當(dāng)歸多糖對(duì)老年癡呆小鼠腦組織鈣超載及膽堿能神經(jīng)損傷的影響

當(dāng)歸多糖對(duì)老年癡呆小鼠腦組織鈣超載及膽堿能神經(jīng)損傷的影響

腦癱綜合征是老年人常見的疾病。目前，沒有理想的治療方案。因此，早期發(fā)現(xiàn)和及時(shí)預(yù)防已成為醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。由于西藥療效不盡人意,而且多數(shù)價(jià)格較昂貴,所以從單味中藥提取有效成分用于及早防治成為該領(lǐng)域研究的重要組成部分。大量研究證實(shí):中藥多糖確有明顯的延緩衰老的作用。當(dāng)歸多糖是甘肅道地藥材當(dāng)歸的有效成分之一,已有文獻(xiàn)報(bào)道:當(dāng)歸多糖具有抗腫瘤、延緩衰老、治療老年癡呆等作用,但是其延緩衰老和治療老年癡呆的確切機(jī)制尚未明確,因此本研究觀察老年癡呆小鼠小鼠腦組織Ca2+濃度、Ca2+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和AchE活性的變化,以期揭示當(dāng)歸多糖抗衰老和治療老年癡呆的作用機(jī)制。1材料和機(jī)器1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物驅(qū)動(dòng)模型清潔級(jí)昆明種小鼠72只,雌雄各半,體質(zhì)量(20±2)g,由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(甘)20111.2試劑與儀器當(dāng)歸多糖,陜西慈緣生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號(hào)CY110320,用生理鹽水配制成10g/L的儲(chǔ)備液以備用。D-半乳糖,北京化學(xué)試劑公司產(chǎn)品,批號(hào)020123,臨用前用生理鹽水配制成12g/L液體備用;亞硝酸鈉,西安化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號(hào)860723,臨用前用生理鹽水配制成9g/L液體備用。鈣測(cè)定試劑盒(批號(hào)20111023)、Ca2+-ATPase試劑盒(批號(hào)20110817)、Ca2+Mg2+-ATPase試劑盒(批號(hào)20110810)、AchE試劑盒(批號(hào)20110720)及考馬斯亮藍(lán)測(cè)定試劑盒(批號(hào)20110716),均由南京建成生物工程研究所提供。SK3300H型數(shù)控超聲波清洗器,上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司產(chǎn)品;VIS-723N型紫外可見分光光度計(jì),北京瑞利分析儀器有限公司產(chǎn)品;BS224S型電子天平,賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋,鄭州杜甫儀器廠產(chǎn)品;XYJ80-20型離心機(jī),金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;XW-80A型旋渦混勻器,上海精科實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品;ZY12306型微量加樣器,Scientific產(chǎn)品。1.3模型分組及給藥將小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、腦復(fù)康組及當(dāng)歸多糖低、中、高劑量組共6組,每組12只。除空白對(duì)照組外,其余各組每日腹腔注射D-半乳糖120μg/g和亞硝酸鈉90μg/g,聯(lián)合給藥制備老年癡呆小鼠模型;空白對(duì)照組腹腔注射等體積的生理鹽水,連續(xù)30d。30d后,腹腔注射同時(shí),腦復(fù)康組灌胃給腦復(fù)康200μg/g,當(dāng)歸多糖高、中、低劑量組則依次灌胃給當(dāng)歸多糖400,200和100μg/g;模型對(duì)照組及空白對(duì)照組灌服等體積的生理鹽水,連續(xù)6周。斷頭處死小鼠,取大腦用冷生理鹽水沖洗,剝?nèi)〈竽X組織,用生理鹽水制成100g/L腦勻漿,3000rpm/min低溫離心10min,取上清液備用。1.4ache活性測(cè)定定磷法分別比色測(cè)定Ca2+濃度及Ca2+-AT-Pase、Ca2+Mg2+-ATPase活性;對(duì)稱三硝基苯(TNB)比色測(cè)定AchE活性;考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)蛋白定量。檢測(cè)步驟嚴(yán)格遵照試劑盒說明書。1.5組間比較方法采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義與空白對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組小鼠腦組織Ca2+濃度升高,Ca2+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase活性下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比,當(dāng)歸多糖各劑量組腦組織Ca2+濃度降低,Ca2+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase活性增高,尤其中、高劑量組Ca2+Mg2+-ATPase活性提高更為明顯,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);與腦復(fù)康組對(duì)比,高劑量組較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。2.2多糖對(duì)ache活性的影響與空白對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組小鼠腦組織AchE活性升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比,當(dāng)歸多糖各劑量組AchE活性降低(P<0.05或P<0.01);與腦復(fù)康組對(duì)比,僅高劑量組較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。3中藥多糖對(duì)老年癡呆模型小鼠腦ca2+-atpase活性的影響老年性癡呆是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病。目前有關(guān)癡呆的學(xué)說很多,如鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)、膽堿能神經(jīng)損害、自由基損傷、基因突變、能量代謝障礙、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、淀粉樣蛋白(Aβ)沉積等。鈣穩(wěn)態(tài)失衡學(xué)說認(rèn)為:鈣在神經(jīng)元的發(fā)育、突觸間傳遞、神經(jīng)可塑性、各種代謝通道的調(diào)節(jié)中承擔(dān)著信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重任。但是隨著細(xì)胞老化,細(xì)胞內(nèi)能量代謝水平下降,維持細(xì)胞膜電位所必需的三磷酸腺苷依賴性膜運(yùn)輸減少,使離子通道受損,進(jìn)而引起一系列的可能在老年癡呆發(fā)病中起作用的變化Ca2+的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)受到影響,Ca2+緩慢持續(xù)內(nèi)流,細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平增高,產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)鈣過負(fù)荷。膽堿能神經(jīng)損傷學(xué)說則認(rèn)為:老年癡呆者海馬及額葉的膽堿能神經(jīng)元易受損害使乙酰膽堿產(chǎn)生缺陷。膽堿能神經(jīng)元發(fā)生損害后,可能會(huì)引起突觸減少甚至喪失,引起認(rèn)知、記憶等多方面的功能障礙。腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的退變被認(rèn)為是造成AD的最重要病理因素之一。在阿爾茨海默病患者腦中,基底前腦的膽堿神經(jīng)細(xì)胞明顯丟失,膽堿能神經(jīng)纖維退變,患者腦脊液和腦組織中膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶、AchE在腦內(nèi)的表達(dá)出現(xiàn)異常,乙酰膽堿的合成、釋放、攝取等功能亦下降。針對(duì)上述兩種學(xué)說,已有研究證實(shí):當(dāng)歸可提高D-半乳糖所致老年癡呆模型小鼠腦細(xì)胞膜的Ca2+-ATPase的活性,提示當(dāng)歸通過增加Ca2+-ATPase活性而降低細(xì)胞鈣的含量;中藥多糖對(duì)老年癡呆模型小鼠膽堿能神經(jīng)損傷具有修復(fù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組對(duì)比,D-半乳糖和亞硝酸鹽致老年癡呆小鼠模型的腦組織Ca2+含量和AchE活性升高、Ca2+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase活性降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型對(duì)照組對(duì)比,當(dāng)歸多糖高劑量組腦組織Ca2+含量及AchE活性降低,腦組織Ca2+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase活性提高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0