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3.3胚胎工程的應(yīng)用及前景胚胎工程技術(shù):胚胎移植體外受精胚胎分割胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)目前應(yīng)用較多的是:胚胎移植、胚胎分割、體外生產(chǎn)胚胎技術(shù)。1.胚胎移植——P74將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。一胚胎移植胚胎的來(lái)源:雌性動(dòng)物的早期胚胎或體外受精及其他方式得到的胚胎。供體:提供胚胎的個(gè)體。受體:接受胚胎的個(gè)體。受體的條件:同種、生理狀態(tài)相同。
胚胎移植實(shí)際上是生產(chǎn)胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代的過(guò)程。在胚胎工程中通過(guò)任何一項(xiàng)技術(shù),如轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精等技術(shù)獲得的胚胎,都必須移植給受體才能獲得后代。因此,胚胎移植又是胚胎工程其他技術(shù)的最后一道“工序”。2.胚胎移植的現(xiàn)狀和意義1)保持供體優(yōu)良特性(加速育種工作和品種改良)2)節(jié)約成本\費(fèi)用(大量節(jié)省購(gòu)買種畜的費(fèi)用);3)大規(guī)模繁殖(一胎多產(chǎn));4)
保存品種資源和保護(hù)瀕危物種;5)充分發(fā)揮雌性個(gè)體的繁殖潛力,縮短供體本身的繁殖周期。為什么胚胎移植能成功?移動(dòng)到任何一頭動(dòng)物子宮內(nèi)都能發(fā)育嗎?同種動(dòng)物發(fā)情排卵后,在一段時(shí)間內(nèi)供體\受體具有相同的生理環(huán)境為什么能收集到胚胎?早期胚胎一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)供體和受體會(huì)不會(huì)發(fā)生排斥/同種動(dòng)物之間基本上不排斥為什么移植的胚胎能保留供體雙親的特性?胚胎雖然與受體有生理和組織上的聯(lián)系,但遺傳特性不受受體的影響.生理學(xué)基礎(chǔ)3.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)P76胚胎移植的實(shí)質(zhì)胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)換,而胚胎本身的遺傳物質(zhì)并不發(fā)生改變,因此各種性狀均能保持其原來(lái)的優(yōu)良特性。思考與討論:P76
1、在胚胎移植操作中,怎樣才能使胚胎在移植前后所處的生理環(huán)境保持一致?例如,供、受體的發(fā)情時(shí)間要一致嗎?供體胚胎移入受體子宮的位置,應(yīng)與在供體內(nèi)的位置相同后相似嗎?答案:應(yīng)對(duì)供體和受體母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理,使它們的生理?xiàng)l件達(dá)到同步后一致,這樣才能使供體的胚胎移入受體后有相同或相似的生存條件,這是胚胎移植成功與否的關(guān)鍵。因此,必須做到供、受體母畜的發(fā)情時(shí)間一致。同時(shí)還要做到移入受體子宮胚胎的位置應(yīng)該與其在供體內(nèi)的位置相同或相似,移入胚胎一側(cè)的受體子宮對(duì)應(yīng)的卵巢必須有黃體存在。2、胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。你認(rèn)為這樣的概括正確嗎?
正確。4、胚胎移植的基本程序閱讀課本,思考胚胎移植的基本程序包括哪幾個(gè)步驟?P76(1)供體、受體的選擇和處理(2)配種或進(jìn)行人工授精(3)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存(4)胚胎移植(5)移植后的檢查(1)對(duì)供體、受體進(jìn)行選擇供體:遺傳性能和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的個(gè)體;受體:健康和正常繁殖能力的個(gè)體處理:同期發(fā)情具體做法:注射相關(guān)激素。(2)采集卵母細(xì)胞方法:超數(shù)排卵具體做法:注射促性腺激素(3)配種或人工授精精子來(lái)源:同種優(yōu)良的雄性動(dòng)物。(4)胚胎的收集在配種或輸精后第7天,用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)。
為什么在第7天進(jìn)行沖卵?(5)對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查你知道檢查的目的嗎?此時(shí)胚胎處于什么時(shí)期?(6)胚胎的保存或移植胚胎保存的條件是什么?胚胎為什么要保存?(7)胚胎的移植方法一:手術(shù)法具體做法:引出受體子宮和卵巢,將胚胎注入子宮角,縫合創(chuàng)口。方法二:非手術(shù)法將裝有胚胎的移植管送入受體母牛子宮的相應(yīng)部位,注入胚胎。(8)對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查(9)受體母牛產(chǎn)下胚胎移植的犢牛選擇供體母牛受體母?!诎l(fā)情處理……超數(shù)排卵供體公牛配種沖卵質(zhì)量檢查、培養(yǎng)胚胎移植妊娠檢查分娩(胚胎移植的犢牛)總結(jié):遺傳性狀優(yōu)秀健康有正常繁殖能力同種遺傳性能優(yōu)秀同期發(fā)情處理胚胎移植超數(shù)排卵【歸納總結(jié)】①該過(guò)程中兩次使用促性腺激素,第一次對(duì)受、供體進(jìn)行同期發(fā)情處理;第二次用于供體的超數(shù)排卵。②該過(guò)程中的兩次檢查:第一次對(duì)收集的胚胎進(jìn)行檢查;第二次對(duì)受體母牛是否妊娠進(jìn)行檢查。③產(chǎn)下的犢牛性狀取決于所用公牛和供體牛,性別取決于公牛提供何種類型的精子,二者與受體牛沒(méi)有關(guān)系。④沖卵的含義是從子宮中沖出胚胎,而非沖出卵子。胚胎移植成功與否要有兩個(gè)條件(1)胚胎移植一般應(yīng)在同種的雌性供體和受體之間進(jìn)行。(2)進(jìn)行胚胎移植的供體和受體的生理狀態(tài)要相同。二、胚胎分割閱讀課本,思考以下問(wèn)題:(1)胚胎分割的概念(2)胚胎分割特點(diǎn)(3)胚胎分割的理論基礎(chǔ)(4)胚胎分割操作過(guò)程1.概念:
采用顯微手術(shù)(機(jī)械方法)的方法將早期胚胎分割成2分胚,4分胚或8分胚,經(jīng)體內(nèi)或體外培養(yǎng)后植入受體,以得到同卵雙胎或同卵多胎的技術(shù)。2.特點(diǎn):
后代具有相同的遺傳物質(zhì),因此胚胎分割可以看做動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一。3、理論基礎(chǔ)
動(dòng)物胚胎細(xì)胞的全能性。所以胚胎分割的時(shí)期為:
囊胚或桑椹胚。4、選擇的胚胎:
發(fā)育良好的,形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。5、使用的主要儀器:
實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀。6、具體操作
用分割針或分割刀片將胚胎切開,吸出其中的半個(gè)胚胎,注入預(yù)先準(zhǔn)備好的空透明帶中,或直接將裸半胚移植給受體。.切幾份,之間關(guān)系,有什么方法,目前主要是2份,原因概念.切什么時(shí)期.注入空透明帶.半裸胚直接到受體選擇良好的桑椹胚或囊胚移入培養(yǎng)皿中,用分割針或分割刀片將其切開,吸出其中的半個(gè)胚胎注入透明帶中或直接移植給受體。基本過(guò)程:.半裸胚直接移植,均等,為什么只能2份.還存在什么問(wèn)題..性別鑒定2精子分離流程示意圖精子分離Chamber(二)早期胚胎的性別鑒定1、核型分析法:細(xì)胞遺傳學(xué)方法又稱為核型分析法。常采用切割胚,一半用于鑒定性別,一半用于冷凍或移植。其基本原理是取一部分細(xì)胞,先用秋水仙素處理,再固定染色,檢查性染色體,根據(jù)人色體中期的譜帶差異、Y染色體的大小及形態(tài)判斷性別,準(zhǔn)確率達(dá)100%。但過(guò)程復(fù)雜,且要求操作人員有豐富的經(jīng)驗(yàn)。胚
胎
性
別
鑒
定2、SRY—PCR鑒定法:從早期胚胎中取出一個(gè)或幾個(gè)卵裂球,用特異性引物擴(kuò)增SRY基因,能夠產(chǎn)生出擴(kuò)增DNA片段的胚胎即為雄性,反之為雌性。再把確定性別的胚胎移植到子宮。7、操作注意事項(xiàng):①對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí),要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。原因:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)一般到囊胚階段才出現(xiàn),它是發(fā)育為胚胎本身的基礎(chǔ)細(xì)胞,其他細(xì)胞為滋養(yǎng)細(xì)胞,只為胚胎和胎兒發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)。若分割時(shí)不能將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割,會(huì)出現(xiàn)含內(nèi)細(xì)胞團(tuán)多的部分正常發(fā)育的能力強(qiáng),少的部分發(fā)育受阻或發(fā)育不良,甚至不能發(fā)育等問(wèn)題。②胚胎分割的份數(shù)越多,操作的難度會(huì)越大,移植的成功率也越低。早期胚胎的體積很小,只有在顯微鏡下才能看到;再者,細(xì)胞數(shù)目是有限的。分割的份數(shù)越多,不但難以做到均等分割,每一份的細(xì)胞數(shù)會(huì)越少,而且作為囊胚期的胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞所受的影響會(huì)更大。因此,分割的份數(shù)越多,技術(shù)的難度會(huì)越大,移植后的恢復(fù)和發(fā)育的難度會(huì)越大,移植成功率自然會(huì)降低。8、胚胎分割技術(shù)的缺陷(1)剛出生動(dòng)物的體重偏低,毛色和斑紋還存在差異;(2)采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胎的可能性是有限的。9、胚胎分割技術(shù)的應(yīng)用:
為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、性別控制技術(shù)提供活胚材料。歸納小結(jié)三.胚胎干細(xì)胞閱讀課本,思考以下問(wèn)題:(1)什么是胚胎干細(xì)胞?簡(jiǎn)稱是什么?(2)胚胎干細(xì)胞的來(lái)源。(3)胚胎干細(xì)胞的特性。(4)胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用。提醒
試管嬰兒(動(dòng)物)技術(shù)為有性生殖,胚胎分割移植為無(wú)性生殖。胚胎移植是有性生殖還是無(wú)性生殖取決于胚胎是由受精卵形成的還是核移植技術(shù)形成重組細(xì)胞發(fā)育而成的。干細(xì)胞干細(xì)胞是一種具有多項(xiàng)分化潛能和自我復(fù)制、更新能力的原始未分化細(xì)胞,是形成哺乳類各種組織器官的祖宗細(xì)胞。多能、專能.全能細(xì)胞根據(jù)來(lái)源和個(gè)體發(fā)育過(guò)程中先后次序不同,干細(xì)胞可分為:胚胎干細(xì)胞和成體干
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