賀敏碩士研究生開題報(bào)告課件

歡迎各位老師、同學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)碩士研究生

學(xué)位論文開題報(bào)告

課題名稱：利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的保護(hù)作用和機(jī)制研究生姓名：賀敏導(dǎo)師姓名：黃仁彬研究?jī)?nèi)容、意義和預(yù)期結(jié)果通過體外小鼠肝微粒體溫孵法和高效液相色譜法等研究利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的影響，觀察醋氨酚、利福平、谷胱甘肽在不同條件下體外鼠微粒體溫孵中含量的變化，以及新的代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。通過細(xì)胞培養(yǎng)、酶學(xué)等技術(shù)進(jìn)一步探討利福平的保護(hù)作用機(jī)制。國內(nèi)外對(duì)利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的影響的研究較少，本次實(shí)驗(yàn)主要從分子水平研究，進(jìn)一步明確利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的保護(hù)作用機(jī)制和機(jī)理，更好的了解利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的保護(hù)作用。研究背景研究背景3一些服用肝細(xì)胞色素P450誘導(dǎo)劑如苯巴比妥都能增加醋氨酚的毒性，一些肝細(xì)胞色素P450抑制劑如西米替丁及谷胱甘肽提供體如半胱氨酸能減輕醋氨酚的毒性效應(yīng)。4廣西醫(yī)科大學(xué)黃仁彬教授在世界首次發(fā)現(xiàn)了肝細(xì)胞色素P450誘導(dǎo)劑利福平卻能減輕醋氨酚的谷胱甘肽耗竭作用。研究目標(biāo)與內(nèi)容通過體外小鼠肝微粒體溫孵體外法和高效液相色譜法等研究利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的影響，觀察醋氨酚、利福平、谷胱甘肽在不同條件下體外鼠微粒體溫孵中含量的變化，以及新的代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。通過細(xì)胞培養(yǎng)研究利福平對(duì)醋氨酚中毒引發(fā)的肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。通過酶學(xué)客觀反映利福平對(duì)肝內(nèi)代謝酶如GST的影響。利福平對(duì)肝臟CYP2E1表達(dá)的作用的研究及對(duì)醋氨酚中毒引起的細(xì)胞DNA損傷的作用的研究。擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑體外小鼠肝微粒體溫孵法：保持肝細(xì)胞色素P450的高含量和高活性，確保藥物在孵育中能進(jìn)行代謝。加入一定的催化劑進(jìn)行催化。擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑1首先建立醋氨酚、利福平和GSH及其相關(guān)代謝產(chǎn)物在酶系統(tǒng)中的HPLC檢測(cè)方法，考察方法學(xué)。2先考察APAP和RFP在體外PBS中是否有相互作用。擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑3

建立和優(yōu)化體外肝P450酶系統(tǒng)，指標(biāo)是醋氨酚在這個(gè)酶系統(tǒng)中有代謝即醋氨酚母體的濃度下降，且在這個(gè)系統(tǒng)中GSH的濃度比對(duì)照組明顯下降，表明有NAPQI的產(chǎn)生。NAPQI是無法檢測(cè)到的，因?yàn)樗划a(chǎn)生就和GSH或蛋白結(jié)合。只能通過GSH耗竭反映NAPQI的水平。擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑5有能力有條件就找出利福平和NAPQI的結(jié)合產(chǎn)物。6

重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)次，考察結(jié)果的準(zhǔn)確性。7根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果再進(jìn)行下一步的探索。

擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑二：細(xì)胞培養(yǎng)

1離體的小鼠肝細(xì)胞和1.0mM--10mM醋氨酚培養(yǎng)2h，觀察肝細(xì)胞損傷程度。2另組加入不同劑量利福平和不同劑量醋氨酚培養(yǎng)2h，觀查肝細(xì)胞損傷程度，觀察利福平是否有預(yù)防肝細(xì)胞損傷作用。

擬采用的研究方法、關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)及解決途徑3觀察利福平對(duì)已損傷的肝細(xì)胞損傷是否有恢復(fù)作用，將1.0mM醋氨酚培養(yǎng)1.5h沖洗移除非共價(jià)結(jié)合AA，重新懸浮在含利福平的培養(yǎng)基中，觀察。對(duì)照可選擇生理鹽水、NAC（N-乙酰半胱氨酸，2.0mM）和DTT（二硫蘇糖醇，1.5mM），DTT能減少細(xì)胞毒性。有條件可以用NAPQI做細(xì)胞培養(yǎng)。課題的創(chuàng)新點(diǎn)

在黃仁彬教授研究的基礎(chǔ)上，從分子水平進(jìn)一步深入闡明利福平對(duì)醋氨酚肝毒性的保護(hù)作用的機(jī)制。預(yù)期結(jié)果

利福平可能是通過競(jìng)爭(zhēng)性的和NAPQI作用，從而達(dá)到提高GSH含量，減輕NAPQI對(duì)肝細(xì)胞的損傷。也有可能利福平對(duì)肝臟的某種酶有相關(guān)作用。

研究基礎(chǔ)

本實(shí)驗(yàn)室多年從事生化藥理及毒理的研究，具備有實(shí)驗(yàn)所需的設(shè)備。黃仁彬教授的研究已