當(dāng)歸提取物檢測方法

當(dāng)歸提取物的檢測方法當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis（Oliv.）Diels的干燥根。2005版《中國藥典》收載的含量測定方法為高效液相色譜法，以阿魏酸為對(duì)照品。文獻(xiàn)報(bào)道的當(dāng)歸及其制劑的含量測定方法主要為高效液相色譜法、薄層掃描法等?，F(xiàn)就其含量測定方法作一介紹。

一、高效液相色譜法

⑴2005版《中國藥典》當(dāng)歸含量測定項(xiàng)下：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.085%磷酸溶液（17：83）為流動(dòng)相，檢測波長為316nm；柱溫為35℃。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

供試品溶液的制備取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.2克，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

⑵文獻(xiàn)報(bào)道的方法

文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC條件：流動(dòng)相一般為乙腈-磷酸溶液，還有水-冰醋酸-正丁醇、乙腈-磷酸二氫鉀溶液、乙腈（甲醇）-醋酸溶液等。檢測波長一般為313nm，也有320nm、325nm等。現(xiàn)具體舉幾例非藥典方法。

羅秀瓊等測定生乳靈中阿魏酸的含量。高效液相色譜儀：日本島津LC-10AT；色譜柱：HYPERILODSC18柱(5.0×250mm，5μm)；流動(dòng)相：水-冰醋酸-正丁醇(347：1：5)；流速1.5ml/min；檢測波長：313nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μl。，阿魏酸在0.12μg～1.0μg的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4OOO。樣品溶液的制備：精密量取本品50ml，加鹽酸(0.1mol/L)40ml，攪拌，移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次45ml，合并提取液，加2％碳酸鈉液40ml提取，分取碳酸鈉層，用鹽酸(2.0mol/L)調(diào)pH至2～3，移至50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

蔣心惠等測定普藏紅膠囊中阿魏酸的含量。島津LC-3A液相色譜儀，SPD-1型紫外檢測器及C-R1A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)；Rheodyne7725型液相色譜進(jìn)樣器；色譜柱為BondapakODS柱(250mm×4.6mm，10μm)；流動(dòng)相甲醇-水(20：80)，磷酸調(diào)pH3.0)；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長300nm。樣品溶液的制備：取本品裝量差異下混勻的內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50ml具塞離心管中，精密加人2％碳酸鈉溶液10ml，稱重，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用2％碳酸鈉溶液補(bǔ)足減失的重量。離心，精密吸取上清液5.0ml置具塞離心管中，加入乙醚25ml，機(jī)械旋混5min，離心，棄去乙醚層，重復(fù)操作3次，用稀鹽酸調(diào)水層pH為1，輕搖至無大量氣泡產(chǎn)生時(shí)，加入乙醚2.5ml，機(jī)械旋混5min，離心，吸取乙醚層，重復(fù)操作4次。合并乙醚層，置具塞1Oml尖底離心管中，空氣流揮去乙醚，精密加人甲醇1.0ml溶解殘?jiān)?，即得?/p>

二、毛細(xì)管電泳法

采用毛細(xì)管電泳法測定當(dāng)歸及其制劑中阿魏酸的含量，文獻(xiàn)報(bào)道較多。實(shí)驗(yàn)條件比較多，現(xiàn)舉幾例。

翟淮敏采用毛細(xì)管電泳法測定當(dāng)歸及其制劑中阿魏酸的含量?？招娜廴谑⒚?xì)管(75μm×10cm)，10mmol/L硼砂溶液為電泳介質(zhì)，30kV運(yùn)行電壓，溫度25℃，重力進(jìn)樣5s，檢測波長214nm。阿魏酸在5～100μg/ml范圍內(nèi)，可定量檢測?；貧w方程為：Y=-7.735+O.0263X，r=0.9993，精密度試驗(yàn)RSD為2.59％，樣品重復(fù)性RSD為1.20％，三種樣品含量的RSD為2.29％。樣品溶液的配制：精密稱取當(dāng)歸、八珍顆粒、養(yǎng)心氏細(xì)粉各3g，加入70％的乙醇約8ml，超聲振蕩提取30min。離心15min(3O00r／min)，殘?jiān)蒙鲜鎏崛∫合礈旌笾貜?fù)提取兩次。合并提取液至25ml量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)，并使其濃度為40μg/ml，加70％的乙醇定容至刻度，作為樣品溶液備用。

郭濤等采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法對(duì)當(dāng)歸中的有效成分阿魏酸和腺苷同時(shí)進(jìn)行含量測定。采用熔融石英毛細(xì)管柱(50μm×66.5cm，有效長度58cm)作為分離通道；以50mmol/L硼砂和10mmol/L去氧膽酸鈉并且含2％甲醇的溶液(pH9.6)為運(yùn)行緩沖液；運(yùn)行電壓24kV；毛細(xì)管柱溫20℃；檢測波長：210nm。以戊巴比妥鈉為內(nèi)標(biāo)，阿魏酸和腺苷分別在20～320μg/mL和10～160μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.998)；回收率分別為96.8％～97.4％和93.2％～95.0％；重復(fù)性試驗(yàn)RSD分別為4.7％和6.8％(n=5)。樣品溶液的配制：精密稱取60℃干燥的當(dāng)歸粉末2.0g，用6o％乙醇20mL超聲提取20min，3000r/min離心10min，取上清液，殘?jiān)ㄖ貜?fù)提取2次，合并上清液，減壓回收溶劑，用60％甲醇定容至10mL，再經(jīng)0.45μm濾膜濾過后得供試品溶液。

張藝等采用高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法對(duì)逍遙片及當(dāng)歸原藥材中所含阿魏酸進(jìn)行含量測定，以控制逍遙片的質(zhì)量及避免在生產(chǎn)過程中盲目投料。采用HP3D全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀對(duì)逍遙片及當(dāng)歸原藥材中的阿魏酸以橙皮苷為內(nèi)標(biāo)在波長為313am處進(jìn)行測定。電泳條件為：石英毛細(xì)管柱(75μm×65cm，有效長度56.5cm)；行緩沖液為20mmol/L硼砂溶液(25℃時(shí)pH=9.18)；分離電壓25kV；溫度為25℃。阿魏酸在5～100μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=26.47X-3.52，r=0.9999。平均回收率分別為99.0％，93.8％，96.0％；RSD分別為1.5％，1.8％，1.3％(n=3)。樣品溶液的配制：精密稱取當(dāng)歸原藥材0.500g，置小三角燒瓶中，加甲醇8mL，超聲20min，過濾，殘?jiān)约状?mL洗滌，再過濾，合并濾液，在濾液中加入內(nèi)標(biāo)溶液2mL并定容至10mL，以0.45μm濾膜過濾至樣品小瓶中備用。

三、薄層掃描法

此方法在阿魏酸的含量測定中應(yīng)用較少，雖然操作簡便，重現(xiàn)性好，但在操作中應(yīng)注意阿魏酸不穩(wěn)定，薄層展開后應(yīng)盡快完成掃描，否則影響含量測定效果。如：盧衛(wèi)平等測定養(yǎng)血當(dāng)歸精中阿魏酸含量。樣品測定波長323nm，參比波長365nm；狹縫1.25mm×1.25mm。掃描方法：鋸齒掃描