)生中腦和后腦，或中腦、后腦和脊髓的畸形易9除Wnt-1基因的突變小鼠也可產(chǎn)生中腦和后腦的畸形向小鼠胚胎中加入雞的-肌動蛋白啟動子時，Hox-1.1基因表達，并產(chǎn)生 多種顱臉部和頸椎的畸形。二、干擾基因表達表觀遺傳學(Epigenetics)DNA甲基化組蛋白修飾染色質(zhì)重塑microRNA三、細胞損傷與死亡誘發(fā)細胞凋亡，干擾正常發(fā)育，引起胚胎畸形一沙利度胺、全反式視黃醇、N-乙酸基-2-乙酰氨基芴、甲基汞、乙醇等 導致細胞周期混亂 一氧化損傷和DNA斷裂四、干擾細胞-細胞交互作用細胞-

16、細胞間的相互作用主要通過細胞通訊來實現(xiàn)，包括縫隙連 接通訊、膜表面分析接觸通訊等直接的細胞間通訊和由受體介 導的細胞信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)。細胞間的通訊方式GJIC 參與細胞的分化生長與發(fā)育胚胎期 8細胞桑葚胚期，細胞間均有縫隙連接；抑制GJIC 則可導致細胞異常形態(tài)。五、通過胎盤毒性引起發(fā)育毒性 鎘在妊娠中晚期可致胎盤壞死或血流減少； 抑制對營養(yǎng)物質(zhì)的傳送六、 干擾母體穩(wěn)定第四節(jié)發(fā)育毒性和致畸作用試驗與評價哺乳動物發(fā)育毒性試驗人群流行病學調(diào)查發(fā)育毒性替代試驗化學物理化特性：構(gòu)效分析動物發(fā)育毒性試驗 對一新的化學毒物或產(chǎn)品，不應直接對人做臨床研究，也不 可能進行流行病學研究，首先靠動物實驗來預測其生殖和

17、發(fā)育 毒性，迄今為止認為用動物試驗預測化學毒物對人類的致畸性， 靈敏度較高 。動物發(fā)育毒性試驗優(yōu)點： 容易控制接觸條件、接觸動物數(shù)量、年齡、狀態(tài)及選擇檢測效應指標（終點）。 甚至一些輕微的效應對研究人體影響很有意義。 預測新的化學物或產(chǎn)品的生殖發(fā) 育毒性。缺點： 試驗結(jié)果外推到人存在不肯定性，預測對人的致畸性特異性不夠高；從較高劑量暴露 結(jié)果外推到人（暴露劑量較低）有一定困難，況且人與人之間的個體差異要比動物的 更大。 費時、費錢，很難滿足對大量投放市場的化學物進行生殖與發(fā)育毒性評價 的需要。動物發(fā)育毒性試驗 評價生殖發(fā)育毒性的方案應連續(xù)通過一個完整的生命周期，即 從親代受孕到子一代性成熟，以

18、較全面的反映接觸有害因素所致的 即發(fā)和遲發(fā)生殖、發(fā)育效應（ 近、遠期效應 ） 。一、哺乳動物發(fā)育毒性試驗生殖發(fā)育過程一、生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗、研究目的 評價化合物對配子成熟、交配行為、生育力、胚 胎著床前和著床的影響。雌性包括對動情期、輸卵管運輸、著 床和胚胎著床前階段發(fā)育的影響。雄性包括檢測對功能的影響 （包括性欲、附睪精子成熟等）、動物 至少一種，首選大鼠。每性別、每組 16-20 窩。、給藥期 一般采取雄性交配前 4 周開始染毒， 直至交配成功 雌鼠交配前 2周開始染毒 （可覆蓋至少兩個完整的動情期）直至 著床。4 、交配及受孕檢查 交配期 23 周，比例 1:1 。5 、終末處

19、死 雌鼠在孕中期 13-15 天終止妊娠。雄性在證實交 配并受孕成功后處死。6、觀察項目 染毒期間觀察雌雄親代 （F。）的體征和死亡（至少 1次/日），體重（至少2次/周），攝食（1次/周），鏡檢雌 性陰道涂片和其他毒性研究中見到的靶效應。所有動物的生殖系統(tǒng)做組織病理學。附睪或睪丸中精子 計數(shù)以及精子存活力測定。計數(shù)雌性黃體數(shù)，著床數(shù)。吸收胎， 死胎和活胎數(shù)。對明顯未孕的大小鼠，可硫化銨鑒別胚胎著床 前死亡。（二）胚胎-胎體毒性試驗（致畸試驗） 致畸作用是發(fā)育毒性中最重要、最容易觀察到一種表現(xiàn)，故化 學物發(fā)育毒性的評定主要通過致畸試驗。在致畸試驗中除可觀察到出生幼仔畸形外，也可同時發(fā)現(xiàn)生長 發(fā)

20、育遲緩和胚胎致死。傳統(tǒng)常規(guī)致畸試驗即第H 段試驗 是評定化學物是否具有致畸 作用的標準方法。胎體檢查 以上檢查只能檢出結(jié)構(gòu)與形態(tài)的畸形，不能檢出可能發(fā)生的生化功 能或神經(jīng)行為缺陷。故為了全面了解可能存在的先天缺陷和生理功能異常，可將試驗雌 鼠保留1/4左右待其自然分娩，飼養(yǎng)觀察出生幼仔以便檢查。（二）胚胎-胎體毒性試驗（致畸試驗）致畸試驗影響因素1、致畸敏感性整個器官形成期染毒有時可導致多數(shù)的胚胎死亡，活胎不多， 致畸作用和生長遲緩作用不易顯示。因此在胚胎死亡特別多， 補做單天染毒的試驗。器官形成期前的染毒 傳統(tǒng)致畸試驗為陰性，致突變性為陽性。 為確保安全，補做器官形成期之前的染毒，如交配后5

21、小時和25 小時期至器官形成期前止染毒。2、物種差異兩個物種、化學物的劑量 應包括有致輕度母體毒性的劑量、調(diào)整合籠時間以達到準確觀察生長遲緩。、其他因素 理化和染毒途徑（反應停，苯菌靈， EDTA ）三、出生前和出生后發(fā)育毒性試驗（圍生期毒性試驗）1 、研究目的 評價母體自著床至斷乳期間接觸化學物對妊娠 / 哺 乳母體和對孕體及子代發(fā)育直至成熟的有害影響。在此期間引 起的毒性反應會延遲發(fā)生，故觀察應繼續(xù)到性成熟。有害影響 主要包括增加與未妊娠雌性有關(guān)的毒性，子代出生前和出生后 死亡，生長與發(fā)育的改變，子代中的功能缺陷（包括行為，青 春期性成熟）和生殖（ F1 代）。2 、動物 大鼠，每組 16

22、20 窩。3 、染毒期 雌性從著床至哺乳期終止。、實驗程序及終末處死 允許分娩和撫養(yǎng)子代到斷乳。親代于F1 代斷乳時處死。子代出生當天被定為出生后 0 天。在斷乳時，陸續(xù)被處死至每窩可選出8只雌雄，評價生殖能力的Fi代要在雌 雄同籠，子二代F2代出生后處死。5 、觀察項目染毒期間觀察親代體征和死亡（至少 1 次/ 日）、體重、體重增 長（至少 2 次/ 周）和在以前毒性研究中見到的有評價價值的靶 效應、妊娠的長度、分娩。處死動物全部尸解，生殖系統(tǒng)病檢。檢查著床腺。 子代需檢查每窩出生時活仔數(shù)、死仔數(shù)、畸形數(shù)、出生時和斷 乳前后存活率、體重、身長、身體發(fā)育、性成熟和生育力、感 覺功能反射和行為等

23、。動物發(fā)育毒性試驗三段生殖毒性試驗動物胚胎對人致畸物的反應生殖毒性的評價兩代一窩 ( 和一代一窩 ) 生殖試驗 生殖毒性的評價 試驗方案 :三代兩窩二、流行病學研究和人類的證據(jù)人類證據(jù)的獲得 病例報告、出生缺陷登記 回顧性或橫斷面調(diào)查：需要正確發(fā)現(xiàn)結(jié)局和相關(guān)暴露，需要足夠大的效應和研 究人群目的：尋找導致出生缺陷的原因；通過監(jiān)測了解出生缺陷的發(fā)生趨勢；引起公眾關(guān)注，保護公眾健康；發(fā)育流行病學面臨的問題 :1. 龐大的樣本量出生缺陷發(fā)病率和患病率的區(qū)別，前者的分母是所有妊娠數(shù) 后者是出生活胎數(shù)研究的同質(zhì)性：同一種結(jié)局，著眼點的不同，收集資料的方 向就不同資料收集的標準和準確性以及可靠性. 混雜因

24、素：年齡、孕產(chǎn)次、生活方式，飲食習慣等(二)人類發(fā)育毒物的確定人類發(fā)育毒物的確定主要依據(jù)：流行病學研究、有控制的臨床研究結(jié)果 經(jīng)證實可以引起人類發(fā)育異常的致畸原只有 40種左右 確認人類致畸物的標準：一種特殊的缺陷或幾種缺陷并發(fā) ( 綜合征 ) 的頻率突然增加。缺陷的增加與某種已知的環(huán)境改變 ( 如一種新藥的廣泛使用 ) 相關(guān)聯(lián)。在妊娠的特殊階段已知暴露于某種環(huán)境的改變， 產(chǎn)生有特征性缺陷的綜合征。缺少妊娠時引起特征性缺陷嬰兒的其他共同的因子。致畸物及發(fā)育毒物的危險性分類三、發(fā)育毒性的初篩和替代試驗體外預篩試驗V由于刪除了母體毒物動力學、生物轉(zhuǎn)化、以及胎盤屏障的影響，可靠性受到一定懷疑；但對于

25、不存在母體毒性的致畸物，可靠性稍高V對發(fā)現(xiàn)致畸作用的靶器官或闡明致畸作用方式與機制，比傳統(tǒng)致畸試驗有優(yōu)勢V常見：全胚培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)大鼠全胚胎培養(yǎng)、胚胎細胞微團培養(yǎng)、小鼠胚胎干細胞試驗大鼠全胚胎培養(yǎng)自從1978年首次在體外進行嚙齒類動物全胚胎培養(yǎng)成功 后，這一技術(shù)逐漸被應用于毒理學研究。用于著床后全胚胎培養(yǎng)的胚體正處于器官發(fā)生期，是對有毒外 源物高度敏感的發(fā)育階段，能較好的反映化學物對胚體的影響。 該方法在毒理學、藥理學等領域被廣泛應用，但本法技術(shù)難度 相對較大，費用高。大鼠全胚胎培養(yǎng)具體試驗方法；從孕期910天大鼠子宮取出胚體，剝?nèi)eichert膜,放入加有外源化學物的 培養(yǎng)液中，在孵箱中通氣 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)觀察心臟搏動、卵黃囊直徑、胚芽、神經(jīng)管閉合、體節(jié)數(shù)目及體長等發(fā)育情況。根據(jù)Brown評分對器官形態(tài)分化做出評價?？珊Y試化學物的發(fā)育毒性、探討其劑量反應關(guān)系和作用機制