實(shí)驗(yàn)七 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定

1、實(shí)驗(yàn)七葉綠體色素的提取及理化性質(zhì)的鑒定一、目的1、學(xué)習(xí)應(yīng)用提取分離葉綠體色素的實(shí)驗(yàn)方法。2、驗(yàn)證葉綠素的理化性質(zhì)。3、了解葉綠體色素的熒光現(xiàn)象、皂化反應(yīng)等理化性質(zhì)。二、原理1、葉綠體色素：植物葉綠體色素主要有三類：1）葉綠素2）類胡蘿卜素3）藻膽素。高等 植物葉綠體中含有前兩類，藻膽素僅存在于藻類植物中。高等植物體內(nèi)葉綠素（chlorophyll兩種）主要有兩種：葉綠素a、b （簡寫為chla、chlb，其 結(jié)構(gòu)式見圖7-3），chla通常呈藍(lán)綠色，而chlb呈黃綠色，chlb是chla局部氧化的衍生物。 chla是chlb的三倍，二十世紀(jì)30年代，知道了葉綠素的分子結(jié)構(gòu)，50年代末期，人工合

2、成 了葉綠素a，其它色素也幾乎在同時(shí)發(fā)現(xiàn)。葉綠體中的類胡蘿卜素主要包括胡蘿卜素（carotene）和葉黃素（lutein）兩種，前者呈橙黃 色，后者呈黃色。葉黃素是胡蘿卜素的二倍。一般植物葉綠素是類胡蘿卜素的三到四倍； 胡蘿卜素：C40H56 （有a、8、Y三種同分異構(gòu)體）葉黃素：C40H54（OH）2 （同分異構(gòu)體很多）。2、理化性質(zhì)：這二大類四種色素都不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，如乙醇、丙酮等。通常用 80%的丙酮或丙酮：乙醇：水為4.5： 4.5： 1的混合液來提取葉綠素。按化學(xué)性質(zhì)來說，葉綠素是葉綠酸的酯，在堿的作用下，可使其酯鍵發(fā)生皂化作用，生成葉 綠酸的鹽，能溶于水，但由于它保留有M

3、g核的結(jié)構(gòu)，仍保持原來的綠色。而類胡蘿卜素中， 胡蘿卜素是不飽和的碳?xì)浠衔铮? 胡蘿卜素水解可生成2分子維生素A，葉黃素是由胡 蘿卜素衍生的二元醇，不能與堿發(fā)生皂化反應(yīng)，根據(jù)這一點(diǎn)，可以將葉綠素和類胡蘿卜素分 開。此外，葉綠素還可以在酸的作用下，其中的Mg被H所代替形成褐色的去Mg葉綠素： 去Mg葉綠素能與其他金屬鹽中的銅、鋅、鐵鹽等代H，又重新呈現(xiàn)綠色，比原來的綠色更 穩(wěn)定。根據(jù)這一原理可用醋酸銅處理來保存綠色標(biāo)本。3、功能：葉綠體色素的功能葉綠素和類胡蘿卜素都包埋在類囊體膜中，與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，組成色素蛋白復(fù)合體，根 據(jù)功能來區(qū)分，葉綠體色素可分為二類：（1）作用中心色素：葉綠素分子含

4、有一個(gè)卟啉環(huán)的“頭部”和一個(gè)葉綠醇的“尾部”呈蝌 蚪型，大卟啉環(huán)由四個(gè)小毗咯環(huán)以四個(gè)含有雙鍵的甲烯基（-CH=）連接而成。鎂原子居于卟 啉環(huán)的中央，偏向于帶正電荷，與其相聯(lián)的氮原子則偏向于帶負(fù)電荷，因而其“頭部”具有 極性，是親水的，可以與膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合；而其“尾部”是葉綠酸的雙羧基被甲醇和葉醇 所酯化后形成的脂肪鏈，具疏水親脂性，可以與膜上的雙卵磷脂層結(jié)合，因此，這決定了葉 綠素分子在類囊體膜上是有規(guī)則的定向排列。極少數(shù)具特殊狀態(tài)的chla分子，其卟啉環(huán)上 的共軛雙鍵易被光激發(fā)而使電子與電荷分離，引起光能轉(zhuǎn)化為電能的重要反應(yīng)，因此這些 chla分子是光合作用的重要色素，稱“作用中心色素”；

5、（2）天線色素（聚光色素）：沒有光化學(xué)活性，只有收集光能的作用，包括大部分chla和 全部chlb、胡蘿卜素、葉黃素。這些色素排列在一起，象漏斗一樣，把光傳遞集中到作用中 心色素，引起光化學(xué)反應(yīng)。類胡蘿卜素還是一種保護(hù)性色素，在光過強(qiáng)時(shí)，可耗散過剩激發(fā) 能，消除活性氧自由基，防止光合器官被氧化損傷。3、形成條件： 葉綠素的形成葉綠素在植物體內(nèi)，能不斷的進(jìn)行新陳代謝，如菠菜的葉綠素72小時(shí)更新95.8%；煙草19 天后更新50%，其合成與分解受植物遺傳控制（如吊蘭葉的白邊），也與環(huán)境關(guān)系密切。 高等植物的葉綠素形成可以分為兩個(gè)階段，第一個(gè)階段：主要是由a-酮戊二酸（或由其和 氨形成的谷氨酸）經(jīng)過

6、一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)合成葉綠素的前身物質(zhì)一無色的原葉綠酯；第 二個(gè)階段：原葉綠酯在光下被還原，成為綠色的葉綠素。葉綠素形成的條件光照光是葉綠素形成的必要條件，原葉綠素必須經(jīng)過光照后才能合成葉綠素。缺乏光照 或其他某些條件，影響葉綠素形成，使葉子發(fā)黃的現(xiàn)象，稱黃化現(xiàn)象。由于黃化部位，機(jī)械 組織不發(fā)達(dá)，肉質(zhì)細(xì)嫩，生產(chǎn)上常用于遮光培育韭黃、蒜黃、蔥白等；而光太強(qiáng)對葉綠素也 不利，會(huì)使葉綠素氧化、褪色、去鎂，并形成對膜有害的自由基。有些植物或植物部分無光照條件也能形成葉綠素，如松、柏，蓮子胚芽等，推測這些植物中 含有代替可見光促進(jìn)葉綠素合成的物質(zhì)。溫度溫度主要通過影響葉綠素合成酶的活性而影響葉綠素的合

7、成。一般葉綠素形成的最 低溫度為24C，最適26-30C左右，最高約40。早春植物幼芽、葉呈黃綠色，是低溫 影響了葉綠素的形成的緣故。礦質(zhì)營養(yǎng)礦質(zhì)元素對葉綠素形成也有很大影響。N和Mg是葉綠素的組成成分，F(xiàn)e、Mn、 Cu、Zn等在葉綠素合成過程中也是必不可缺少的元素，缺少這些元素會(huì)引起缺綠癥。特別 是氮素，植株體內(nèi)氮水平高低可影響葉綠色的深淺，生產(chǎn)上以此來判斷氮肥的豐缺。水分和氧氣植物缺乏水和O2,不僅抑制葉綠素的形成，還會(huì)促進(jìn)原有葉綠素的分解。 所以嚴(yán)重高溫、干旱缺水和澇害缺O(jiān)2時(shí)，葉子常表現(xiàn)黃色褪綠現(xiàn)象。由于葉綠素的形成受許多條件的影響，所以葉色是反映植物的營養(yǎng)情況和健康狀況的一個(gè)很 靈

8、敏的指標(biāo)，成為肥水管理和調(diào)控作物生長發(fā)育的依據(jù)之一。提?。喝~綠體色素為有機(jī)酯類化合物，根據(jù)相似相容原理，常用有機(jī)溶劑提取。如酒精、 丙酮、乙酸乙酯、氯仿等。分離：薄層層析法是將吸附劑均勻的涂抹在玻璃板上形成一薄層，將此吸附劑薄層作為固定 相，把待測分離的樣品溶液點(diǎn)在薄層板的下端，然后用一定量的溶劑作流動(dòng)相，將薄層板的 下端浸入到展開劑中。流動(dòng)相通過毛細(xì)管作用由下而上逐漸浸潤薄層板，并帶動(dòng)樣品在板上 也向上移動(dòng)，樣品中各組成分在吸附劑和展開劑之間發(fā)生連續(xù)不斷的吸附、脫吸附、再吸 附的過程。由于吸附劑對不同物質(zhì)的吸附能力大小不同，吸附能力強(qiáng)的物質(zhì)相對移動(dòng)慢 一些，兒媳婦能力弱的物質(zhì)相對移動(dòng)快一些，

9、從而使各組分有不同移動(dòng)速度而彼此分開。 葉綠體中含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大 類，這兩類色素都不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機(jī)溶劑提取.提取液可用色層分析的原理加以分離.因吸附劑對不同物質(zhì)的吸附力不同當(dāng)用適當(dāng)?shù)娜軇┩?動(dòng)時(shí)，混合物中各成分在兩相（流動(dòng)相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)所以它們的移動(dòng)速 度不同，經(jīng)過一定時(shí)間層析后,便將混合色素分離.葉綠素是一種二羧酸葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復(fù)雜酯,故可與堿起皂化反應(yīng)而生成 醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產(chǎn)生的鹽能溶于水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分 開；葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學(xué)

10、活性，葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài),激發(fā)態(tài)的葉綠 素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它變回到基態(tài)時(shí)可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光.葉綠素中的鎂可以被 H+所取代而成褐色的去鎂葉綠素,后者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在 光下不易破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標(biāo)本。葉綠素是一種有葉綠酸與甲醇形成的復(fù)合酯，故可發(fā)生皂化反應(yīng)。葉綠素化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn) 定，見光分解。葉綠素中的Mg可以被H+代而形成褐色的去鎂葉綠素，去鎂葉綠素遇銅則 變成銅帶葉綠色。紙層析法測定葉綠素紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動(dòng)相 和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上

11、吸附的水為固定相（濾紙纖維常能 吸20%左右的水），有機(jī)溶劑如乙醇等為流動(dòng)相，色素提取液為層析試樣。把試樣點(diǎn)在濾紙 的濾液細(xì)線位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管的作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進(jìn)通過 濾液細(xì)線時(shí)，試樣中各組份便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定相溶劑之間連續(xù) 一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)距離較遠(yuǎn)；分配比較小的 物質(zhì)移動(dòng)較慢，移動(dòng)距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達(dá)到分 離。葉綠素等是脂溶性的有機(jī)分子，根據(jù)相似相溶的原理，葉綠素等色素分子溶于有機(jī)溶劑而不 溶于有極性的水。故在研磨和收集葉綠色素時(shí)要用丙酮或乙醇等有機(jī)溶劑而不用

12、水。葉綠素分布于基粒的片層薄膜上，加入少許二氧化硅是為了磨碎細(xì)胞壁、質(zhì)膜、葉綠體被膜 和光合片成，使色素溶解于丙酮中。3.破碎的細(xì)胞中含有草酸等有機(jī)酸，葉綠素分子中含 有的Mg元素處于不穩(wěn)定化合態(tài)，鎂離子與有機(jī)酸結(jié)合將導(dǎo)致色素分子破壞。加入少許碳酸 鈣使得鈣離子與有機(jī)酸結(jié)合，減少鎂離子的轉(zhuǎn)移，防止研磨時(shí)葉綠體色素的破壞。所以在研 磨時(shí)加入適量的碳酸鈣，同時(shí)加入碳酸鈉的道理亦如此。在過濾時(shí)選用脫脂棉或紗布，而不用濾紙。原因主要有下：（1）色素分子比較大，不容易透 過濾紙；（2）濾紙有較強(qiáng)的吸附性而使色素吸附在濾紙上，從而降低色素濃度，影響實(shí)驗(yàn) 效果；（3）葉綠素是脂溶性，根據(jù)相似相容的原理，脫脂

13、棉可以減少實(shí)驗(yàn)過程中色素的流失， 增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)效果。根據(jù)物理學(xué)中的毛細(xì)現(xiàn)象，畫濾紙細(xì)線前濾紙必須經(jīng)過干燥處理，是為了阻 止水分子堵塞濾紙中的毛細(xì)管而影響層析液的擴(kuò)散。但如果用火烤的話，會(huì)使濾紙纖維變形 同時(shí)破壞啦毛細(xì)管，而影響層析液的擴(kuò)散。沿濾紙邊緣擴(kuò)散過快，而導(dǎo)致色素帶分離不整齊的現(xiàn)象。故而，在插入層析液的濾紙條一端 剪去兩個(gè)角。沿濾紙條向上的“壁流”而導(dǎo)致色素溶解。色素分離的原理：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中 各組分在；流動(dòng)相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定 相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機(jī)溶劑如乙醇等為流動(dòng)相，色素提

14、取液為層析試樣。 把試樣點(diǎn)在濾紙的濾液細(xì)線位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管的作用下，連續(xù)不斷地沿 著濾紙前進(jìn)通過濾液細(xì)線時(shí)，試樣中各組份便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定 相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)距離較遠(yuǎn)； 分配比較小的物質(zhì)移動(dòng)較慢，移動(dòng)距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上， 從而達(dá)到分離的目的。物理：葉綠素是植物進(jìn)行光合作用的主要色素是一類含脂的色素家族葉綠素，位于類囊體膜.葉綠素吸收大部分的紅光和紫光但反射綠光,所以葉綠素呈現(xiàn)綠色，它在光合 作用的光吸收中起核心作用.葉綠素為鎂卟啉化合物，包括葉綠素a、b、c、d、f以

15、及原葉綠 素和細(xì)菌葉綠素等.葉綠素不很穩(wěn)定，光、酸、堿、氧、氧化劑等都會(huì)使其分解.酸性條件下， 葉綠素分子很容易失去卟啉環(huán)中的鎂成為去鎂葉綠素.葉綠素有造血、提供維生素、解毒、 抗病等多種用途。化學(xué)性質(zhì)：高等植物葉綠體中的葉綠素主要有葉綠素a和葉綠素b兩種.它們不溶于水，而溶 于有機(jī)溶劑，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等.葉綠素a分子式：C55H72O5N4Mg；葉綠素葉綠素?zé)晒鈨x。b分子式：C55H70O6N4Mg.在顏色上,葉綠素a呈藍(lán)綠色，而葉綠素b呈黃綠色.按化學(xué)性質(zhì) 來說,葉綠素是葉綠酸的酯，能發(fā)生皂化反應(yīng).葉綠酸是雙羧酸,其中一個(gè)羧基被甲醇所酯化，另 一個(gè)被葉醇所酯化。高等植物葉綠體中的

16、葉綠素主要有葉綠素a和葉綠素b兩種。它們不溶于水，而溶于有機(jī) 溶劑，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。葉綠素a分子式：C55H72O5N4Mg；葉綠素 葉 綠素?zé)晒鈨xb分子式：C55H70O6N4Mg。在顏色上，葉綠素a呈藍(lán)綠色，而葉綠素b呈黃綠色。按化 學(xué)性質(zhì)來說，葉綠素是葉綠酸的酯，能發(fā)生皂化反應(yīng)。葉綠酸是雙羧酸，其中一個(gè)羧基被甲 醇所酯化，另一個(gè)被葉醇所酯化。葉綠素分子含有一個(gè)卟啉環(huán)的“頭部”和一個(gè)葉綠醇的“尾巴。鎂原子居于卟啉環(huán)的中央， 偏向于帶正電荷，與其相聯(lián)的氮原子則偏向于帶負(fù)電荷，因而卟啉具有極性，是親水的，可 以與蛋白質(zhì)結(jié)合。葉醇是由四個(gè)異戊二烯單位組成的雙萜，是一個(gè)親脂的脂肪鏈，它

17、決定了 葉綠素的脂溶性。葉綠素不參與氫的傳遞或氫的氧化還原，而僅以電子傳遞（即電子得失引 起的氧化還原）及共軛傳遞（直接能量傳遞）的方式參與能量的傳遞。卟啉環(huán)中的鎂原子可被氫離子、銅離子、鋅離子所置換。用酸處理葉片，氫離子易進(jìn)入葉綠 體，置換鎂原子形成去鎂葉綠素，使葉片呈褐色。去鎂葉綠素易再與銅離子結(jié)合，形成銅代 葉綠素，顏色比原來更穩(wěn)定。人們常根據(jù)這一原理用醋酸銅處理來保存綠色植物標(biāo)本。葉 綠醇是親脂的脂肪族鏈，由于它的存在而決定了葉綠素分子的脂溶性，使之溶于丙酮、酒精、 乙醚等有機(jī)溶劑中。由于在結(jié)構(gòu)上的差別，葉綠素a呈藍(lán)綠色，b呈黃綠色。在光下易被氧 化而退色。葉綠素是雙羧酸的酯，與堿發(fā)生

18、皂化反應(yīng)。 葉綠素不很穩(wěn)定，光、酸、堿、 氧、氧化劑等都會(huì)使其分解。酸性條件下，葉綠素分子很容易失去卟啉環(huán)中的鎂成為去鎂葉 綠素。葉綠素溶液能進(jìn)行部分類似光合作用的反應(yīng)，在光下使某些化合物氧化或還原。人工 制備的葉綠素膜在光下能產(chǎn)生光電位和光電流，也能催化某些氧化還原反應(yīng)。三、材料與方法1、材料：菠菜（Spinacia oleracea L.）2、方法：提取綠色葉片中的色素（1）取幾片綠色的葉片，去掉葉柄和主脈，用天平稱取5g葉片，剪碎，放入研缽中。（2）向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，進(jìn)行充分的研磨。用量筒量取5 ml丙酮，倒 入研缽中，迅速充分研磨。（3）將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進(jìn)行

19、過濾。將濾液收集到一個(gè)小試管中，及時(shí)用棉 塞將試管目塞緊。制備濾紙條：取一塊預(yù)先干燥處理過的定性濾紙，將濾紙剪成長10 cm、寬1cm的濾紙 條，在距濾紙條一端1cm處用鉛筆畫一條細(xì)的橫線。畫濾液細(xì)線、用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫出一條細(xì)而直的濾液細(xì)線。待濾 液于后，再畫23次。分離葉綠體中的色素：將3 mL層析液倒入燒杯中，將濾紙條（有濾液細(xì)線的一端朝下） 略微料靠著燒杯的內(nèi)壁，輕輕地插入到層析液中，隨后用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯；（注意，不能 讓濾紙上的濾液細(xì)線觸到層析液。紙層析法中所用的有機(jī)溶劑如丙酮等，一般有揮發(fā)性、并 有一定毒性，使用時(shí)要注意密封層析，避免吸入過多有害揮發(fā)物。）熒

20、光現(xiàn)象的觀察:取濃的葉綠體色素提取液化3ml,在透射光和反射光下觀察葉綠體色素提 取液的顏色。四、結(jié)果與分析結(jié)果：經(jīng)過10-15分鐘后，觀察分離后色素帶的分布。最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃 色為葉黃素，再下面藍(lán)綠色為葉綠素a，最后的黃綠色為葉綠素b。分析：紙層析法依據(jù)極性相似相容原理，是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，而以有機(jī)溶劑作 為流動(dòng)相。由于樣品中各物質(zhì)分配系數(shù)不同，因而擴(kuò)散速度不同，從而達(dá)到分離的目的。一 般用于葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素 b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散地快，反之則慢；含 量較多者色素帶也較寬

21、。最后在濾紙上留下4條色素帶，所以利用紙層析法能清楚地將葉 綠體中的色素分離。得圖片：熒光現(xiàn)象：在透射光下葉綠素提取液為藍(lán)綠色，在反射光下為紅色。五、討論與結(jié)論綠葉中的色素包括葉綠素（葉綠素a、葉綠素b）和類胡蘿卜素（胡蘿卜素、葉黃素），其 中葉綠素a呈現(xiàn)藍(lán)綠色,葉綠素b呈現(xiàn)黃綠色，胡蘿卜素呈現(xiàn)橙黃色，葉黃素呈現(xiàn)黃色。綠葉中的四種色素含量依次是：葉綠素a 葉綠素b 葉黃素胡蘿卜素（葉綠素a與葉綠素 b的比約為3 : 1,葉黃素與胡蘿卜素之比約2 : 1）。色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的色素分子隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，溶解度低的 色素分子隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢，因而可用層析液將不同色

22、素分離.四種色素的溶解度高 低依次為胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b。在濾紙條上出現(xiàn)四條寬度、顏色不同的色帶，從上到下依次為胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、 葉綠素b.在濾紙條上，兩色素帶間距離最大的是：胡蘿卜素與葉綠素b,兩色素帶間距離最小 的是：葉綠素a與葉綠素b,相鄰兩色素帶間距離最大的是：胡蘿卜素與葉黃素。網(wǎng)上查閱資料得到圖片：葉嫁紫b葉黃素-葉鍬素H-& 色葉綠素是植物進(jìn)行光合作用的主要色素是一類含脂的色素家族葉綠素，位于類囊體膜.葉綠素吸收大部分的紅光和紫光但反射綠光,所以葉綠素呈現(xiàn)綠色，它在光合 作用的光吸收中起核心作用.葉綠素為鎂卟琳化合物，包括葉綠素a、b、c、d、f以及原葉

23、綠 素和細(xì)菌葉綠素等.葉綠素不很穩(wěn)定，光、酸、堿、氧、氧化劑等都會(huì)使其分解.酸性條件下, 葉綠素分子很容易失去卟琳環(huán)中的鎂成為去鎂葉綠素.葉綠素有造血、提供維生素、解毒、 抗病等多種用途。得圖片：2.2.2熒光現(xiàn)象葉綠素濤液在透射光下呈綠色，在反射光下呈紅色的現(xiàn)象.述結(jié)果表明，應(yīng)用薄層層析法可以簡單、快速、高效地提取和分離天然色素。但由于葉綠素 很不穩(wěn)定，光、酸、堿、氧和氧化劑等都會(huì)使其分解。因此在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,應(yīng)在中性條件 和暗處（或弱光）進(jìn)行。L葉綠素a （呈藍(lán)綠色）葉綠素1-葉綠素b （呈黃綠色）葉綠體中的色素1類胡蘿卜素一 （含量:約占總雖 的 1/4）胡妙卜素（呈橙黃色）1-葉黃素

24、（呈黃色）（含量:約占總員 的 3/4）煎碎，加少在濟(jì)。2和CaC03提取色素：稱取5g綠邑葉片充分、迅過濾加1如1無水乙醇N 速研.一-邑素濾冷一棉塞封口制備濾紙條：取干燥處理過的定性濾紙，將其剪成長與宜略小于試管長與直徑的濾紙條并在一揣煎去兩在距這一端1皿處用鉛筆畫一條細(xì)的橫線|用毛細(xì)吸管吸取濾械畫濾液細(xì)線畫線IJ干燥后，重復(fù)畫23次分離邑素:將適量的層析液倒入試管中插入濾紙條（有濾液細(xì)線的一端朝下），隨后用棉塞塞緊試管管口葉綠素和其他色素顏色含量主要吸收光譜名禰與:嘵合作用 聯(lián)集橙黃色最少藍(lán)紫光胡蘿卜素吸收光能黃色較率藍(lán)紫龍葉黃素藍(lán)綠色最多紅光和藍(lán)紫光葉綠素a黃綠色較少紅光和藍(lán)紫光葉綠素

25、b六、文獻(xiàn)資料楊善元.葉綠素的提取純化方法J.化學(xué)通報(bào),1979, (3) :36-37.彭運(yùn)生，劉恩.關(guān)于提取葉綠素方法的比較研究J.北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1992,18(3):247-250.池春玉,丁國華,徐啟江.“葉綠素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)的一種方法J.生物學(xué)通 報(bào),2000,35(2):63-65.黃偉漲梅.葉綠素提取和分離實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)J.生物學(xué)通報(bào),2003,38(56)20-25.景嵐,周洪友，胡 俊，等.普通植物病理學(xué)教學(xué)研究及探索J.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì) 科學(xué)版),2008,10(1) :192-193.韋繼光，袁高慶,賴傳雅，等.普通植物病理學(xué)的教學(xué)內(nèi)容需緊跟學(xué)科發(fā)展步伐J.廣

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27、學(xué)報(bào),1992,18(3):247-250.馮愛青，胡秋孌,王蕊蕊.大葉黃楊葉綠素的提取及其穩(wěn)定性研究J.洛陽師范學(xué)院學(xué) 報(bào),2009,28(2):75-77.朱廣廉，鐘誨文,張愛琴.植物生理學(xué)試驗(yàn)M.北京:北京大學(xué)出版社,1990.楊敏文.快速測定植物葉片葉綠素含量方法的探討J.光譜實(shí)驗(yàn)室,2002,19(4):478-481.吳榮金,林澤浩，陳鍵，等.鳳眼蓮葉葉綠素的提取及其性質(zhì)的穩(wěn)定性J.儀器儀表與分析監(jiān) 測,2007(1):32-33.曾家豫，楊國兵，張繼，等.紫堇葉綠素穩(wěn)定性的研究J.食品工業(yè)科技,2008,29(1):241-244.李清文,簡在友，孟麗.金銀花藤提取液對白金針菇菌

28、絲生長發(fā)育的影響J.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科 技,2007(2):53-54.作業(yè)1、葉綠體色素的提取及其理化性質(zhì)觀察依據(jù)的原理是什么色素分離的原理：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中 各組分在；流動(dòng)相和固定相的分配比(溶解度)的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定 相(濾紙纖維常能吸20%左右的水)，有機(jī)溶劑如乙醇等為流動(dòng)相，色素提取液為層析試樣。 把試樣點(diǎn)在濾紙的濾液細(xì)線位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管的作用下，連續(xù)不斷地沿 著濾紙前進(jìn)通過濾液細(xì)線時(shí)，試樣中各組份便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定 相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)距離較遠(yuǎn)； 分配比較小的物質(zhì)移動(dòng)較慢，移動(dòng)距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置