生化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

1、生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)第 小組制作成員：實(shí)驗(yàn)內(nèi)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容容實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)回回顧顧實(shí)驗(yàn)總結(jié)實(shí)驗(yàn)總結(jié)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)收收獲獲實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容移液管和微量可調(diào)式移液器的使用、校正與誤差分析一血清堿性磷酸酶活性測(cè)定三五血清葡萄糖濃度的測(cè)定（GOD-POD法）七質(zhì)粒DNA的提取九721E分光光度計(jì)的原理與操作聯(lián)系二血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離四酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制六血清GPT活性測(cè)定八DNA瓊脂糖凝膠電泳十血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳5實(shí)驗(yàn)二：721E分光光度計(jì)的原理與操作聯(lián)系 該實(shí)驗(yàn)要求掌握721E分光光度計(jì)的原理、結(jié)構(gòu)與操 作方法，以及學(xué)習(xí)末知溶液的濃度測(cè)定方法，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)制作CuSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得未知CuSO4溶液的濃度。 了

2、解Lambert-Beer定律定律： 吸光度吸光度（Absorbance）吸光系數(shù)吸光系數(shù)液層厚度液層厚度溶液濃度溶液濃度A=kLC 實(shí)驗(yàn)一：移液管和微量可調(diào)式移液器的使用、校正與誤差分析 該實(shí)驗(yàn)主要練習(xí)使用刻度移液管、微量可調(diào)式移液器，以及對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確度和精確度的評(píng)估，計(jì)算量具容量的校正值、實(shí)驗(yàn)三：血清堿性磷酸酶活性測(cè)定 堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ALP活性成正比。在PH=10的環(huán)境中，ALP催化磷酸苯二鈉水解 生成 苯酚和磷酸氫二鈉苯酚，苯酚與4-氨基安替比林反應(yīng)生

3、成色素原，該色素原經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌亞胺衍生物，測(cè)定紅色物質(zhì)的吸光度就可以計(jì)算酶活力的大小。 磷酸苯二鈉+H2O 苯酚+磷酸氫二鈉苯酚+4-氨基安替比林 紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀實(shí)驗(yàn)四：血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離 凝層層析柱中裝填著許多直徑小于1mm的凝層顆粒，顆粒內(nèi)部具有三維多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在洗脫過(guò)程中，混合物樣品流經(jīng)層析柱，大顆粒物質(zhì)因其直徑大于凝層網(wǎng)孔，不能進(jìn)入凝層顆粒內(nèi)部，只能沿著凝層顆粒的空隙隨溶劑流動(dòng)，流程短而移動(dòng)速度快，先流出層析柱；小顆粒組分由于其分子直徑小于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的孔徑，可進(jìn)入凝層顆粒內(nèi)部，流程長(zhǎng)而移動(dòng)速度慢，比大分子物質(zhì)后流出層析柱，分子大小不同的

4、混合物因此得到分離。實(shí)驗(yàn)五：血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳 血清中含有白蛋白、-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白等，各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組成、立體構(gòu)象、相對(duì)分子質(zhì)量、等電點(diǎn)及形狀不同，在電場(chǎng)中遷移速度不同。由表可知，血清中5種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)大部分低于pH值7.0，所以在pH=8.6的緩沖液中，它們都電離成負(fù)離子，在電場(chǎng)中向陽(yáng)極移動(dòng)。9實(shí)驗(yàn)六：酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制 競(jìng)爭(zhēng)性抑制是指分子結(jié)構(gòu)與底物相似的抑制劑可與底物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合酶的活性中心，抑制酶的活力。競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的抑制程度取決于抑制劑與酶的親和力及與底物的相對(duì)比例。 草酸與琥珀酸的分子結(jié)構(gòu)相似，是琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸

5、。在體內(nèi)，琥珀酸脫下的2H 經(jīng)電子傳遞鏈傳遞，最后與氧結(jié)合生成水，并釋放出能量。在體外則可用甲烯藍(lán)（藍(lán)色）作為受氫體，甲烯藍(lán)接受琥珀酸脫下的2H 而被還原為甲烯白（無(wú)色）。在甲烯蘭含量一定的條件下，藍(lán)色消退的快慢程度可指示琥珀酸脫氫酶的活力，因此，可依據(jù)藍(lán)色消退時(shí)間來(lái)判斷該酶活力被抑制的程度。實(shí)驗(yàn)七：血清葡萄糖濃度的測(cè)定（GOD-POD法） 葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）能將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放出過(guò)氧化氫。后者在過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）的作用下與色原性氧受體4-氨基安替比林偶聯(lián)酚縮合成紅色醌類化合物，即Trinder反應(yīng)。該紅色醌類化合物的生成量

6、與葡萄糖含量成正比。 酶法測(cè)定血清葡萄糖是以過(guò)氧化物酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法 葡萄糖葡萄糖+ O+ O +H+H OO葡萄糖酸葡萄糖酸+2H+2H O O 2H 2H O O +4-+4-氨基安替比林氨基安替比林+ +苯酚苯酚紅色醌類化合物紅色醌類化合物實(shí)驗(yàn)八：血清GPT活性測(cè)定-酮戊二酸也能與2,4-二硝基苯肼結(jié)合生成相應(yīng)的苯腙，在堿性條件下顯色。兩種苯腙的吸收光譜有差異，在250nm比色時(shí)，丙酮酸-2,4-二硝基苯腙的光密度值遠(yuǎn)較-酮氏二酸苯腙高。反應(yīng)30min后，-酮氏二酸量減少而丙酮酸量增加，在一定范圍內(nèi)，520nm處光密度增加的程度與反應(yīng)體系中丙酮酸和-酮氏二酸的摩爾比例呈線性關(guān)系。丙氨

7、酸+酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸 丙氨酸+2,4-二硝基苯肼 丙酮酸-2,4-二硝基苯腙+H OGTPOH-12實(shí)驗(yàn)九：質(zhì)粒DNA的提取 在含有SDS的堿性條件下，細(xì)菌細(xì)胞壁破裂，釋放出來(lái)的染色體DNA,質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)等都發(fā)生變性。當(dāng)加入酸性的醋酸鉀溶液將PH中和至中性時(shí)，質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，很快復(fù)性并溶解在溶液中。而染色體DNA由于相對(duì)分子量大難以復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通過(guò)離心，纏結(jié)的染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA，蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去，然后用酚/氯仿抽提進(jìn)一步除去少量殘留的蛋白質(zhì)，最后用乙醇沉淀獲得質(zhì)粒DNA.實(shí)驗(yàn)十：DNA瓊脂糖凝膠電泳 在pH 8

8、.08.3時(shí)，核酸分子的堿基幾乎不解離，磷酸基團(tuán)解離。核酸分子帶負(fù)點(diǎn)，在電泳時(shí)向正極移動(dòng)。采用適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，分子大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率呈現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離核酸片段并檢測(cè)其大小的目的。核酸分子中嵌入熒光染料如EB后，在紫外燈可觀察到不同核酸片段的區(qū)帶。 實(shí)驗(yàn)回顧1.在以往的多次實(shí)驗(yàn)中，我們小組各個(gè)成員分工明確，非常積極，保證實(shí)驗(yàn)成功完成 2.當(dāng)輪到我們組做PPT時(shí)，大家也都用心準(zhǔn)備，充滿熱情3.試驗(yàn)后大家會(huì)認(rèn)真思考老師留下的問(wèn)題，并且認(rèn)真對(duì)待每一次的實(shí)驗(yàn)報(bào)告優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)1.在實(shí)驗(yàn)中缺少自己的想法，只是照著書(shū)上或PPT上的步驟來(lái)做，有時(shí)候只想著快點(diǎn)做而不是想想自

9、己做的這一步的有什么作用和意義。2.在做PPT是只是做了大致的內(nèi)容，并沒(méi)有按老師建議的針對(duì)某個(gè)問(wèn)題做出研究，沒(méi)有達(dá)到預(yù)習(xí)和做PPT原本的 的3.每次實(shí)驗(yàn)還不夠認(rèn)真，有時(shí)會(huì)在一些細(xì)節(jié)上抱著消極的態(tài)度缺點(diǎn)缺點(diǎn)實(shí)驗(yàn)總結(jié)以及建議1.我們所做的這些實(shí)驗(yàn)，大部分都會(huì)接觸一些新的器材，了解了一些以前未見(jiàn)過(guò)的的器材，并掌握了它們的用法，同時(shí)也回顧了一些以前用過(guò)的儀器，消除了一些本來(lái)存在的對(duì)一些儀器的恐懼感2.了解了每次實(shí)驗(yàn)用的各種試劑的原理、作用機(jī)制，以及它們?cè)诟鱾€(gè)步驟加入時(shí)的作用3.實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容都是書(shū)上我們學(xué)過(guò)的內(nèi)容，通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們鞏固了書(shū)上的知識(shí)4.每次實(shí)驗(yàn)的成功完成都是小組成員一起努力的結(jié)果，并不是某一兩個(gè)人所能完成的5.每次實(shí)驗(yàn)都逐漸增強(qiáng)了我們的實(shí)際操作能力實(shí)驗(yàn)收獲SAYING通過(guò)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)和最后的分析討論，使我們掌握了一定的生化實(shí)驗(yàn)原理，且對(duì)于生化課本上的一些抽象知識(shí)有了更具體的理解，同時(shí)在思考的過(guò)程中也培養(yǎng)了一種對(duì)科學(xué)的敏